本文選題：草原革蜱 + 16S　； 參考：《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：內(nèi)蒙古地區(qū)天然氣候適合于蜱類的生存,隨著全球大氣候的變化,蜱蟲等媒介生物的活動(dòng)更加的頻繁,其中草原革蜱(Dermacentor nuttalli)是該地區(qū)主要的優(yōu)勢(shì)蜱種之一。眾所周知,蜱蟲可以攜帶多種病原體,導(dǎo)致傳播各種動(dòng)物疫病。經(jīng)過臨床調(diào)查發(fā)現(xiàn)一些傳統(tǒng)老病(如布魯斯菌病和鏈球菌病等)均有復(fù)燃的態(tài)勢(shì)。這種不明原因的廣泛發(fā)病流行情況,可能與蜱蟲等媒介生物的頻繁活動(dòng)關(guān)系密切。本研究具體研究?jī)?nèi)容如下:方法:在2015-2016年期間,選擇內(nèi)蒙古呼倫貝爾地區(qū)設(shè)立15個(gè)牧區(qū)采集點(diǎn),從羊體表或草場(chǎng)收集蜱蟲樣本2120份,通過傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)方法和分子生物學(xué)鑒定方法(PCR方法擴(kuò)增16S rRNA與ITS2基因)進(jìn)行綜合性分析,準(zhǔn)確鑒定出婢蟲的種類。經(jīng)過Genetyx-Version 6生物軟件分析16S rRNA基因的多態(tài)性。用Mega 6.06軟件,將測(cè)序結(jié)果與GenBank數(shù)據(jù)庫中已知蜱蟲16S rRNA基因和ITS2基因進(jìn)行類聚并繪制出其系統(tǒng)進(jìn)化樹。提取蜱成蟲基因組DNA,運(yùn)用常規(guī)PCR方法檢測(cè)布魯斯菌病特異性基因,并對(duì)所得結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。為了進(jìn)一步說明問題,采集吸飽血的雌蜱帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行人工孵化,提取其各期蜱蟲(成蟲、若蟲、幼蟲和卵)的基因組DNA后,相同方法檢測(cè)布魯斯菌特異性基因產(chǎn)物。為更敏感的檢測(cè)蜱蟲體內(nèi)的布魯斯菌病原感染情況,采用TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,在常規(guī)PCR方法檢測(cè)出的陽性和陰性樣品中,再進(jìn)行TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR的檢測(cè),比較兩種兩種方法的敏感度,同時(shí)確定蜱蟲樣品中存在布魯斯菌特異性基因的拷貝數(shù)。結(jié)果:經(jīng)過對(duì)蜱的假頭基、盾板、基節(jié)、緣垛和肛溝等特征性結(jié)構(gòu)的觀察,根據(jù)Walker等描述的草原革蜱典型形態(tài)學(xué)特征一致,初步確定我們采集的蜱蟲為草原革蜱;從Mega 6.06軟件繪制的16S rRNA和ITS2基因遺傳進(jìn)化樹可知,我們收集的蜱蟲與來自新疆、吉林、河北和俄羅斯的已知草原革蜱在同一分支上,與形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果吻合,屬于草原革蜱內(nèi)蒙古株,重新命名為D.nuttalliIMH;通過Gentyx軟件分析16S rRNA基因多樣性結(jié)果發(fā)現(xiàn),15個(gè)不同地區(qū)的蜱蟲之間存在較為顯著的基因多態(tài)性;常規(guī)PCR方法檢測(cè)布魯斯菌特異性基因試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),15個(gè)采樣點(diǎn)收集的蜱樣中陽性率至少在50%以上,有的地方甚至達(dá)到90%以上,在常規(guī)PCR結(jié)果陽性和陰性樣品中隨機(jī)選取25份DNA樣本中進(jìn)行Real Time PCR試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),無論常規(guī)PCR試驗(yàn)結(jié)果陽性還是陰性,50份樣本均顯示陽性結(jié)果,布魯斯菌特異性基因拷貝數(shù)最低者為16.39個(gè)拷貝(Ct值為37.07),最高者為2.4×105個(gè)拷貝(Ct值為23.67),同時(shí)在人工孵化的蟲卵、幼蟲、若蟲的基因組DNA樣品中均檢測(cè)到布魯斯菌特異性基因產(chǎn)物。結(jié)論:草原革蜱是內(nèi)蒙古呼倫貝爾地區(qū)每年3至7月間活動(dòng)的優(yōu)勢(shì)蜱種,而且不同采樣地區(qū)的蜱蟲之間也存在著較為豐富的基因多態(tài)性。吸飽宿主血的草原革蜱幾乎都能攜帶布魯斯菌,更為嚴(yán)重的后果是草原革蜱可能經(jīng)卵垂直傳播布魯斯菌并能夠長(zhǎng)期攜帶。草原革蜱可能是布魯斯菌病的新的一種媒介生物,具有傳播人和動(dòng)物布魯斯菌病的潛在風(fēng)險(xiǎn)。
[Abstract]:In order to further illustrate the genetic evolution of the 16S rRNA gene and ITS2 gene , it is known that tick insects can carry a variety of pathogens , which may lead to the spread of various animal epidemic diseases . The results showed that the positive rate of the samples collected from 15 sampling points was at least 50 % and the highest was 2.4 脳 105 copies ( Ct value of 23.67 ) .

【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.746

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1831554