本文選題：豬 + DDX　； 參考：《中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年11期

【摘要】：根據(jù)已知人、小鼠、牛、雞、犬和恒河猴等物種的DEAD-box解旋酶1(DEAD-box helicase 1,DDX1)基因mRNA序列設(shè)計(jì)引物,從豬腎傳代細(xì)胞系(PK-15)中克隆DDX1基因編碼區(qū)(CDs)序列,對該基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析、組織表達(dá)譜分析。進(jìn)一步將豬DDX1基因CDs序列克隆至真核表達(dá)載體pCMV-Tag2B,構(gòu)建的重組真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染PK-15細(xì)胞后運(yùn)用Western blot和間接免疫熒光試驗(yàn)檢測DDX1基因的真核表達(dá)。結(jié)果顯示:成功克隆了豬DDX1基因的cDNA序列(GenBank登錄號為KU522467),其開放讀碼框全長為2 223bp,編碼740個(gè)氨基酸;與牛、雞、黑猩猩、犬、人、小鼠、大鼠和恒河猴的氨基酸序列同源性分別為98.8%、93.5%、97.6%、98.8%、97.7%、97.0%、97.6%和97.8%。表達(dá)譜分析表明,豬DDX1mRNA在不同組織中的表達(dá)水平存在差異,表現(xiàn)為脂肪、肝臟和脾臟中高表達(dá),而在胃、心臟和肌肉中表達(dá)較低。成功構(gòu)建了豬DDX1基因真核表達(dá)質(zhì)粒,經(jīng)證實(shí)目的基因可以在真核細(xì)胞中特異性表達(dá),且表達(dá)的DDX1蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)中,少量定位于細(xì)胞核中。結(jié)果表明:本試驗(yàn)克隆了豬DDX1基因的序列,分析了其在不同組織的表達(dá)規(guī)律,并構(gòu)建了DDX1基因重組表達(dá)質(zhì)粒,為該基因下一步的功能學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:According to the mRNA sequence of DEAD-box helicase 1(DEAD-box helicase 1 (DDX1) gene of known human, mouse, cattle, chicken, dog and rhesus monkey species, primers were designed to clone the sequence of DDX1 gene coding region from porcine kidney passage cell line PK-15, and to analyze the gene by bioinformatics. Tissue expression profile analysis. The CDs sequence of porcine DDX1 gene was further cloned into eukaryotic expression vector pCMV-Tag2B. the recombinant eukaryotic expression plasmid was transfected into PK-15 cells, and the eukaryotic expression of DDX1 gene was detected by Western blot and indirect immunofluorescence assay. The results showed that the cDNA sequence of porcine DDX1 gene was cloned successfully with the accession number of KU522467, and its open reading frame was 22 23 BP, encoding 740 amino acids with cattle, chicken, chimpanzee, dog, human, mouse, cattle, chicken, chimpanzee, dog, human and mouse. The amino acid sequence homology of rat and rhesus monkey was 98.8 and 93.50.The amino acid sequence of rat and rhesus monkey were 98.8% and 97.5% respectively. The amino acid sequence of rat and rhesus monkey were 97.6% and 97.8%, respectively. The expression level of porcine DDX1mRNA was different in different tissues, showing high expression in fat, liver and spleen, but low expression in stomach, heart and muscle. The eukaryotic expression plasmid of porcine DDX1 gene was successfully constructed. It was proved that the target gene could be specifically expressed in eukaryotic cells, and the expressed DDX1 protein was mainly located in the cytoplasm and a little in the nucleus. The results showed that the sequence of porcine DDX1 gene was cloned, the expression patterns of porcine DDX1 gene in different tissues were analyzed, and the recombinant expression plasmid of DDX1 gene was constructed, which laid a foundation for the further functional study of the gene.
【作者單位】： 武漢生物工程學(xué)院應(yīng)用生物技術(shù)研究中心;湖北省病毒載體工程技術(shù)研究中心;華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31402181)
【分類號】：S828

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本文編號：1895796