發(fā)布時間：2018-05-07 22:27

  本文選題：綿羊肺腺瘤病 + 巢式PCR��； 參考：《中國獸醫(yī)科學(xué)》2017年01期

【摘要】：根據(jù)Gen Bank上發(fā)表的外源性綿羊肺腺瘤病毒(exJSRV)的基因序列,分別設(shè)計合成巢式RT-PCR引物及擴(kuò)增exJSRV-env全基因的引物,建立exJSRV的檢測方法。將病肺的巢式外套與內(nèi)套RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與載體連接,對重組質(zhì)粒送檢測序進(jìn)行序列分析。結(jié)果顯示,巢式外套與內(nèi)套RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的序列與JQ837489.1序列的同源性分別為99.7%和99.4%。通過對3份鼻液以及75份血樣的臨床檢測,將檢測陽性的1份鼻液和2份血樣送檢測序,序列比對結(jié)果顯示,鼻液、血樣的巢式外套和內(nèi)套RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與JQ837489.1的同源性分別為99.8%、99.7%、99.7%和98.9%、100%、99.4%,且擴(kuò)增基因序列的氨基酸序列中具有exJSRV特有的致病性YXXM序列。敏感性試驗表明,巢式RT-PCR診斷方法的敏感性是普通RT-PCR的10倍,最低能夠檢測出9.72 fg的標(biāo)準(zhǔn)模板RNA。說明本試驗所建立的方法,具有良好的臨床應(yīng)用價值,靈敏性高、特異性好,對exJSRV的臨床早期檢測提供了一種方便、可靠、經(jīng)濟(jì)實用的診斷方法。
[Abstract]:According to the gene sequence of exJSRV published on Gen Bank, nested RT-PCR primers and primers for amplifying the whole exJSRV-env gene were designed and synthesized, and the detection method of exJSRV was established. The RT-PCR amplification products of the nested coat and the inner sleeve of the diseased lung were connected with the vector and the recombinant plasmids were sequenced and sequenced. The results showed that the homology of RT-PCR amplification products between nested coat and inner jacket was 99.7% and 99.4%, respectively, and the homology of JQ837489.1 sequence was 99.7% and 99.4% respectively. Through clinical examination of 3 nasal fluids and 75 blood samples, 1 nasal fluid and 2 blood samples were tested and sequenced. The homology of the nested RT-PCR amplification products of blood samples with JQ837489.1 was 99.8% and 99.7%, respectively, and 98.9% and 99.4%, respectively. The amino acid sequence of the amplified gene sequence had the pathogenicity YXXM sequence of exJSRV. The sensitivity test showed that the diagnostic sensitivity of nested RT-PCR was 10 times as high as that of RT-PCR, and the lowest 9.72 fg standard template could be detected. This method has good clinical application value, high sensitivity, good specificity, and provides a convenient, reliable, economical and practical diagnostic method for early clinical detection of exJSRV.
【作者單位】： 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院農(nóng)業(yè)部動物疾病臨床診療技術(shù)重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(31360597) 內(nèi)蒙古科技廳應(yīng)用研究項目(201502070) 內(nèi)蒙古草原英才創(chuàng)新團(tuán)隊項目(20151031)
【分類號】：S852.654

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本文編號：1858744