本文選題：豬瘟病毒 + 細胞入侵　； 參考：《西北農(nóng)林科技大學》2017年博士論文

【摘要】：豬瘟(classical swine fever,CSF)是由豬瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)引起的豬的一種烈性傳染病,對養(yǎng)豬業(yè)危害很大,被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為必須報告的動物傳染病之一,我國將其列為一類動物疫病。豬瘟病毒(CSFV)為黃病毒科瘟病毒屬成員,是一種有囊膜的單股正鏈RNA病毒。國內(nèi)外對CSFV的致病機理開展了一系列研究,取得了一些進展,但對CSFV的擴散方式、細胞入侵途徑及復制機制等尚不完全清楚。因此,本研究以CSFV感染豬睪丸細胞(Swine testis cell,ST)為模型,針對CSFV在體外培養(yǎng)系統(tǒng)中的傳播方式、入侵易感細胞的途徑及復制增殖與高爾基體-內(nèi)質(zhì)網(wǎng)反式運輸調(diào)節(jié)蛋白GBF1和Rab2的關(guān)系開展了研究,獲得以下研究結(jié)果:1.CSFV隨著細胞分裂增殖,低濃度中和抗體不能完全阻斷病毒的傳播。通過低熔點瓊脂糖及中和抗體阻斷試驗,證明CSFV在體外培養(yǎng)系統(tǒng)中以釋放后再感染的方式擴散,未能發(fā)現(xiàn)CSFV細胞間直接傳播的證據(jù);通過檢測不同濃度中和抗體對CSFV擴散限制效果發(fā)現(xiàn),抗體濃度低于1×105ND50時不能阻斷CSFV的擴散;通過分析在中和壓力下CSFV感染斑塊陽性細胞數(shù)和細胞倍增時間得知,CSFV能夠隨著細胞的分裂而增殖。2.CSFV利用網(wǎng)格蛋白介導的內(nèi)吞途徑入侵細胞。用real-time PCR和間接免疫熒光法檢測CSFV早期入侵細胞的情況,發(fā)現(xiàn)在CSFV感染過程中添加網(wǎng)格蛋白組裝抑制劑氯丙嗪和動力蛋白抑制劑dynasore后,細胞內(nèi)CSFV含量顯著下降;通過shRNA干擾載體的構(gòu)建和細胞轉(zhuǎn)染、篩選,成功構(gòu)建了網(wǎng)格蛋白重鏈和Ⅱ型動力蛋白干擾細胞株,通過對比檢測CSFV入侵干擾細胞的效率發(fā)現(xiàn),在網(wǎng)格蛋白重鏈和Ⅱ型動力蛋白表達量下調(diào)后,CSFV感染早期胞內(nèi)CSFV含量顯著減少,證明CSFV能夠通過網(wǎng)格蛋白介導的內(nèi)吞途徑入侵細胞。3.CSFV入侵細胞依賴初級內(nèi)體和次級內(nèi)體。利用氯化銨調(diào)節(jié)CSFV感染過程中細胞的酸性,通過檢測感染早期胞內(nèi)CSFV含量,發(fā)現(xiàn)氯化銨抑制了CSFV入侵細胞的效率,證明CSFV感染需要酸性環(huán)境誘導;構(gòu)建了初級內(nèi)體標志蛋白Rab5和次級內(nèi)體標志蛋白Rab7和Rab9的shRNA載體,并通過轉(zhuǎn)染ST細胞和嘌呤霉素篩選得到了干擾細胞株;通過對比檢測感染早期CSFV在Rab5、Rab7和Rab9干擾細胞和ST細胞及隨機干擾細胞中的含量,證明Rab5、Rab7和Rab9基因下調(diào)后CSFV入侵細胞的效率顯著下降,說明CSFV入侵細胞對初級內(nèi)體和次級內(nèi)體有著依賴性。4.GBF1和Rab2調(diào)控CSFV的增殖。利用布雷菲德菌素A和golgicide A抑制GBF1活性,通過real-time PCR和病毒滴度檢測發(fā)現(xiàn),CSFV的增殖對GBF1抑制劑較為敏感;通過shRNA干擾得到GBF1、ARF1和Rab2干擾細胞,并對CSFV在此3種細胞及對照細胞上增殖的情況進行檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn),GBF1和Rab2表達量下調(diào)后CSFV的增殖受到了明顯抑制,而CSFV在ARF1干擾細胞上的增殖情況與對照組沒有顯著差異,過表達GBF1和Rab2能夠促進CSFV增殖。試驗結(jié)果表明高爾基體-內(nèi)質(zhì)網(wǎng)反式運輸調(diào)節(jié)蛋白GBF1和Rab2能夠調(diào)控CSFV的增殖,而CSFV增殖并不依賴ARF1蛋白。綜上所述,本研究明確了在體外培養(yǎng)系統(tǒng)中CSFV的傳播方式、對易感細胞的入侵方式及其依賴的亞細胞結(jié)構(gòu)和蛋白,證明了高爾基體-內(nèi)質(zhì)網(wǎng)逆向轉(zhuǎn)運調(diào)控蛋白GBF1和Rab2在CSFV增殖中發(fā)揮了重要作用,為全面了解CSFV生命周期及復制機制提供了新的理論資料和數(shù)據(jù)支持。
[Abstract]:Classical swine fever ( CSFV ) is a kind of infectious disease of swine caused by classical swine fever virus ( CSFV ) , which is a kind of animal epidemic disease . The results showed that CSFV inhibited the proliferation of CSFV after downregulated by Rab5 , Rab7 and Rab9 . The results showed that CSFV inhibited the proliferation of CSFV after downregulated by Rab5 , Rab7 and Rab2 .

