發(fā)布時間：2018-04-16 03:24

  本文選題：藏豬 + 胰島素樣生長因子�。� 參考：《中國獸醫(yī)科學》2017年05期

【摘要】：構(gòu)建藏豬IGF-1成熟肽基因的真核表達載體,通過畢赤酵母表達系統(tǒng)獲得具有生物活性的IGF-1成熟蛋白。根據(jù)GenBank中豬IGF-1基因設計1對引物,以構(gòu)建的藏豬pMD19-T-IGF-1重組質(zhì)粒為模板,克隆IGF-1成熟肽基因,并將其克隆于表達載體pPIC9k,獲得重組穿梭質(zhì)粒pPIC9k-IGF-1,電轉(zhuǎn)畢赤酵母GS115感受態(tài),對重組酵母轉(zhuǎn)化子經(jīng)MM、MD平板篩選和PCR鑒定后,經(jīng)G418抗性梯度篩選,獲得多拷貝重組菌株,甲醇誘導表達后進行Tricne-SDS-PAGE和Dot blot分析。Tricne-SDS-PAGE和Dot blot分析顯示,表達的目的蛋白分子質(zhì)量約為13 ku,獲得成功表達;CCK8法檢測顯示,純化后的IGF-1重組蛋白能夠促進細胞增殖。表明,本研究成功構(gòu)建了藏豬IGF-1成熟肽真核表達質(zhì)粒pPIC9k-IGF-1,并在畢赤酵母GS115中得到了有效表達,表達產(chǎn)物具有促進細胞增殖的生物活性。
[Abstract]:The eukaryotic expression vector of Tibetan pig IGF-1 mature peptide gene was constructed and the bioactive IGF-1 mature protein was obtained by Pichia pastoris expression system.According to the porcine IGF-1 gene in GenBank, a pair of primers were designed. Using the recombinant plasmid of Tibetan pig pMD19-T-IGF-1 as a template, the mature peptide gene of IGF-1 was cloned and cloned into the expression vector pPIC9k. the recombinant shuttle plasmid pPIC9k-IGF-1 was obtained, and the recombinant shuttle plasmid pPIC9k-IGF-1 was transformed into the GS115 receptive state of Pichia pastoris.The recombinant yeast transformants were screened by MMM-MD plate and PCR, and then screened by G418 resistance gradient. After methanol induced expression, the recombinant strains were analyzed by Tricne-SDS-PAGE, Dot blot, Tricne-SDS-PAGE and Dot blot.The molecular weight of the expressed target protein was about 13ku. the successful expression of CCK8 showed that the purified IGF-1 recombinant protein could promote cell proliferation.The results showed that the eukaryotic expression plasmid pPIC9k-IGF-1 of Tibetan pig IGF-1 mature peptide was successfully constructed and expressed in Pichia pastoris GS115. The expressed product has the biological activity of promoting cell proliferation.
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院動物微生態(tài)研究中心;成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學院;綿陽泰科生物技術(shù)有限公司;重慶畜牧科學院;
【基金】：“教育部長江學者和創(chuàng)新團隊發(fā)展計劃”創(chuàng)新團隊資助項目(IRT0848) 四川省高等學�？萍紕�(chuàng)新團隊資助項目(KM406183.1)
【分類號】：Q78;S828

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本文編號：1757094