豬丁型冠狀病毒熒光定量RT-PCR與S1蛋白間接ELISA檢測方法的建立及應(yīng)用
本文選題:豬丁型冠狀病毒 + 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR; 參考:《生物工程學(xué)報(bào)》2017年08期
【摘要】:最近,新發(fā)現(xiàn)的豬丁型冠狀病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCo V)可導(dǎo)致仔豬腹瀉,亟待建立有效準(zhǔn)確的核酸及血清學(xué)檢測方法并調(diào)查豬場的PDCo V感染情況。本研究采用針對(duì)病毒M基因的探針熒光定量RT-PCR檢測方法,對(duì)2014-2015年間收集的河南、湖南、浙江、江西、安徽、河北、黑龍江、江蘇、山東和上海等10個(gè)省市收集的共254份腹瀉仔豬小腸勻漿或糞便樣本進(jìn)行檢測,共檢出11份PDCo V陽性樣本,總陽性率為4.33%。采用在昆蟲細(xì)胞表達(dá)純化的PDCo V囊膜S1蛋白為包被抗原,建立間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法,檢測2015-2016年間收集的來自江蘇、湖南、浙江等7個(gè)省份的609份具有腹瀉癥狀的豬血清樣品,抗PDCo V S1抗體檢出率為44.17%(269/609)。上述建立的兩種方法分別針對(duì)病毒的RNA或抗體對(duì)PDCo V進(jìn)行特異性檢測,可以應(yīng)用于PDCo V流行情況的監(jiān)控。
[Abstract]:Recently, porcine deltacoronavirusPDCo V, a newly discovered porcine coronavirus, can cause diarrhea in piglets. It is urgent to establish an effective method for nucleic acid and serological detection and to investigate the PDCo V infection in pig farms. In this study, fluorescence quantitative RT-PCR was used to detect virus M gene in Henan, Hunan, Zhejiang, Jiangxi, Anhui, Hebei, Heilongjiang and Jiangsu provinces during 2014-2015. A total of 254 intestinal homogenate or fecal samples of diarrhea piglets were collected from 10 provinces and cities, including Shandong and Shanghai, and 11 PDCo V positive samples were detected. The total positive rate was 4.33. An indirect enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa) was established to detect the expression of PDCo V envelope S1 protein in insect cells from Jiangsu, Hunan, and Hunan during the period of 2015-2016, and to establish an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa) method. The detection rate of anti PDCo V S1 antibody in 609 porcine serum samples with diarrhea symptoms in 7 provinces of Zhejiang Province was 44.17 / 269 / 609. The above two methods can be used to monitor the prevalence of PDCo V by specific detection of PDCo V against RNA or antibody.
【作者單位】: 浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院動(dòng)物預(yù)防醫(yī)學(xué)研究所;杭州貝爾塔生物技術(shù)有限公司;
【基金】:國家重點(diǎn)研究發(fā)展計(jì)劃(No.2016YFD0500102)資助~~
【分類號(hào)】:S852.651
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,本文編號(hào):1800420
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