本文選題：乳酸乳球菌代謝物 + 牛源致病性大腸桿菌O_(78)　； 參考：《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：內(nèi)蒙古錫林郭勒牧區(qū)酸馬奶是古老的的低酒精乳飲品之一。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明酸馬奶能夠輔助性治療結(jié)核病、降三高、改善消化系統(tǒng)等。近年來食品安全問題已經(jīng)引起全球人民廣泛關(guān)注,由Escherichia coli O157:H7、Listeria monocytogenes等致病菌引發(fā)的疾病導(dǎo)致了巨大經(jīng)濟(jì)損失。解決由Escherichia coli引起的感染,減少畜牧業(yè)損失,已經(jīng)成為當(dāng)務(wù)之急。微生物代謝物作為一種安全且無毒副作用的天然防腐劑,已經(jīng)引起科研工作者的重視。因此,本試驗從酸馬奶中分離篩選出和大黃聯(lián)合用藥對E. coli O78有較強(qiáng)抑菌作用的菌株。并通過體內(nèi)試驗,研究對感染E. coli O78小鼠營養(yǎng)代謝和盲腸微生物以及相互關(guān)系的影響。試驗一：產(chǎn)生抑菌物質(zhì)乳酸乳球菌的分離篩選和鑒定酸馬奶劃線接種分離純化后,觀察菌落形態(tài)、進(jìn)行革蘭氏染色、顯微鏡觀察以及接觸酶試驗,其中革蘭氏染色為球菌,接觸酶試驗陰性,牛津杯法篩選有抑菌物質(zhì)的菌株進(jìn)一步純化后,進(jìn)行生理生化鑒定,16S rRNA擴(kuò)增鑒定。結(jié)合生理生化鑒定,對E.coli O78抑菌效果較好的菌株,進(jìn)一步進(jìn)行16S rRNA鑒定,確定該菌株為Lactococcus lactis subsp. LactiS。試驗二：乳酸乳球菌代謝物的提取以及體外抑菌測定利用酸堿法提取乳酸乳球菌代謝物,牛津杯法測定抑菌直徑,微量平板和TTC法測定最小抑菌濃度(MIC)。乳酸乳球菌代謝物與EDTA聯(lián)合用藥MIC為0.063mg/mL+0.2mg/mL, FIC=0.41。乳酸乳球菌代謝物和大黃聯(lián)合用藥MIC為0.033mg/mL+10.417mg/mL, FIC=0.20.結(jié)果表明,乳酸乳球菌代謝物和大黃聯(lián)合作用效果優(yōu)于乳酸乳球菌代謝物與EDTA聯(lián)合作用,更適用于后續(xù)試驗。試驗三：乳酸乳球菌代謝物和大黃聯(lián)合作用對致病性E. coli O78抑菌機(jī)理的測定 酶標(biāo)比濁法測定乳酸乳球菌代謝物與大黃聯(lián)合作用對致病性E. coli O78抑菌生長曲線的影響。利用AKP和BCA試劑盒,分別檢測聯(lián)合作用對致病性E. coli O78細(xì)胞壁和細(xì)胞膜通透性的影響。結(jié)果表明,聯(lián)合用藥對致病性E. coli O78的抑菌生長曲線呈現(xiàn)“S“型,破壞致病性E. coli O78的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜完整性,使通透性增強(qiáng),細(xì)胞質(zhì)外滲,增加菌液中蛋白質(zhì)和堿性磷酸酶含量。試驗四：乳酸乳球菌與大黃聯(lián)合作用對E. coli O78體內(nèi)抑菌作用(1)致病性E.coli O78對小鼠80%致死率的確定選取昆明系健康小鼠60只,隨機(jī)分為6組,每組10只。E.coli O78菌液10倍稀釋,小鼠腹腔注菌后開始觀察小鼠死亡情況,統(tǒng)計小鼠死亡率,選擇致小鼠80%死亡的菌濃度,進(jìn)行后續(xù)試驗。(2)聯(lián)合用藥最優(yōu)灌胃劑量的確定選取健康昆明系小鼠110只,公母各半,隨機(jī)分為11組,每組10只,分別為空白對照組、陽性對照組(鹽酸環(huán)丙沙星)、陰性對照組(生理鹽水)、乳酸乳球菌代謝物組中(0.0150g/kg·bw)、低(0.0075g/kg·bw)劑量組、大黃中(4g/kg·bw)、低(2g/kg·bw)劑量組以及聯(lián)合用藥L1(乳酸乳球菌代謝物0.0150g/kg·bw+大黃2g/kg·bw)、L2(乳酸乳球菌代謝物0.0075g/kg·bw+大黃2g/kg·bw)、L3(乳酸乳球菌代謝物0.0150g/kg·bw+大黃4g/kg·bw)、L4(乳酸乳球菌代謝物0.0075g/kg·bw+大黃4g/kg·bw)。試驗期7d,第4d分別灌胃后1h腹腔注射80%致死量E.coli O78。小鼠腹腔注菌后,觀察小鼠采食量、飲水次數(shù)、被毛粗亂情況、死亡率等指標(biāo)。結(jié)果表明,小鼠灌胃鹽酸環(huán)丙沙星最優(yōu)劑量為0.13g/kg·bw,乳酸乳球菌代謝物最優(yōu)劑量為0.0150g/kg·bw,大黃最優(yōu)劑量為2g/kg·bw,聯(lián)合用藥最優(yōu)劑量為L1(乳酸乳球菌代謝物0.0150g/kg·bw+大黃2g/kg·bw)。(3)聯(lián)合用藥對E.coli O78感染小鼠營養(yǎng)代謝和盲腸微生物及其相互作用關(guān)系的影響選取健康昆明系小鼠120只,隨機(jī)分為6組,每組20只,分別為空白對照組、陽性對照組、陰性對照組、乳酸乳球菌代謝物組、大黃組、聯(lián)合用藥組,按照(2)中最優(yōu)劑量進(jìn)行灌胃,第4d腹腔注菌后0h、24h、48h、72h眼球采血收集血液,同時無菌采集盲腸內(nèi)容物,進(jìn)行盲腸微生物試驗。結(jié)果表明,聯(lián)合用藥能增加小鼠盲腸內(nèi)乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量,增強(qiáng)乳酸脫氫酶活性,降低盲腸內(nèi)氨氮含量,降低血糖和血脂,增加胰島素和胰高血糖素水平。
[Abstract]:Inner Mongolia is the ancient Xilinguole pastoral koumiss low alcohol milk drinks. One of the modern medical certificate koumiss can tuberculosis, adjuvant therapy for reducing blood, improve the digestive system. In recent years, food safety problem has already caused widespread concern by the global people, Escherichia coli O157:H7, Listeria monocytogenes and other pathogens caused by the disease causes huge economic losses solve. Coli infection caused by Escherichia, reduce the loss of animal husbandry, has become a pressing matter of the moment. Microbial metabolites as a safe and non-toxic side effects of natural preservatives, has attracted the attention of researchers. Therefore, this test from Koumiss in drug screening and separation combined with rhubarb had a strong inhibitory effect on the strain E. coli O78. And through in vivo experiments, research on the infection of E. coli mice of O78 nutrition metabolism and caecum microorganism and their relationship The effect of the test: the separation and purification. Screening and identification of Koumiss isolated streak inoculation produce antibacterial substances of Lactococcus lactis after observation of colony morphology, Gram staining, microscopy and contact enzyme test, including gram negative cocci, catalase test, Oxford cup method screening for further purification of antibacterial substances of strain physiological and biochemical identification, 16S, rRNA amplification. Physiological and biochemical identification of inhibitory effect on E.coli O78 strains, further 16S rRNA identification, this strain was identified as Lactococcus lactis subsp. LactiS. two