發(fā)布時(shí)間：2018-05-12 16:46

  本文選題：副豬嗜血桿菌 + PotD蛋白��； 參考：《中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)》2017年08期

【摘要】：為研究副豬嗜血桿菌Pot D蛋白的免疫保護(hù)效力,本研究以副豬嗜血桿菌SC1401菌株的基因組DNA為模板,PCR擴(kuò)增去除信號(hào)肽編碼序列后的potD基因部分片段,將其克隆于pET-28a(+)載體中,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-potD,并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),超聲破碎后SDS-PAGE分析目的蛋白表達(dá)形式。純化后的蛋白以每只50 g的劑量免疫2周齡的BALB/c小鼠,同時(shí)設(shè)置SC1401全菌滅活疫苗組、生理鹽水對(duì)照組及佐劑對(duì)照組,一免后第14天進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫,二免后第14天斷尾采血進(jìn)行抗體效價(jià)測(cè)定,并以5×LD50的SC1401野毒株攻毒,評(píng)價(jià)其免疫保護(hù)效力。結(jié)果顯示,目的蛋白的分子質(zhì)量為44.3 ku,主要以包含體形式存在;ELISA測(cè)定的Pot D蛋白的血清抗體效價(jià)(最高稀釋度為1∶20 000,P/N2.1),顯著高于SC1401全菌甲醛滅活苗(最高稀釋度1∶10 000)、生理鹽水對(duì)照組及佐劑對(duì)照組的血清抗體效價(jià)(P0.05)。攻毒后顯示Pot D蛋白組的保護(hù)力達(dá)80%,與SC1401全菌滅活疫苗組持平,遠(yuǎn)高于生理鹽水對(duì)照組及佐劑對(duì)照組。結(jié)果表明,Pot D重組蛋白能夠很好的激發(fā)小鼠體內(nèi)的免疫應(yīng)答,提供較好的免疫保護(hù)力,可以作為副豬嗜血桿菌病重組亞單位疫苗的候選抗原蛋白。
[Abstract]:In order to study the immuno-protective effect of Haemophilus parasuis Pot D protein, the genomic DNA of Haemophilus parasuis SC1401 strain was used as template to amplify part of the potD gene which was removed from the signal peptide coding sequence and cloned into pET-28a () vector. The recombinant expression plasmid pET-potDwas constructed and transformed into E. coli BL21DE3. The expression of the target protein was analyzed by SDS-PAGE after ultrasonic fragmentation. The purified protein was immunized with 50 g of each BALB/c mouse at the age of 2 weeks. At the same time, the whole SC1401 vaccine group, saline control group and adjuvant control group were immunized once on the 14th day after immunization. On the 14th day after the second immunization, the antibody titers were determined and the immune protective effect was evaluated with 5 脳 LD50 SC1401 wild strain. The results show that The molecular weight of the target protein was 44.3ku. the antibody titer of Pot D protein determined by Elisa in the form of inclusions was significantly higher than that of formaldehyde inactivated SC1401 vaccine (the highest dilution was 1:20 P / N 2.1g), and the highest dilution was 1:10 000g. The serum antibody titer of normal saline control group and adjuvant control group was P 0.05. The protective power of Pot D protein group was 80%, which was equal to that of SC1401 inactivated vaccine group, and was much higher than that of normal saline group and adjuvant control group. The results showed that Pot D recombinant protein could stimulate immune response in mice and provide better immune protection. It could be used as a candidate antigen protein for recombinant subunit vaccine of Haemophilus paraporus disease.
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院豬病研究中心;西南醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室;
【基金】：公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201303034)
【分類號(hào)】：S858.28

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 蔡旭旺 ,Simone Oliveira,Carlos Pijoan;副豬嗜血桿菌:診斷、流行病學(xué)和防制的新趨勢(shì)[J];國(guó)外畜牧學(xué)(豬與禽);2004年06期

