本文選題：廣西巴馬小型豬 + 矮小體型　； 參考：《廣西大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：動(dòng)物體型大小主要是由骨組織和肌肉組織發(fā)育決定。動(dòng)物機(jī)體大部分骨組織是通過(guò)軟骨內(nèi)成骨方式形成,而骨骺生長(zhǎng)板的發(fā)育則最終決定軟骨內(nèi)成骨的形態(tài)。骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein2, BMP2)是動(dòng)物出生后骨骼內(nèi)穩(wěn)態(tài)的重要調(diào)節(jié)因子,它提供的成骨信號(hào)是骨組織發(fā)生和修復(fù)所必須的。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子3(fibroblast growth factors, FGFR3)則主要作用于軟骨的發(fā)育,季肋發(fā)育不全、軟骨發(fā)育不全和致死性發(fā)育不全這三種人類(lèi)可遺傳侏儒綜合征都是由FGFR3基因的錯(cuò)義突變引起的。目前,豬FGFR3基因與骨發(fā)育的相關(guān)性研究在國(guó)內(nèi)外仍是空白。NCBI報(bào)道的豬FGFR3基因序列是利用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)獲得的序列,目前尚未有相關(guān)的該基因CDS克隆的報(bào)道。cDNA-AFLP擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性(cDNA amplified fragments length polymorphism, cDNA-AFLP)測(cè)定技術(shù)具有重復(fù)性好、假陽(yáng)性率低、起始樣本需求量少等優(yōu)點(diǎn),不需要預(yù)先知道序列信息即可篩選差異表達(dá)基因,通過(guò)此方法可以發(fā)現(xiàn)新基因或基因的新功能,常應(yīng)用于基因表達(dá)差異顯示的研究中。本課題以1日齡廣西巴馬小型豬和長(zhǎng)白豬為研究對(duì)象,分別克隆了這兩個(gè)品種豬BMP2和FGFR3基因CDS序列,并對(duì)其在四肢骨生長(zhǎng)板的表達(dá)情況進(jìn)行了測(cè)定比較,并采用cDNA-AFLP技術(shù)對(duì)兩品種豬軟骨發(fā)育相關(guān)基因的差異表達(dá)進(jìn)行了測(cè)定,旨在篩選影響骨發(fā)育的功能基因,為實(shí)驗(yàn)用廣西巴馬小型豬的選育提供遺傳標(biāo)記,獲得結(jié)果如下：1.成功克隆了廣西巴馬小型豬、長(zhǎng)白豬BMP2 CDS全長(zhǎng)序列,共1188bp,兩個(gè)品種豬BMP2的CDS序列完全一致。2.成功克隆了長(zhǎng)白豬和廣西巴馬小型豬FGFR3 CDS部分序列,共808bp。將測(cè)序結(jié)果與NCBI報(bào)道的豬FGFR3預(yù)測(cè)序列比對(duì),發(fā)現(xiàn)存在八處堿基發(fā)生突變,一處堿基缺失。其中五處突變位點(diǎn)為長(zhǎng)白豬和廣西巴馬小型豬所共有,分別為A124G、C190G、A204C、C205A口C245T的錯(cuò)義突變；另三處突變位點(diǎn)和一處堿基缺失表現(xiàn)為廣西巴馬小型豬A438G和C549T的同義突變、長(zhǎng)白豬A752C的錯(cuò)義突變和長(zhǎng)白豬的328～330的3個(gè)堿基(GCA)缺失。3.廣西巴馬小型豬、長(zhǎng)白豬FGFR3基因A2374G、C2620T多態(tài)性位點(diǎn)的基因型及基因頻率在兩個(gè)品種豬間分布差異均極顯著(P0.01),兩個(gè)基因座處于連鎖平衡狀態(tài)。4.利用SMARTer RACE技術(shù)獲得豬FGFR3基因5’末端序列1條,3’末端序列3條,拼接獲得豬FGFR3 CDS序列3條,并確定了豬FGFR3基因翻譯的起始密碼子位點(diǎn)。5.1日齡的廣西巴馬小型豬與同日齡長(zhǎng)白豬比較,體重、體長(zhǎng)和體高差異均極顯著(P0.01),股骨長(zhǎng)差異顯著(P0.05)。1日齡廣西巴馬小型豬生長(zhǎng)板BMP2表達(dá)量顯著低于長(zhǎng)白豬(P0.05); FGFR3表達(dá)量顯著高于長(zhǎng)白豬(P0.01)。6.通過(guò)cDNA-AFLP分析獲得18條在1日齡廣西巴馬小型豬、長(zhǎng)白豬生長(zhǎng)板軟骨組織表達(dá)差異的TDF序列,其中5條序列功能已知,其可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期引起廣西巴馬小型豬和長(zhǎng)白豬骨發(fā)育的差異；還有10條在NCBI中有同源序列但無(wú)已知功能的序列,可能是與軟骨發(fā)育或細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)的新基因,其余3條序列在NCBI中無(wú)同源序列。綜上所述,BMP2、FGFR3參與了豬骨發(fā)育的調(diào)控。cDNA-AFLP篩選獲得的表達(dá)差異基因是否或如何參與了骨發(fā)育的調(diào)控,仍有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
[Abstract]:In this paper , we have cloned the CDS sequences of BMP2 and FGFR3 genes of BMP2 and BMP2 in Guangxi . The results are as follows : 1 . We have successfully cloned BMP2 and FGFR3 gene CDS sequences of BMP2 and BMP2 in Guangxi .
3 . The expression of FGFR3 gene A2374G and C2620T was significantly higher than that of the white pigs ( P0.01 ) .
In conclusion , BMP2 and FGFR3 are involved in the regulation of pig bone development . In conclusion , BMP2 and FGFR3 are involved in the regulation of pig bone development .

【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S828

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4 金e，

本文編號(hào)：1846875