發(fā)布時(shí)間：2018-05-27 16:23

  本文選題：偽狂犬病毒 + 變異株��； 參考：《中國動物傳染病學(xué)報(bào)》2017年03期

【摘要】：為制備偽狂犬病病毒變異株gE蛋白的單克隆抗體,PCR擴(kuò)增偽狂犬病病毒gE蛋白主要抗原表位區(qū)的基因片段,并將其克隆至原核表達(dá)載體p Cold-TF。經(jīng)1 mmol/L IPTG低溫誘導(dǎo),表達(dá)了約90 k Da的gE融合蛋白。融合蛋白用鎳離子金屬親和層析柱純化后,免疫6周齡BALB/c雌性小鼠,經(jīng)細(xì)胞融合和篩選,獲得了2株穩(wěn)定分泌抗gE蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞(5B2和6E6)。間接免疫熒光試驗(yàn)(indirect immunofl uorescence assay,IFA)顯示2株單克隆抗體均能與PRV變異株(JS-2012)反應(yīng),但與gE缺失的疫苗毒Bartha-K61株無反應(yīng)。Western blot結(jié)果顯示5B2和6E6與gE蛋白不反應(yīng),提示2株單克隆抗體針對的可能是gE蛋白的構(gòu)象表位。本研究獲得的gE蛋白單克隆抗體為偽狂犬病病毒變異株的鑒定與功能研究以及野毒株和疫苗株的鑒別診斷提供了良好的工具。
[Abstract]:In order to prepare the monoclonal antibody against GE protein of pseudorabies virus variant strain, the gene fragment of the main epitope of GE protein of pseudorabies virus was amplified by PCR and cloned into prokaryotic expression vector pCold-TF. After 1 mmol/L IPTG induction, 90 kDa GE fusion protein was expressed. The fusion protein was purified by nickel ion affinity chromatography and immunized with 6-week-old BALB/c female mice. Two hybridoma cells secreting monoclonal antibodies against GE protein were obtained by cell fusion and screening. Indirect immunofluorescence assay (IFA) showed that both monoclonal antibodies could react with PRV variant strain JS-2012, but not with Bartha-K61 strain of GE deficient vaccine virus. Western blot results showed that 5B2 and 6E6 did not react with GE protein. These results suggest that the two McAbs may target the conformational epitopes of GE protein. The monoclonal antibody to GE protein obtained in this study provides a good tool for the identification and functional study of pseudorabies virus variants and the differential diagnosis of wild and vaccine strains.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所;江蘇高校動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：上海市閔行區(qū)人才發(fā)展專項(xiàng)基金 上海市自然科學(xué)基金項(xiàng)目(14ZR1448900) 上海市科技興農(nóng)重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目(滬農(nóng)科攻字(2015)第1-7號,滬農(nóng)科攻字(2016)第4-2號) 國家生豬現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目(CARS-36)
【分類號】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：1942913