本文選題：廣西巴馬小型豬 + 矮小體型��； 參考：《廣西大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：動物體型大小主要是由骨組織和肌肉組織發(fā)育決定。動物機體大部分骨組織是通過軟骨內(nèi)成骨方式形成,而骨骺生長板的發(fā)育則最終決定軟骨內(nèi)成骨的形態(tài)。骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein2, BMP2)是動物出生后骨骼內(nèi)穩(wěn)態(tài)的重要調(diào)節(jié)因子,它提供的成骨信號是骨組織發(fā)生和修復(fù)所必須的。成纖維細胞生長因子3(fibroblast growth factors, FGFR3)則主要作用于軟骨的發(fā)育,季肋發(fā)育不全、軟骨發(fā)育不全和致死性發(fā)育不全這三種人類可遺傳侏儒綜合征都是由FGFR3基因的錯義突變引起的。目前,豬FGFR3基因與骨發(fā)育的相關(guān)性研究在國內(nèi)外仍是空白。NCBI報道的豬FGFR3基因序列是利用生物信息學(xué)方法預(yù)測獲得的序列,目前尚未有相關(guān)的該基因CDS克隆的報道。cDNA-AFLP擴增片段長度多態(tài)性(cDNA amplified fragments length polymorphism, cDNA-AFLP)測定技術(shù)具有重復(fù)性好、假陽性率低、起始樣本需求量少等優(yōu)點,不需要預(yù)先知道序列信息即可篩選差異表達基因,通過此方法可以發(fā)現(xiàn)新基因或基因的新功能,常應(yīng)用于基因表達差異顯示的研究中。本課題以1日齡廣西巴馬小型豬和長白豬為研究對象,分別克隆了這兩個品種豬BMP2和FGFR3基因CDS序列,并對其在四肢骨生長板的表達情況進行了測定比較,并采用cDNA-AFLP技術(shù)對兩品種豬軟骨發(fā)育相關(guān)基因的差異表達進行了測定,旨在篩選影響骨發(fā)育的功能基因,為實驗用廣西巴馬小型豬的選育提供遺傳標(biāo)記,獲得結(jié)果如下：1.成功克隆了廣西巴馬小型豬、長白豬BMP2 CDS全長序列,共1188bp,兩個品種豬BMP2的CDS序列完全一致。2.成功克隆了長白豬和廣西巴馬小型豬FGFR3 CDS部分序列,共808bp。將測序結(jié)果與NCBI報道的豬FGFR3預(yù)測序列比對,發(fā)現(xiàn)存在八處堿基發(fā)生突變,一處堿基缺失。其中五處突變位點為長白豬和廣西巴馬小型豬所共有,分別為A124G、C190G、A204C、C205A口C245T的錯義突變；另三處突變位點和一處堿基缺失表現(xiàn)為廣西巴馬小型豬A438G和C549T的同義突變、長白豬A752C的錯義突變和長白豬的328～330的3個堿基(GCA)缺失。3.廣西巴馬小型豬、長白豬FGFR3基因A2374G、C2620T多態(tài)性位點的基因型及基因頻率在兩個品種豬間分布差異均極顯著(P0.01),兩個基因座處于連鎖平衡狀態(tài)。4.利用SMARTer RACE技術(shù)獲得豬FGFR3基因5’末端序列1條,3’末端序列3條,拼接獲得豬FGFR3 CDS序列3條,并確定了豬FGFR3基因翻譯的起始密碼子位點。5.1日齡的廣西巴馬小型豬與同日齡長白豬比較,體重、體長和體高差異均極顯著(P0.01),股骨長差異顯著(P0.05)。1日齡廣西巴馬小型豬生長板BMP2表達量顯著低于長白豬(P0.05); FGFR3表達量顯著高于長白豬(P0.01)。6.通過cDNA-AFLP分析獲得18條在1日齡廣西巴馬小型豬、長白豬生長板軟骨組織表達差異的TDF序列,其中5條序列功能已知,其可能通過調(diào)節(jié)細胞周期引起廣西巴馬小型豬和長白豬骨發(fā)育的差異；還有10條在NCBI中有同源序列但無已知功能的序列,可能是與軟骨發(fā)育或細胞周期調(diào)控相關(guān)的新基因,其余3條序列在NCBI中無同源序列。綜上所述,BMP2、FGFR3參與了豬骨發(fā)育的調(diào)控。cDNA-AFLP篩選獲得的表達差異基因是否或如何參與了骨發(fā)育的調(diào)控,仍有待進一步實驗驗證。
[Abstract]:In this paper , we have cloned the CDS sequences of BMP2 and FGFR3 genes of BMP2 and BMP2 in Guangxi . The results are as follows : 1 . We have successfully cloned BMP2 and FGFR3 gene CDS sequences of BMP2 and BMP2 in Guangxi .
3 . The expression of FGFR3 gene A2374G and C2620T was significantly higher than that of the white pigs ( P0.01 ) .
In conclusion , BMP2 and FGFR3 are involved in the regulation of pig bone development . In conclusion , BMP2 and FGFR3 are involved in the regulation of pig bone development .

【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S828

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