2 萬(wàn)遂如;副豬嗜血桿菌感染[J];養(yǎng)豬;2005年01期

3 冼瓊珍;黃耿森;王淑敏;顧萬(wàn)軍;黃良宗;林雪玲;;副豬嗜血桿菌的分離鑒定[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2006年03期

4 章其琪;Anable Evans;;對(duì)副豬嗜血桿菌感染值得給予多大關(guān)注[J];國(guó)外畜牧學(xué)(豬與禽);2006年02期

5 竇守強(qiáng);羅滿林;李和平;;副豬嗜血桿菌感染的研究進(jìn)展[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2006年02期

6 寧建龍;;副豬嗜血桿菌的診斷和治療[J];養(yǎng)殖與飼料;2008年07期

7 趙金紅;韓瑞明;蔣安;高立芳;趙金艷;;副豬嗜血桿菌的研究進(jìn)展[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2008年05期

8 高鵬程;儲(chǔ)岳峰;趙萍;賀英;逯忠新;;副豬嗜血桿菌培養(yǎng)條件的篩選及對(duì)豚鼠的致病性試驗(yàn)[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2008年10期

9 苗立中;李峰;吳憶春;付強(qiáng);王艷;劉吉山;沈志強(qiáng);;兩株不同地區(qū)副豬嗜血桿菌的分離及分子生物學(xué)鑒定[J];中國(guó)動(dòng)物檢疫;2009年05期

10 姚曉輝;陳芳艷;陳瑞愛(ài);唐秀英;區(qū)德慶;吳詩(shī)敏;王林川;;廣東省部分豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌的分離與鑒定[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2009年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 胡明明;常月紅;張艷禾;司薇;謝芳;于申業(yè);劉慧芳;劉思國(guó);王春來(lái);;副豬嗜血桿菌“菌影”的制備[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國(guó)免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

2 孫清蓮;荊汝頂;畢征;郝付全;劉海林;;某豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌等病的診治報(bào)告[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十三次學(xué)術(shù)討論會(huì)和中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專業(yè)委員會(huì)第十二次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2005年

3 車勇良;陳少鶯;周倫江;王隆柏;魏宏;莊向生;;副豬嗜血桿菌的分離與鑒定[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

4 王東方;;副豬嗜血桿菌的診斷與治療[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第四次豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

5 朱杰儀;劉健;羅滿林;;副豬嗜血桿菌毒力基因的研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2009年

6 周宗清;鄒勇;王英;張春玲;蔣鳳英;;多重感染豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌的分離與鑒定[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2009年

7 周學(xué)利;蔡旭旺;陳煥春;徐曉娟;趙雅欣;陳品;張璇;;副豬嗜血桿菌的耐藥性研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)養(yǎng)豬學(xué)分會(huì)第五次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨養(yǎng)豬業(yè)創(chuàng)新發(fā)展論壇論文集[C];2010年

8 張瑜;鄭杰;張慶霞;喬彥良;趙玉軍;范國(guó)兵;;一例副豬嗜血桿菌的分離鑒定[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)生物制品學(xué)分會(huì)中國(guó)微生物學(xué)會(huì)獸醫(yī)微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)（第三屆中國(guó)獸藥大會(huì)學(xué)術(shù)論壇）論文集[C];2010年

9 何海健;陸國(guó)林;熊永忠;;浙江省副豬嗜血桿菌分離株的生物學(xué)特性[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國(guó)免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

10 尹秀鳳;王艷;姜平;;副豬嗜血桿菌的流行病學(xué)調(diào)查[A];第六屆全國(guó)會(huì)員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上）[C];2005年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 行唐縣獸醫(yī)防疫站 王金合;副豬嗜血桿菌和附紅細(xì)胞體混感的診治[N];河北科技報(bào);2011年

2 沙河市畜牧水產(chǎn)局 胡文英 付麗偉;豬瘟與副豬嗜血桿菌混感的綜合防控[N];河北科技報(bào);2014年

3 ;一例副豬嗜血桿菌和傳染性胸膜肺炎混合感染的治療心得[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2009年