test: extraction and determination of lactic acid galactococcus metabolites by acid-base method of Lactococcus lactis metabolites extraction and in vitro antibacterial, determination of antibacterial diameter of Oxford cup method of determination of the minimum inhibitory concentration of micro plate and TTC method (MIC). The Lactococcus lactis metabolites and drug combination was 0. MIC EDTA 063mg/mL+0.2mg/mL FIC=0.41., Lactococcus lactis metabolites and Rhubarb Combination of MIC 0.033mg/mL+10.417mg/mL and FIC=0.20.. The results show that the combined effects of lactic acid galactococcus metabolites and rhubarb combined effect is better than the Lactococcus lactis metabolites and EDTA, more suitable for subsequent experiments. Experiment three: Determination of the combined effects of lactic acid galactococcus metabolites and rhubarb on the growth curve of coli O78 bacteria pathogenic E. turbidimetric determination of enzyme combined effect of Lactococcus lactis and metabolites of rhubarb on pathogenicity of E. coli O78. The antibacterial mechanism by using AKP and BCA kit were detected the effect on pathogenic E. coli O78 cell wall and cell membrane permeability. The results showed that the antibacterial drug combination on pathogenic E. coli O78 growth curve show "S" type, cell wall and cell membrane integrity damage of pathogenic E. coli O78, to enhance the permeability, Cytoplasm extravasation, increase the protein content of alkaline phosphatase and bacteria. Experiment four: the combined effect of Lactococcus and rhubarb on E. coli O78 in vivo antibacterial effect (1) pathogenic E.coli O78 on mice 80% death rate of the selected Kunming Department of health 60 mice were randomly divided into 6 groups, 10 rats in each group.E.coli O78 broth 10 times dilution, observation of the death of mice began to mice after inoculation, the death rate of mice, 80% mice induced by selection of bacteria and the concentration of death, for further test. (2) to determine the optimal combination of intragastric dose of 110 healthy Kunming mice were selected, male and female, were randomly divided into 11 groups, 10 rats in each group respectively, the blank control group, positive control group (ciprofloxacin hydrochloride), negative control group (saline), Lactococcus lactis group (0.0150g/kg metabolite BW), low dose group (0.0075g/kg - BW), big yellow (4g/kg - BW), low dose group (2g/kg - BW) And the combination of L1 (0.0150g/kg - bw+ metabolites of Lactococcus lactis rhubarb 2g/kg - BW), L2 (0.0075g/kg - bw+ metabolites of Lactococcus lactis rhubarb 2g/kg - BW), L3 (0.0150g/kg - bw+ metabolites of Lactococcus lactis rhubarb 4g/kg - BW), L4 (0.0075g/kg - bw+ metabolites of Lactococcus lactis rhubarb 4g/kg - BW). The test period 7d. 4D respectively after intragastric administration of intraperitoneal injection of 1H 80% lethal injection in abdominal cavity of O78. mice after E.coli, mice intake, drinking times, by wool thick chaos, mortality and other indicators. The results show that the optimal dose of ciprofloxacin hydrochloride orally for 0.13g/kg BW, the optimal dose of 0.0150g/kg metabolites of Lactococcus lactis BW, rhubarb optimal the dose was 2g/kg / BW, the combination optimal dose of L1 (0.0150g/kg - bw+ metabolites of Lactococcus lactis rhubarb 2g/kg - BW). (3) the combination of E.coli mice infected with O78 nutrition metabolism and caecum microorganism and their interactions The relationship between health and 120 healthy Kunming mice were randomly divided into 6 groups, 20 rats in each group, respectively. The blank control group, positive control group, negative control group, Lactococcus lactis metabolite group, rhubarb group, combination group (2), according to the optimal dose by intragastric administration by intraperitoneal injection of bacteria after 4D 0h, 24h, 48h, 72h eye blood collected blood, and cecal contents were collected aseptically, cecal microbial test. The results show that the combination can increase the number of mice in cecal Lactobacillus and Bifidobacterium, enhanced the activity of lactate dehydrogenase, reduced ammonia nitrogen content in the cecum, lowering blood glucose and blood lipids, increase insulin and glucagon level.

