發(fā)布時間：2018-05-05 02:38

  本文選題：泛素-蛋白酶體系統(tǒng) + 新城疫病毒��； 參考：《中國動物傳染病學(xué)報》2017年06期

【摘要】：為了研究泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(ubiquitin-proteasome system,UPS)具體參與新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)復(fù)制的哪個階段,本研究通過在NDV感染不同階段加入泛素-蛋白酶體系統(tǒng)抑制劑MG-132,結(jié)合使用蛋白酶K試驗證明泛素-蛋白酶體系統(tǒng)并未參與NDV入侵細(xì)胞的過程,而是參與了NDV入侵細(xì)胞之后的復(fù)制早期階段(0~6 h)。再利用蔗糖密度梯度離心試驗分離細(xì)胞內(nèi)體,使用針對內(nèi)體標(biāo)志蛋白Rab5的抗體確定內(nèi)體位于第8~10層。建立了檢測Herts/33毒株P(guān)基因的絕對熒光定量方法,繪制了標(biāo)準(zhǔn)曲線。并通過該絕對熒光定量法比較MG-132和DMSO處理的細(xì)胞內(nèi)體中病毒含量,發(fā)現(xiàn)使用抑制劑處理的細(xì)胞內(nèi)體所在層中病毒含量較高,提示蛋白酶體抑制劑可以使NDV滯留于細(xì)胞內(nèi)體中。本研究首次證明泛素-蛋白酶體系統(tǒng)參與了NDV進(jìn)入細(xì)胞后從內(nèi)體釋放出來的過程。
[Abstract]:In order to study which stage of ubiquitin proteasome system UPSs is involved in the replication of Newcastle disease virus (NDV), In this study, Ubiquitin proteasome system inhibitor MG-132 was added at different stages of NDV infection. Combined with protease K test, it was proved that ubiquitin proteasome system was not involved in the process of NDV invasion. It was involved in the early stage of replication after NDV invasion. Then sucrose density gradient centrifugation was used to isolate the intracellular body and the antibody against the inner marker protein Rab5 was used to determine that the inner body was located in layer 810. An absolute fluorescence quantitative method for the detection of P gene in Herts/33 strain was established and the standard curve was drawn. The virus content in the intracellular body treated with MG-132 and DMSO was compared by the absolute fluorescence quantitative method. The results showed that the virus content in the layer of the intracellular body treated with inhibitor was higher, suggesting that proteasome inhibitor could keep NDV in the intracellular body. This study demonstrated for the first time that the ubiquitin-proteasome system was involved in the release of NDV from the inner body after entering the cell.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31372421、31530074) 公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(201303033)
【分類號】：S852.65

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本文編號：1845824