4 ;一例副豬嗜血桿菌和傳染性胸膜肺炎混合感染的治療心得[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2009年

5 石家莊市行唐縣獸醫(yī)防疫站 王金合;副豬嗜血桿菌和附紅體混合感染咋治療[N];河北農(nóng)民報(bào);2011年

6 張偉;一例豬圓環(huán)病毒與副豬嗜血桿菌混合感染的診治[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2011年

7 譚海珍;鑒別豬跛行 對(duì)癥好防控[N];河南科技報(bào);2012年

8 石家莊市畜牧水產(chǎn)局 于振梅 郝立賓;豬流行性感冒、鏈球菌病、副豬嗜血桿菌混合感染的診治[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2007年

9 山東省沂水縣職教中心高級(jí)畜牧師 李連任　提供;豬：關(guān)節(jié)發(fā)病不要急 查找病因要仔細(xì)[N];河南科技報(bào);2010年

10 山東省沂水縣職教中心 李連任;春季謹(jǐn)防豬跛行性疾病[N];河北科技報(bào);2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 金卉;副豬嗜血桿菌感染和應(yīng)激相關(guān)基因的鑒定與功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

2 陳品;副豬嗜血桿菌耐藥性分子機(jī)制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 靳國(guó)旺;安陽(yáng)地區(qū)副豬嗜血桿菌的分離鑒定及蜂膠滅活苗的制備[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 付書(shū)林;副豬嗜血桿菌重要免疫原性相關(guān)蛋白發(fā)掘及GAPDH免疫調(diào)節(jié)機(jī)理研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

5 汪洋;副豬嗜血桿菌感染豬肺泡巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究與環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增法的建立[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

6 周明光;副豬嗜血桿菌新型免疫原性蛋白的發(fā)掘與鑒定及細(xì)胞毒素的鑒定與功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 都啟晶;副豬嗜血桿菌基因組表達(dá)文庫(kù)的構(gòu)建與其莢膜多糖輸出蛋白基因的篩選和免疫原性研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

8 蔡旭旺;副豬嗜血桿菌的分離鑒定及診斷方法與滅活疫苗的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

9 樂(lè)敏;副豬嗜血桿菌基因組學(xué)及毒力相關(guān)因子研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 李軍星;副豬嗜血桿菌分子流行病學(xué)調(diào)查及其HSP70對(duì)PRRSV結(jié)構(gòu)蛋白GP3/GP5的免疫協(xié)同作用研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 苗立中;副豬嗜血桿菌熒光定量PCR方法建立及其分離株高密度發(fā)酵研究[D];吉林大學(xué);2012年

2 張悅;副豬嗜血桿菌耐藥性調(diào)查及其對(duì)氟苯尼考耐藥分子機(jī)制的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

3 牛惠;副豬嗜血桿菌細(xì)胞致死膨脹毒素細(xì)胞毒性機(jī)制研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

4 米丁丹;副豬嗜血桿菌HbpA蛋白功能及其致病中作用的初步研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

5 陳凡杰;副豬嗜血桿菌HAPS_ 2096基因介導(dǎo)的天蠶素B抗性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 周杉杉;NOD1/2-RIP2信號(hào)通路參與副豬嗜血桿菌感染PK-15細(xì)胞調(diào)控機(jī)制的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 李雪梅;副豬嗜血桿菌nanH基因和at1基因的功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 劉佳;副豬嗜血桿菌細(xì)胞致死膨脹毒素對(duì)細(xì)胞和仔豬致病作用研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 姚文龍;人乳寡糖LSTa和血清型5副豬嗜血桿菌莢膜多糖重復(fù)單元的化學(xué)酶法合成研究[D];山東大學(xué);2015年

10 馮芬芬;CpxA/R雙組份系統(tǒng)在副豬嗜血桿菌應(yīng)對(duì)刺激中的作用研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1879372