【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S816

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 韓旭;霍貴成;李春;劉寧;;氣相色譜法測定乳酸乳球菌脂肪酸[J];東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2009年09期

2 馬超;王丕武;付永平;張卓;劉宏禹;;乳酸乳球菌食品級表達(dá)載體的改造[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年19期

3 房杰;付瑞燕;李麗;黃潔潔;;一株重組乳酸乳球菌菌株抗氧化能力的研究[J];中國奶牛;2012年15期

4 秦艷青;金寧一;李昌;任大勇;沈明浩;;乳酸乳球菌同源整合載體的構(gòu)建及鑒定[J];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2012年06期

5 于建寧;宋小敬;王公金;潘偉芹;徐小波;于峰祥;李燕;;乳酸乳球菌電轉(zhuǎn)化方法的優(yōu)化[J];江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年08期

6 馬超;王丕武;付永平;張卓;劉宏禹;;乳酸乳球菌食品級表達(dá)載體的改造(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2010年04期

7 董華;劉天明;吳克學(xué);;乳酸乳球菌蘋果酸-乳酸酶基因的克隆[J];生物技術(shù)通報;2006年05期

8 任大勇;李昌;秦艷青;杜壽文;郭歡歡;劉宏鋒;洛陽;金寧一;;乳酸乳球菌高效電轉(zhuǎn)化方法的建立[J];中國獸藥雜志;2012年01期

9 顧文亮;夏啟玉;姚晶;胡新文;符少萍;郭建春;;重組植物甜蛋白馬賓靈的食品級乳酸乳球菌誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建[J];中國農(nóng)學(xué)通報;2012年30期

10 孟慶森;姜艷平;崔文;李海濱;喬薪瑗;葛俊偉;李一經(jīng);唐麗杰;;兩段牛乳鐵蛋白肽基因在乳酸乳球菌中的共表達(dá)[J];畜牧與獸醫(yī);2013年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張娟;傅瑞燕;李寅;陳堅;;谷胱甘肽在乳酸乳球菌酸脅迫和冷凍脅迫中的保護(hù)作用[A];中國生物工程學(xué)會第四次會員代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2005年

2 張娟;傅瑞燕;陳堅;李寅;;谷胱甘肽在乳酸乳球菌酸脅迫中的保護(hù)作用[A];2006中國微生物學(xué)會第九次全國會員代表大會暨學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2006年