【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S852.651

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;Effect of Eliminated the Breeding Pigs with Unqualified CSFV Antibody on Sows' Reproductive Performance and Pigs' Growth Performance[J];Agricultural Science & Technology;2011年05期

2 ;Secretory Expression of E2 Main Antigen Domain of CSFV C Strain and the Establishment of Indirect ELISA Assay[J];Virologica Sinica;2008年05期

3 梁媛;陳芳芳;溫麗霞;;PRRSV+CSFV+PCV2+HPS混感病例的病理學研究[J];農(nóng)業(yè)與技術(shù);2012年08期

4 孫泉云;周錦萍;劉佩紅;鞠龔訥;薛霞;李凱航;盧軍;張維誼;;上海地區(qū)豬場中家鼠PRRSV和CSFV帶毒情況調(diào)查[J];動物醫(yī)學進展;2006年04期

5 張旭;張彥明;張倩;程媛媛;譚曉妮;;穩(wěn)定表達豬miRNA let-7c細胞株的建立及其對CSFV的調(diào)控作用[J];西北農(nóng)林科技大學學報(自然科學版);2010年12期

6 陳鐘鳴;張志成;方光遠;;實時熒光定量PCR檢測豬病料中的PRRSV與CSFV[J];動物醫(yī)學進展;2011年02期

7 魏文康;呂殿紅;溫肖會;羅勝軍;黃忠;周秀蓉;賈春玲;袁潔;;食源性動物組織中CSFV和PRRSV雙重雙色熒光定量RT-PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學報;2011年08期

8 白雪;付云云;單月;郭敏;郎廣平;梅林;溫濤;趙建增;梁志選;楊舉;羅勝軍;邢海云;高英杰;;不同CSF免疫狀態(tài)下豬PRRS易感性及IFN-γ分泌細胞應(yīng)答[J];中國獸醫(yī)學報;2012年01期

9 江成;劉文強;劉桂芹;李吉楠;;冀魯豫交界地區(qū)PCV-2和CSFV血清抗體調(diào)查[J];動物醫(yī)學進展;2009年08期

10 梁媛;陳芳芳;溫麗霞;;PRRSV+CSFV+PCV2+HPS混感病例的病理學研究[J];農(nóng)業(yè)與技術(shù);2012年09期

相關(guān)會議論文 前10條

1 史子學;孫金福;郭煥成;涂長春;;CSFV感染后宿主凋亡相關(guān)基因表達變化的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2008年學術(shù)年會暨第六屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學術(shù)研討會論文集[C];2008年

2 史子學;孫金福;郭煥成;涂長春;;CSFV感染后宿主凋亡相關(guān)基因表達變化研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第三屆豬病防控學術(shù)研討會論文集[C];2008年

3 李素;郝建偉;孫金福;郭煥成;郭昌明;孫博興;涂長春;;CSFV感染豬原代血管內(nèi)皮細胞的差異蛋白質(zhì)組分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第四次豬病防控學術(shù)研討會論文集[C];2010年

4 唐青海;張彥明;郭抗抗;何雷;范麗;仝剛;代晨;;豬瘟病毒(CSFV)NS2蛋白抑制MG132誘導的細胞凋亡作用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學分會暨中國免疫學會獸醫(yī)免疫分會第八次學術(shù)研討會論文集[C];2010年

