應用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與流感病毒PB2蛋白相互作用的宿主蛋白
本文選題:流感病毒 + PB蛋白。 參考:《中國預防獸醫(yī)學報》2017年01期
【摘要】:流感病毒PB2蛋白可以作用于病毒mRNA轉錄起始階段,輔助病毒mRNA引物的合成,并能夠影響病毒的宿主范圍,參與禽流感病毒在哺乳動物宿主體內(nèi)的適應過程。本研究利用2009甲型H1N1流感病毒PB2蛋白作為"誘餌"蛋白,通過經(jīng)典酵母雙雜交系統(tǒng)篩選由Calu-3、A549、THP-1和U251 4種細胞構建的cDNA文庫,篩選到多個與PB2蛋白相互作用的宿主蛋白。針對其中篩選到的一種宿主蛋白FHL2,進行免疫共沉淀(Co-IP)和激光共聚焦(Confocal)試驗,證實了PB2蛋白和FHL2蛋白二者之間存在相互作用,并且轉染瞬時過表達FHL2發(fā)現(xiàn)該蛋白可以負調控流感病毒復制,為進一步研究PB2蛋白與FHL2蛋白互作及影響病毒復制的分子機制奠定了基礎。
[Abstract]:Influenza virus PB2 protein can act on the initial stage of viral mRNA transcription, assist the synthesis of virus mRNA primers, affect the host range of the virus, and participate in the adaptation process of avian influenza virus in mammalian host. In this study, the PB2 protein of 2009 H1N1 influenza virus was used as the "bait" protein, and the cDNA library constructed from four kinds of cells, Calu-3A549THP-1 and U251, was screened by the classical yeast two-hybrid system, and several host proteins interacting with PB2 protein were screened out. A host protein, FHL2, was identified by co-immunoprecipitation (Co-IP) and laser confocal assay, which confirmed the interaction between PB2 protein and FHL2 protein. The transient overexpression of FHL2 showed that the protein could negatively regulate influenza virus replication, which laid a foundation for further study on the interaction between PB2 protein and FHL2 protein and the molecular mechanism affecting virus replication.
【作者單位】: 中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術國家重點實驗室/農(nóng)業(yè)部動物流感重點實驗室;甘肅農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院;
【基金】:國家自然科學基金(31472215、31521005)
【分類號】:S852.65
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,本文編號:1937158
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