3 孫磊;孔文濤;孔健;;乳酸乳球菌電轉(zhuǎn)化條件的研究[A];山東微生物學(xué)會第六次會員代表大會暨2004年學(xué)術(shù)年會論文集（上）[C];2004年

4 王秀麗;任曉冬;龍才;馬博宇;韓文瑜;;乳酸乳球菌培養(yǎng)條件的優(yōu)化[A];吉林省第六屆生命科學(xué)大型學(xué)術(shù)報告會論文集[C];2008年

5 傅瑞燕;陳堅;李寅;;外源谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶顯著提高乳酸乳球菌抗氧脅迫能力[A];中國生物工程學(xué)會第四次會員代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2005年

6 梁小波;鐘瑾;還連棟;;納豆激酶基因在乳酸乳球菌中的誘導(dǎo)表達(dá)[A];第二屆中國青年學(xué)者微生物遺傳學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2006年

7 孔健;馬桂榮;;乳酸乳球菌中限制和修飾酶基因LlaBⅢ的克隆及分析[A];新世紀(jì) 新機(jī)遇 新挑戰(zhàn)——知識創(chuàng)新和高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展（上冊）[C];2001年

8 付瑞燕;陳堅;李寅;;谷胱甘肽保護(hù)乳酸乳球菌SK11抵抗氧脅迫[A];2008年中國微生物學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2008年

9 王迎華;陳燕;高丹丹;曹郁生;;大腸桿菌galU基因在乳酸乳球菌中的克隆及對產(chǎn)胞外多糖的影響[A];2008年中國微生物學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2008年

10 龔芳紅;賀松;張德純;劉明方;郭亞楠;;幽門螺桿菌熱休克蛋白A在乳酸乳球菌中的表達(dá)及免疫學(xué)活性分析[A];重慶微生物學(xué)會第九屆會員代表大會暨學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前9條

1 宋麗;乳酸乳球菌upp基因缺陷互補(bǔ)型質(zhì)粒載體系統(tǒng)的構(gòu)建及其缺失菌生物學(xué)特性研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 李良;乳酸乳球菌發(fā)酵稀奶油過程中甲基酮的合成代謝調(diào)控[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2015年

3 傅瑞燕;利用代謝工程手段改善乳酸乳球菌脅迫抗性的研究[D];江南大學(xué);2006年

4 生舉正;透明質(zhì)酸合成途徑在乳酸乳球菌中的建立及微生物合成透明質(zhì)酸分子量調(diào)控機(jī)制的初步研究[D];山東大學(xué);2009年

5 莊重;人β-干擾素和大腸桿菌O157：H7表面抗原EspA在乳酸乳球菌食品級誘導(dǎo)表達(dá)體系中表達(dá)及相關(guān)免疫活性分析[D];山東大學(xué);2007年

6 汪川;可分泌高活性β-半乳糖苷酶的重組乳酸乳球菌株的構(gòu)建及其產(chǎn)酶特性的初步研究[D];四川大學(xué);2006年

7 徐毅;乳酸菌高效膜蛋白表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建及其自溶性質(zhì)的研究[D];山東大學(xué);2012年

8 胡春霞;大腸桿菌K88菌毛蛋白亞基FaeG重組乳酸乳球菌的構(gòu)建及其對ICR小鼠免疫保護(hù)的研究[D];浙江大學(xué);2009年

9 王振華;豬繁殖與呼吸綜合征病毒重組乳酸乳球菌粘膜免疫疫苗的構(gòu)建及免疫原性評價[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 蘇艷芳;人源金屬硫蛋白hMT-I的重組表達(dá)及其在乳酸乳球菌的表面展示[D];華南理工大學(xué);2015年

2 孫楠;以乳酸乳球菌為載體抗幽門螺桿菌疫苗的構(gòu)建與免疫效果[D];鄭州大學(xué);2016年

3 張躍;禽戊型肝炎病毒衣殼蛋白在乳酸乳球菌中的表達(dá)及其免疫保護(hù)作用與機(jī)理[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 張燕;酸馬奶源乳酸乳球菌代謝物和大黃聯(lián)合作用對小鼠盲腸微生物以及營養(yǎng)代謝的影響[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 王芬;表達(dá)雞柔嫩艾美耳球蟲AMA1蛋白的乳酸乳球菌免疫保護(hù)作用[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 齊琳琳;口蹄疫乳酸乳球菌活載體疫苗的構(gòu)建及黏膜免疫效果[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

7 徐海燕;不同地區(qū)自然發(fā)酵乳中乳酸乳球菌多位點序列分型研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

8 連元元;乳酸乳球菌耐鎘毒性作用機(jī)理的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

9 房杰;一株重組乳酸乳球菌抗氧脅迫機(jī)制的初探[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

10 秦艷青;乳酸乳球菌主要分泌蛋白的鑒定及其同源整合載體的構(gòu)建研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

，

本文編號：1763798