本文選題：TLR4 + TLR2��； 參考：《石河子大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:該實驗分別探討了綿羊TLR4、TLR2基因的多態(tài)性且分別對其基因的多態(tài)位點進行布魯氏菌病的易感性的相關(guān)性分析,然后進行單倍型的構(gòu)建與分析,進一步得出和綿羊布魯氏菌病有關(guān)的單倍型類型。分別將TLR4、TLR2基因的SNPs和綿羊的多種疾病進行關(guān)聯(lián)研究,這能為運用輔助標記選擇法篩選優(yōu)良綿羊新品種,即為進行Toll樣受體有關(guān)抗病機理方面的研究提供了理論基礎(chǔ)。方法:1、該實驗對采集的480個綿羊血清進行了虎紅平板凝集實驗,檢測布魯氏菌,利用生物信息學(xué)方法對NCBI上公布的綿羊的TLR4、TLR2基因外顯子進行多態(tài)性比對分析,選出多態(tài)位點豐富的外顯子片段進行引物的設(shè)計并擴增該基因片段,再利用PCR-SSCP的技術(shù)方法分別對TLR4、TLR2基因的單核苷酸多態(tài)位點(SNPs)進行檢測,接著分別對具有不同等位基因型的綿羊個體進行克隆測序,利用分子生物學(xué)軟件對測序結(jié)果進行相關(guān)性比對分析并利用SHEsis在線軟件對所有的SNP位點分別進行其等位基因頻率、基因型頻率的差異性統(tǒng)計分析,分析其與布魯氏菌病易感性的相關(guān)性。2、分別將80個布魯氏菌陽性個體與陰性的綿羊個體TLR4的PCR產(chǎn)物送測序,并對測序結(jié)果進行SNPs的檢測,再用軟件分別對其進行Hardy-Weinberg平衡的檢測及連鎖不平衡的分析,最后利用SHEsis在線軟件對得到的SNPs進行單倍型的構(gòu)建并對其單倍型進行相關(guān)性研究,初步篩選與布魯氏菌病易感性相關(guān)的單倍型。結(jié)果:1、用虎紅平板凝集試驗總共檢測了480只綿羊的血清,其中中國美利奴羊290只,結(jié)果檢測有80個布魯氏菌感染陽性個體,210個布魯氏菌感染陰性個體。布魯氏菌陽性檢出率為27.59%。用虎紅平板凝集試驗檢測哈薩克羊100只,發(fā)現(xiàn)有16個布魯氏菌陽性個體,84個布魯氏菌陰性個體。布魯氏菌陽性檢出率為16%。用虎紅平板凝集試驗檢測湖羊90只,發(fā)現(xiàn)有15個布魯氏菌陽性個體,75個布魯氏菌陰性個體。布魯氏菌陽性檢出率為16.67%。2、TLR4 exon 3的序列內(nèi)共檢測到7個SNP有1個位點為無義突變位點,其余6個為有義突變,其中不存在插入和缺失位點。TLR2基因部分序列內(nèi)有8個SNP且都為無義突變位點。3、對NCBI上下載的有關(guān)綿羊的所有的TLR4、TLR2的基因片段進行序列的相關(guān)性比對分析,結(jié)果表明不同綿羊品種之間的SNPs位點具有差異性。4、該實驗分別將TLR4、TLR2基因的多態(tài)位點分別與布魯氏菌病的易感性進行關(guān)聯(lián)分析,可得出TLR4基因上的1180G/T位點和中國美利奴羊布魯氏菌病的易感性具有相關(guān)性,而其他多態(tài)位點的基因頻率和基因型頻率在布魯氏菌病感染陽性組與陰性組中都沒有有統(tǒng)計學(xué)意義。而TLR2的8個位點都是無義突變因此可能和中國美利奴羊布魯氏菌病易感性不相關(guān)。5、對達到構(gòu)建單倍型要求的TLR4多態(tài)位點進行連鎖不平衡遺傳性分析,共得到2個LD Block在TLR4第三外顯子內(nèi),各個SNPs之間也有一定連鎖不平衡,將其按順序稱為Block1-Block2且都包含有兩個SNPs位點。Block1包括C1063 T、A1085 G。Block2包括C1088T、C1094G。6、對中國美利奴羊TLR4基因進行單倍型構(gòu)建時共構(gòu)建了7種單倍型類型,經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)Hap2和Hap4這兩個單倍型的頻率在感染陽性組中的頻率分別為20.05%和32.4%,都明顯比正常組高且其單倍型的頻率分布具有差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),因此可判斷這兩種單倍型可能和中國美利奴羊布魯氏菌病的易感性有關(guān)。結(jié)論:1、對GenBank中的有關(guān)綿羊所有的TLR4、TLR2的基因片段進行序列比對分析,結(jié)果表明不同綿羊品種之間的SNPs位點具有差異性。2、通過分析發(fā)現(xiàn)在中國美利奴羊TLR4外顯子3的序列內(nèi)共檢測到7個SNP,有1個位點為無義突變位點,其余6個均為有義突變。TLR2基因部分序列內(nèi)有8個SNP且都為無義突變位點。推測中國美利奴羊TLR2基因的外顯子區(qū)域可能相對比較保守。3、對綿羊TLR4、TLR2多態(tài)性與布魯氏菌病易感性進行相關(guān)性分析,發(fā)現(xiàn)TLR4基因的1180G/T位點可能與綿羊的布魯氏菌病易感性有關(guān)聯(lián),而其他SNP位點的基因頻率和基因型可能與布魯氏菌病易感性不顯著相關(guān)。4、對符合要求的TLR4多態(tài)位點位點進行連鎖不平衡分析總共得到2個LD Block,對所有的單倍型進行統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)其中Hap2和Hap4這兩種單倍型的頻率分別在病例組中的頻率都明顯比正常組高且其單倍型的頻率分布具有差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),因此可判斷這兩種單倍型可能和中國美利奴羊布魯氏菌病的易感性有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S858.26

