本文選題：型豬鏈球菌 + 原核表達(dá)��； 參考：《中國病原生物學(xué)雜志》2017年04期

【摘要】：目的原核表達(dá)2型豬鏈球菌(Streptococcus suis 2)天冬氨酸激酶(aspartokinase,AK)并檢測其免疫原性。方法對S.suis 2中國強(qiáng)毒株05ZYH33的AK編碼基因05SSU1811進(jìn)行生物信息學(xué)分析并設(shè)計(jì)引物,通過PCR從05ZYH33基因組中擴(kuò)增目的片段。將目的基因克隆入原核表達(dá)載體pET28a,轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3)后采用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白,用His親和層析柱純化重組蛋白,并進(jìn)行SDS-PAGE和Western blot鑒定。用純化的重組AK免疫BALB/c小鼠4次,采血,分離血清,采用間接ELISA檢測抗體效價,并進(jìn)行Western blot分析。結(jié)果構(gòu)建的重組質(zhì)粒在宿主菌中高效表達(dá)目的蛋白,His親和層析柱純化的重組蛋白,能與感染05ZYH33全菌的豬恢復(fù)期血清反應(yīng)。ELISA檢測重組AK免疫鼠血清抗體效價為1∶102 400,Western blot顯示該抗血清能與重組蛋白反應(yīng)。結(jié)論成功制備重組AK蛋白,該蛋白具有抗原性,為進(jìn)一步研究AK在S.suis 2致病過程中的作用奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to express and detect the immunogenicity of Streptococcus suis 2 (Streptococcus suis 2). Methods the AK encoding gene 05SSU1811 of S.suis 2 Chinese virulent strain 05ZYH33 was analyzed by bioinformatics and primers were designed. The target fragment was amplified from the 05ZYH33 genome by PCR. The target gene was cloned into prokaryotic expression vector pET28a and transformed into E.coli BL21DE3. The target protein was induced by IPTG. The recombinant protein was purified by His affinity chromatography and identified by SDS-PAGE and Western blot. BALB/c mice were immunized with purified recombinant AK for 4 times, blood samples were collected, serum was isolated, antibody titers were detected by indirect ELISA, and Western blot analysis was performed. Results the recombinant plasmid was highly expressed in the host strain and purified by his affinity chromatography. The antibody titer of recombinant AK immunized mice was 1: 102 400 g / blot, which showed that the antiserum could react with the recombinant protein. Conclusion Recombinant AK protein was successfully prepared, which laid a foundation for further study on the role of AK in the pathogenesis of S.suis 2.
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院;南京軍區(qū)軍事醫(yī)學(xué)研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.81571965,81172794,81071317,81471920) 江蘇省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.BK20151091) 江蘇省333工程科研資助項(xiàng)目(No.BRA2014363)
【分類號】：S852.611

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本文編號：1833678