本文選題：胸膜肺炎放線桿菌(APP) + 重組外膜蛋白(rOmpP)��； 參考：《農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)》2017年02期

【摘要】：豬傳染性胸膜肺炎(porcine contagious pleuropneumoni,PCP)是由胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)感染豬(Sus scrofa)引起的一種接觸性呼吸道疾病,是世界養(yǎng)豬業(yè)的五大疫病之一。為檢測豬APP重組外膜蛋白P2(recombinant outer membrane protein P2,rOmpP2)的免疫保護(hù)作用,本研究根據(jù)Gen Bank中已報(bào)道的APP Omp P2基因序列設(shè)計(jì)引物對,以APP的基因組為模板PCR擴(kuò)增Omp P2,測序后在NCBI登錄(登錄號:KM357903),并進(jìn)行生物信息學(xué)分析,該基因由1 131 bp組成,編碼一個(gè)含376個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì),為一外膜孔道蛋白,該編碼蛋白在APP不同的血清型之間具有很高同源性。將rOmpP2亞克隆至p ET32a(+)載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌(Escherichia coli)BL21(DE3),用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)APP rOmpP2蛋白,經(jīng)十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)檢測以及Western blot鑒定,結(jié)果表明,在42 k D處出現(xiàn)特異性條帶,重組菌表達(dá)的rOmpP2能夠被相應(yīng)的陽性血清識別。動物保護(hù)實(shí)驗(yàn)采用BALB/c小鼠(Mus musculus)進(jìn)行,免疫球蛋白G(immunoglobulin G,Ig G)抗體滴度采用酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)檢測。結(jié)果表明,鋁佐劑+50μg rOmpP2、鋁佐劑+30μg r Om P2及鋁佐劑+10μg rOmpP2組中,小鼠的存活率分別為50%,30%和10%,佐劑組和生理鹽水對照組全部死亡,存活小鼠精神狀況慢慢恢復(fù)正常,并采食。rOmpP2皮下免疫注射可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生免疫應(yīng)答和較高的抗攻擊感染的免疫保護(hù)力。研究結(jié)果為進(jìn)一步篩選豬傳染性胸膜肺炎分子疫苗提供了基礎(chǔ)資料。
[Abstract]:Porcine contagious pleuropneumoniae is a contact respiratory disease caused by Actinobacillus pleuropneumoniae APP (Actinobacillus pleuropneumoniae). In order to detect the immune protection of porcine APP recombinant outer membrane protein P2(recombinant outer membrane protein P2rOmpP2, primer pairs were designed according to the sequence of APP Omp P2 gene reported in Gen Bank. Using APP genome as template, Omp P2was amplified by PCR, sequenced, and then registered in NCBI (accession number: KM357903G). The gene was composed of 1 131bp and encoded a 376-amino acid protein, which was an outer membrane pore protein. The encoding protein has high homology among different serotypes of APP. ROmpP2 was subcloned into pET32a () vector and transformed into Escherichia coli BL21DE3G. The expression of APP rOmpP2 protein was induced by isopropyl 尾 -D-thiogalactopyranoside (Isopropyl 尾 -D-thiogalactopyranoside). The expression of APP rOmpP2 protein was detected by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGEG) and identified by Western blot. The results showed that there was a specific band at 42 KD, and the rOmpP2 expressed by the recombinant strain could be recognized by the corresponding positive serum. The immunoglobulin (G(immunoglobulin) IgG antibody titer was detected by enzyme linked immunosorbent assay (Elisa). The results showed that the survival rates of 50 渭 g rOmpP2, 30 渭 g r Om P2 and 10 渭 g rOmpP2 groups were 50% and 10%, respectively. The subcutaneous injection of .rOmpP2 could induce immune response and higher immune protection against aggressive infection in mice. The results provide basic information for screening molecular vaccine against swine infectious pleuropneumonia.
【作者單位】： 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院;
【基金】：教育部留學(xué)回國科研啟動基金(No.GT0096)
【分類號】：S858.28

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1817014