5 周遠成;王琴;范學政;徐璐;徐志文;郭萬柱;;豬瘟病毒急性感染對豬外周血淋巴細胞的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2008年學術(shù)年會暨第六屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學術(shù)研討會論文集[C];2008年

6 謝金文;沈志強;管宇;韓玲;任艷玲;曲光剛;;CSFV、PRRSV雙重RT-PCR檢測方法的建立及其應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2009學術(shù)年會論文集（下冊）[C];2009年

7 謝金文;沈志強;管宇;韓玲;任艷玲;曲光剛;;CSFV、PRRSV雙重RT-PCR檢測方法的建立及其應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學術(shù)研討會論文集（下冊）[C];2009年

8 杜蘭榮;李云崗;孫圣福;張棟;陳靜;;PRRSV、CSFV和PCV多重PCR檢測方法的建立及初步應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第四次豬病防控學術(shù)研討會論文集[C];2010年

9 鄭仲華;胡永明;趙明秋;陳金頂;;CSFV強弱毒株RT-PCR快速鑒別檢測方法研究[A];2012年鄂粵微生物學學術(shù)年會——湖北省暨武漢微生物學會成立六十年慶祝大會論文集[C];2012年

10 劉俊;王琴;范學政;徐璐;湯波;陳蕾;黃偉;;豬瘟病毒急性感染后病毒載量的動態(tài)分布規(guī)律研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2008年學術(shù)年會暨第六屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學術(shù)研討會論文集[C];2008年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 陳佳寧;層粘連蛋白受體作為豬瘟病毒吸附受體的鑒定[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

2 岳鋒;CSFV和PCV2感染后免疫抑制性受體轉(zhuǎn)錄水平研究及阻斷豬PD-1/PD-L1通路多肽基序鑒定[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2015年

3 李連峰;抗豬瘟病毒干擾素刺激基因的篩選及GBP1抗病毒分子機制的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2016年

4 梁武龍;豬瘟病毒細胞入侵途徑及GBF1和Rab2調(diào)控其增殖的研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2017年

5 史子學;豬瘟病毒感染豬外周血白細胞轉(zhuǎn)錄組變化的研究[D];吉林大學;2009年

6 李素;豬瘟病毒感染血管內(nèi)皮細胞的差異蛋白質(zhì)及細胞因子表達變化分析[D];吉林大學;2011年

7 何雷;豬瘟病毒NS5A蛋白在病毒致病中作用的研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2012年

8 郭抗抗;豬瘟病毒的shRNA干擾、強弱毒鑒別及基因工程疫苗研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2010年

9 李丹;血紅蛋白β亞基對豬瘟病毒增殖的調(diào)控作用及其調(diào)節(jié)機制[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2013年

10 陳鍇;豬瘟慢性感染對豬免疫功能影響的細胞與分子機制研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2012年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 何文瑞;細胞硫氧還蛋白2與豬瘟病毒E2蛋白的相互作用及其對豬瘟病毒復制的調(diào)控作用[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

2 陳玉燕;9種豬病病原體GeXP多重PCR檢測方法的研究[D];重慶理工大學;2015年

3 李星;豬瘟口服疫苗保護劑篩選及免疫效果評價[D];上海海洋大學;2015年

4 邵明豪;腺病毒介導的CSFV E0基因在奶山羊乳腺中的表達[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年

5 李滿;CSFV強弱毒鑒別和PRRSV快速檢測的TaqMan熒光定量RT-PCR方法的建立及應(yīng)用[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2014年

6 張仙;豬藍耳病、豬瘟、流行性乙型腦炎可視化共檢基因芯片的構(gòu)建及初步應(yīng)用[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2015年

7 張裕祺;2014年江西地區(qū)保育豬CSFV、PRRSV、PCV2和PRV的分子流行病學調(diào)查[D];江西農(nóng)業(yè)大學;2015年

8 冀艷華;豬溫病毒結(jié)構(gòu)蛋白E0基因打靶奶山羊的制備[D];西北農(nóng)林科技大學;2016年

9 秦為堅;CSFV、BVDV雙重RT-PCR檢測方法的建立及E2基因遺傳進化分析[D];華南農(nóng)業(yè)大學;2016年

10 付丹;四川地區(qū)HPS與CSFV、PRV混合感染調(diào)查及HPS四川分離株質(zhì)粒介導的β-內(nèi)酰胺類耐藥基因檢測[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2016年

，

本文編號：1860608