本文選題：柔嫩艾美耳球蟲 + 烯醇化酶��； 參考：《江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)》2017年03期

【摘要】：從純化的柔嫩艾美耳球蟲第二代裂殖子中提取總RNA,應(yīng)用RT-PCR技術(shù)克隆獲得了烯醇化酶基因(Gen Bank Accession No.GU169333)。烯醇化酶基因開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)1 338 bp,編碼445個(gè)氨基酸。應(yīng)用DNAstar軟件對(duì)氨基酸序列的親水區(qū)域和疏水區(qū)域的分布、抗原指數(shù)及T細(xì)胞基序進(jìn)行分析,結(jié)果顯示該蛋白質(zhì)親水性較強(qiáng),抗原指數(shù)高,含較多T細(xì)胞表位。同時(shí)構(gòu)建了烯醇化酶原核表達(dá)重組質(zhì)粒p ET-28a(+)-ENO。用IPTG對(duì)重組質(zhì)粒p ET-28a(+)-ENO進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE結(jié)果顯示表達(dá)的融合蛋白大小約為5.17×104,主要存在于裂解上清中。Western blotting結(jié)果顯示該重組蛋白可被抗柔嫩艾美耳球蟲的多克隆抗體識(shí)別,表明該蛋白質(zhì)具有較好的免疫原性。
[Abstract]:Total RNAs were extracted from the purified second generation merozoites of Eimeria tenella. The enolase gene Gen Bank Accession no. GU169333 was cloned by RT-PCR technique. The open reading frame of enolase gene is 1 338 BP and encodes 445 amino acids. The distribution of hydrophilic and hydrophobic regions, antigen index and T cell motif of amino acid sequence were analyzed by DNAstar software. The results showed that the protein had strong hydrophilicity, high antigen index and more T cell epitopes. At the same time, the prokaryotic expression plasmid of enolase pET-28awas constructed. The recombinant plasmid pET-28a (pET-28a) was induced by IPTG and expressed by SDS-PAGE. The size of the fusion protein was about 5.17 脳 10 ~ 4, which was mainly found in the lytic supernatant. Western blotting showed that the recombinant protein could be recognized by polyclonal antibody against Eimeria tenella. The results showed that the protein had good immunogenicity.
【作者單位】： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院/江蘇省獸用生物制藥高技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金國(guó)際(地區(qū))合作與交流項(xiàng)目(NSFCPSF,中巴)(31661143017);國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31372428;31672545) 江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目(PAPD)
【分類號(hào)】：S852.723

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