【參考文獻】

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1 李俊;張勇;楊紅;張雄;龍泳;;從江香豬BMP15基因多態(tài)性研究及單倍型構(gòu)建[J];中國畜牧雜志;2016年07期

2 衛(wèi)美蓉;劉頌;趙真真;王笑峰;羅兵;;Toll樣受體2基因多態(tài)性與胃癌及EB病毒相關(guān)胃癌易感性的關(guān)系[J];癌變·畸變·突變;2015年05期

3 林茂虎;朱曉應(yīng);苗芮;何蕾;賈寧;;TLR-2和TLR-4受體單核苷酸多態(tài)性與鮑曼不動桿菌感染的相關(guān)性[J];解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2015年08期

4 劉繼峰;瞿鑌;王向東;王琪;趙曉霞;許愛娥;;TLR2、4基因多態(tài)性與尖銳濕疣患者易感性及復(fù)發(fā)的相關(guān)性研究[J];中華男科學(xué)雜志;2015年08期

5 李靜;姜相君;;Toll樣受體及其基因多態(tài)性與胃黏膜疾病相關(guān)性的研究進展[J];胃腸病學(xué);2015年07期

6 趙剛;余梅;崔群維;周璇;開興;李惠俠;張繼才;王根林;黃必志;;牛血液組胺濃度、TLR4基因多態(tài)性與抗蜱能力的關(guān)聯(lián)分析[J];中國奶牛;2015年06期

7 吳春香;薛超;廖蘊華;黎偉;曹白嬋;彭茜;韋曉梨;龔愛媚;;TLR4基因1837A/G多態(tài)性與廣西漢族人群原發(fā)抗中性粒細胞胞漿抗體相關(guān)性小血管炎的相關(guān)性[J];廣東醫(yī)學(xué);2015年04期

8 韓璐;趙真真;王笑峰;李慧;羅兵;;TLR3和TLR4基因多態(tài)性與EBV相關(guān)胃癌易感性的關(guān)系[J];腫瘤防治研究;2015年01期

9 呂偉麗;馬小軍;張小麗;張國華;;綿羊TLR4基因的遺傳多態(tài)性分析[J];江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報;2014年04期

10 袁欣;;反芻動物布魯氏菌病致病機理和防控[J];中國畜牧業(yè);2014年09期

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本文編號：1754294