發(fā)布時(shí)間：2018-04-30 06:55

  本文選題：牛傳染性鼻氣管炎病毒 + 糖蛋白gD��； 參考：《中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院》2015年碩士論文

【摘要】：牛傳染性鼻氣管炎(Infectious bovine rhinotracheitis,IBR)是由牛傳染性鼻氣管炎病毒(IBRV)引起牛的一種急性、熱性、接觸性傳染病。牛是主要宿主及傳染源。IBRV組織嗜性廣,可引起包括牛的鼻氣管炎、膿性陰道炎、包皮龜頭炎、流產(chǎn)、不孕不育癥、結(jié)膜炎、腦炎等多種臨床癥狀。病毒易于三叉神經(jīng)節(jié)建立潛伏感染,造成病毒的持續(xù)存在并大量排毒,使得IBRV感染難以清除。急性IBRV呼吸道感染引起的牛繼發(fā)性細(xì)菌性肺炎,是造成養(yǎng)牛業(yè)經(jīng)濟(jì)損失的重要原因之一。該病于上世紀(jì)50年代在美國(guó)首次發(fā)現(xiàn),現(xiàn)呈世界范圍分布。血清學(xué)調(diào)查表明,我國(guó)大部分地區(qū)存在IBRV感染。g D蛋白是IBRV主要囊膜糖蛋白之一,在病毒的吸附及入侵過程中具有重要作用,能夠誘導(dǎo)中和抗體的產(chǎn)生。目前,國(guó)內(nèi)尚無標(biāo)準(zhǔn)化的IBRV檢測(cè)方法,國(guó)外的檢測(cè)試劑盒價(jià)格昂貴,因此,有必要開展相關(guān)檢測(cè)技術(shù)方面的研究。本研究利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)對(duì)牛傳染性鼻氣管炎病毒(IBRV)的g D蛋白進(jìn)行了原核表達(dá),免疫印跡試驗(yàn)表明其免疫原性良好。用超離純化的IBRV免疫6周齡雌性BALB/c小鼠,重組g D蛋白進(jìn)行加強(qiáng)免疫,經(jīng)常規(guī)細(xì)胞融合,獲得了13株單克隆抗體(MAb),其中4株(2D8、3F9、1G3、5B7)可與重組g D蛋白和IBRV全病毒反應(yīng),其余9株(2E4、3C2、4E8、1F5、4H5、6B6、3F3、2A9、4D11)僅與IBRV全病毒反應(yīng),不與重組g D蛋白反應(yīng)。單抗1G3具有病毒中和活性,中和效價(jià)為1:32。免疫印跡及間接免疫熒光試驗(yàn)表明這13株單抗具有良好的反應(yīng)性。特異性試驗(yàn)表明這13株單抗只與IBRV反應(yīng),不與牛腺病毒3型(BAV-3)及牛副流感病毒3型(BPIV3)反應(yīng)。應(yīng)用肽掃描技術(shù)對(duì)g D蛋白進(jìn)行GST融合短肽截短表達(dá),對(duì)MAb 1G3識(shí)別的抗原表位進(jìn)行了鑒定,結(jié)果表明MAb 1G3識(shí)別的最小反應(yīng)活性單元是6肽260ESKGYE265,識(shí)別的最大反應(yīng)活性的最小單元是7肽259EESKGYE265�？乖砦槐Ｊ匦苑治霰砻�,該抗原表位在IBRV各分離株中完全保守,而在其他與IBRV相關(guān)的反芻動(dòng)物皰疹病毒如山羊皰疹病毒1型(Cp HV-1)、鹿皰疹病毒1型(Cv HV-1)及駝鹿皰疹病毒1型(Elk HV-1)等差異較大。同時(shí),本研究利用MAb 3C2作為捕獲抗體、1F5作為檢測(cè)抗體建立了可用于檢測(cè)IBRV抗原的雙抗夾心ELISA。特異性實(shí)驗(yàn)表明該方法只針對(duì)IBRV,不與BAV-3、BPIV3及牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)等其他引起牛呼吸道疾病的病原反應(yīng)。通過24份陰性樣品的檢測(cè),確定該方法的Cut-off值為0.24,當(dāng)樣品OD450值大于0.24時(shí),判定為陽(yáng)性;等于或低于0.24時(shí)判定為陰性。敏感性試驗(yàn)表明,該方法可以檢測(cè)102.9TCID50/0.1 ml的IBRV,與PCR方法檢測(cè)臨床樣品的符合率為90.5%。重復(fù)性試驗(yàn)表明該方法具有良好的穩(wěn)定性。綜上所述,本研究制備了13株IBRV單抗,這些單抗與IBRV具有良好的反應(yīng)性。對(duì)針對(duì)g D蛋白的一株中和性單抗1G3進(jìn)行了表位鑒定,結(jié)果鑒定出了一個(gè)抗原表位。同時(shí),利用單抗3C2和1F5初步建立了檢測(cè)IBRV抗原的雙抗夾心EISA,可試用于IBRV的病原檢測(cè)。本研究為IBRV的糖蛋白g D的生物學(xué)結(jié)構(gòu)和功能及IBRV致病性的深入研究奠定了基礎(chǔ),同時(shí)為IBRV的病原學(xué)診斷提供了技術(shù)支撐。
[Abstract]:This study was carried out in the USA for the first time in the USA . The results showed that there existed IBRV infection in most parts of China . A double anti - sandwich ELISA for detecting IBRV antigen was established by using monoclonal antibody 3C2 as capture antibody and 1F5 as capture antibody .

【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S858.23

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

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本文編號(hào)：1823533