本文選題：酵母雙雜交 + Co-IP�。� 參考：《中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年03期

【摘要】：流感病毒核蛋白(NP)是由病毒RNA節(jié)段5編碼的主要結(jié)構(gòu)蛋白,與病毒基因組RNA及聚合酶(PB1、PB2、PA)構(gòu)成核糖核蛋白(vRNP)復(fù)合體,是病毒基因組的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制的基本功能單位。本實(shí)驗(yàn)室采用酵母雙雜交技術(shù)從人細(xì)胞系cDNA文庫中篩選與流感病毒NP蛋白相互作用的宿主蛋白U1 small nuclear ribonucleoprotein A(SNRPA)。本研究通過酵母回交驗(yàn)證、免疫共沉淀(Co-IP)和GST pull down試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)NP與SNRPA之間存在直接相互作用。利用siRNA干擾基因的表達(dá)后,流感病毒的復(fù)制滴度在24 h和48 h分別下降2.7倍和1.75倍,表明SNRPA蛋白表達(dá)對(duì)流感病毒的復(fù)制發(fā)揮正調(diào)控作用。本研究豐富了流感病毒蛋白與宿主蛋白之間的蛋白質(zhì)調(diào)控網(wǎng)絡(luò),為進(jìn)一步研究流感病毒復(fù)制調(diào)控的機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Influenza virus nucleoprotein (RNA) is a major structural protein encoded by RNA segment 5, which is composed of ribonucleoprotein (RNP) complex with viral genomic RNA and polymerase PB1 / PB2 (PAA). It is the basic functional unit for transcription and replication of viral genome. Yeast two-hybrid technique was used to screen the host protein U1 small nuclear ribonucleoprotein cDNA from human cell line cDNA library which interacted with NP protein of influenza virus. In this study, direct interaction between NP and SNRPA was further confirmed by yeast backcross test, immunoprecipitation Co-IP) and GST pull down test. The replication titer of influenza virus decreased 2.7 times and 1.75 times respectively at 24 h and 48 h after siRNA interference gene expression, indicating that the expression of SNRPA protein plays a positive role in influenza virus replication. This study enriches the protein regulatory network between influenza virus protein and host protein and lays a foundation for further study on the mechanism of influenza virus replication.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/農(nóng)業(yè)部動(dòng)物流感重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室;甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31402206、31672582)
【分類號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：1861626