本文選題：空腸彎曲菌 + 間接ELISA�。� 參考：《中國畜牧獸醫(yī)》2017年12期

【摘要】：為了建立檢測血清中空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni)抗體的間接ELISA方法,試驗通過PCR擴(kuò)增并克隆空腸彎曲菌PEB1A基因,構(gòu)建原核表達(dá)載體pET32a-PEB1A,將該表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,誘導(dǎo)表達(dá)獲得約47ku的可溶性目的蛋白,通過Western blotting證明所表達(dá)的重組蛋白具有良好的生物學(xué)活性。以純化后的重組蛋白作為包被抗原,建立空腸彎曲菌抗體間接ELISA方法,對其特異性、敏感性、重復(fù)性進(jìn)行檢測。結(jié)果表明,本試驗建立的空腸彎曲菌抗體間接ELISA檢測方法臨界值為0.3424,本方法僅與空腸彎曲菌陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng),與其他抗血清無交叉反應(yīng),具有較強(qiáng)的特異性,批內(nèi)、批間的重復(fù)性試驗變異系數(shù)均5%,具有較好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。該方法的建立可應(yīng)用于血清中空腸彎曲菌抗體的快速檢測,為進(jìn)一步防制空腸彎曲菌腹瀉提供依據(jù)。
[Abstract]:In order to establish an indirect ELISA method for detecting the antibody of Campylobacter jejuni in serum, the PEB1A gene of Campylobacter jejuni was amplified and cloned by PCR, and the prokaryotic expression vector pET32a-PEB1A was constructed, and the expression vector was transformed into the BL21 (DE3) receptive cell of Escherichia coli and the expression of soluble target protein of about 47ku was obtained. The recombinant protein expressed by Western blotting proved to have good biological activity. The purified recombinant protein was used as the envelope antigen to establish an indirect ELISA method for the antibody of Campylobacter jejuni, and its specificity, sensitivity and repeatability were detected. The results showed that the indirect ELISA detection method for the antibody of Campylobacter jejuni was established in this experiment. The boundary value is 0.3424. This method is only specific to the positive sera of Campylobacter jejuni, and has no cross reaction with other antiserum. It has strong specificity. In batch, the variation coefficient of repeated test in batch is 5%, and has good repeatability and stability. The method can be applied to the rapid detection of the antibody of Campylobacter jejuni in serum. To provide basis for further prevention of Campylobacter jejuni diarrhea.
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所;吉林省人獸共患病預(yù)防與控制重點(diǎn)實驗室;
【基金】：國家重點(diǎn)研發(fā)項目“寵物疾病診療與防控新技術(shù)”(2016YFD0501004)
【分類號】：S852.61

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本文編號：1937073