本文選題：O型口蹄疫病毒 + 噬菌體展示��； 參考：《中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院》2015年碩士論文

【摘要】：口蹄疫是一種急性、烈性、高度接觸性傳染病,由口蹄疫病毒感染所引起。包括豬、牛等在內(nèi)的偶蹄獸動(dòng)物動(dòng)物為其易感宿主,對(duì)全球的畜牧業(yè)造成了巨大的損失�？谔阋叻譃镺、A、C、AsiaⅠ、SAT-1、SAT-2和SAT-3七個(gè)血清型。其中,O型口蹄疫是全球最主要的流行亞型。近幾年來在我國及周邊國家多次爆發(fā)O型口蹄疫,造成了重大經(jīng)濟(jì)損失。這迫切要求我們高度重視O型口蹄疫的流行,并加快O型口蹄疫的基礎(chǔ)研究和防控技術(shù)的開發(fā)。駱駝科動(dòng)物的血清中除了存在常規(guī)抗體外,還存在天然缺失輕鏈的重鏈抗體。重鏈抗體的重鏈可變區(qū),被稱為單域抗體或者納米抗體,可獨(dú)立行使其抗原結(jié)合能力。單域抗體具有物理化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、可溶性好、分子量較小、易于改造、易于在微生物系統(tǒng)中表達(dá)等優(yōu)點(diǎn),現(xiàn)已被應(yīng)用于腫瘤診斷、疾病治療、藥物開發(fā)等領(lǐng)域中。在本項(xiàng)研究中,我們使用O型口蹄疫滅活苗免疫雙峰駝,構(gòu)建了抗O型口蹄疫病毒的單域抗體噬菌體展示免疫文庫。經(jīng)測(cè)定,文庫容量為1.2×108。經(jīng)過四輪淘選,測(cè)序得到兩株單域抗體序列,分別命名為sdAb-1和sdAb-2。目的片段擴(kuò)增后經(jīng)過酶切后與pSMK載體連接,構(gòu)建pSMK-sdAb-1和pSMK-sdAb-2原核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(coden plus)。經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè),重組sdAb-1和sdAb-2得到了表達(dá)。重組蛋白使用樹脂親和層析方法進(jìn)行純化。雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示這兩株抗體對(duì)O型口蹄疫病毒具有特異性結(jié)合的能力。表面等離子共振實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明這兩株單域抗體與O型口蹄疫病毒抗原的平衡解離常數(shù)為8.24×10-9和6.23×10-9,屬于高親和力抗體。間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示量子點(diǎn)標(biāo)價(jià)的單域抗體可用于檢測(cè)BHK-21細(xì)胞中的口蹄疫病毒。此外,還進(jìn)行了磁珠標(biāo)記的單域抗體在O型口蹄疫的PCR和ELSIA的檢測(cè)方法中應(yīng)用的初步探索。
[Abstract]:Foot-and-mouth disease (FMD) is an acute, acute and highly contagious disease caused by foot-and-mouth disease virus infection. Cloven-hoofed animals, including pigs and cattle, are susceptible hosts, causing huge losses to animal husbandry around the world. Foot-and-mouth disease (FMD) is divided into seven serotypes of Acanthopsis 鈪，

本文編號(hào)：1900653