本文選題：傳染性支氣管炎 + 弱毒疫苗��； 參考：《山東農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：雞傳染性支氣管炎(Infectious bronchitis,IB)是由雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的一類急性、高度接觸傳染性疾病。弱毒活疫苗主要用于該病的防御,但常用IB疫苗已不能對流行株提供有效的免疫保護(hù),開展能對流行毒株提供有效保護(hù)的弱毒疫苗的研究勢在必行。本試驗所用毒株SDZB0808是在山東某雞場商品肉雞中分離得到。對SDZB0808全基因組測序和遺傳演化分析表明該毒株屬目前我國主要流行株;交叉中和實驗結(jié)果表明該毒株抗原譜較廣,產(chǎn)生的抗體能和多種血清型抗原發(fā)生交叉中和反應(yīng),適合作為候選疫苗毒株。SDZB0808在SPF雞胚被連續(xù)傳代致弱,本研究對獲得不同代次的子代病毒進(jìn)行致弱效果分析,P100和P110均有良好的保護(hù)效果。對SDZB0808毒株和P100進(jìn)行全基因序列分析:從P62開始,以后的每個代次都在3244-3273位點(diǎn)連續(xù)性缺失30個核苷酸,導(dǎo)致ORF 1a編碼的蛋白在906-915位缺失10個氨基酸。根據(jù)傳代前后基因型的缺失差異,設(shè)計特異性引物,沒有氨基酸缺失的基因組命名為QD基因組,缺失氨基酸的基因組為RD基因組;利用SYBR Green I實時熒光定量檢測方法對P60、P100和P110存在的不同基因組進(jìn)行定量分析。研究結(jié)果表明兩種基因組在不同代次中存在的比例不同,且呈逐步下降的趨勢。SDZB0808毒力致弱可能與其基因組序缺失10個氨基酸有關(guān),在雞胚上傳代致弱的機(jī)理可能是雞胚對弱毒基因的定向選擇性篩選的結(jié)果。具體的定向篩選弱毒基因機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。本研究對初步篩選的P100進(jìn)行疫苗相關(guān)的初步評價,P100以105.5EID50點(diǎn)眼、滴鼻免疫3日齡SPF雞后,試驗雞與對照組均精神良好,無明顯臨床癥狀和病理變化,氣管和腎臟組織也無病理組織學(xué)損傷,發(fā)病率與死亡率均為0%,表明P100對雛雞無致病性,具有良好的安全性。P100以104.5EID50點(diǎn)眼、滴鼻免疫SPF雞,2周后用同源強(qiáng)毒SDZB0808和異源強(qiáng)毒SDIB821/2012分別攻毒,攻毒劑量106.0EID50。結(jié)果表明:P100免疫過的雞對強(qiáng)毒的攻擊具有100%的臨床保護(hù)。P100在雞體內(nèi)連續(xù)傳代5代,每個代次的試驗雞均無臨床特征出現(xiàn),精神良好,收集各個代次的病料進(jìn)行RT-PCR檢測,結(jié)果為陽性,接種10 d SPF雞胚,雞胚出現(xiàn)明顯的病理變化,這表明P100具有良好的穩(wěn)定性,雞胚傳代后毒力無返強(qiáng)。綜上所述,初步評價P100對雞安全性良好,免疫效力合格,并且毒力穩(wěn)定,可以作為IBV弱毒疫苗候選株。
[Abstract]:Infectious bronchitis (IBV) is an acute and highly contagious disease caused by infectious bronchitis virus (IBV).The attenuated live vaccine is mainly used for the defense of the disease, but the commonly used IB vaccine can no longer provide effective immunity protection to the epidemic strain, so it is imperative to carry out the research on the attenuated virus vaccine which can provide the effective protection for the epidemic strain.The virus strain SDZB0808 was isolated from commercial broilers in a chicken farm in Shandong province.The SDZB0808 genome sequencing and genetic evolution analysis showed that the strain was the main prevalent strain in China, and the cross-neutralization test showed that the antigen-spectrum of the strain was wide, and the antibody produced could cross neutralize with many serotypes of antigens.SDZB0808 is suitable to be used as a candidate vaccine strain to weaken continuously in SPF embryo. In this study, we analyzed the weakening effect of P100 and P110 on different generations of progenies. Both P100 and P110 have good protective effects.The whole gene sequence of SDZB0808 strain and P100 was analyzed. From P62 onwards, 30 nucleotides were continuously deleted at 3244-3273 in each generation, which resulted in the deletion of 10 amino acids at the 906-915 position of the protein encoded by ORF 1a.According to the difference of genotype deletion before and after passage, specific primers were designed. The genome without amino acid deletion was named QD genome, and the missing amino acid genome was Rd genome.The different genomes of P60 P100 and P110 were quantitatively analyzed by SYBR Green I real-time fluorescence quantitative detection.The results show that the proportion of the two genomes in different generations is different, and the tendency of decreasing gradually. The virulence of SDZB0808 may be related to the deletion of 10 amino acids in the genome.The mechanism of debilitating in chicken embryos may be the result of selective screening of virulent genes in chicken embryos.The specific mechanism of directed screening of attenuated genes remains to be further studied.In this study, the preliminary evaluation of vaccine related to P100 was carried out. After 3 days of SPF chickens were immunized with 105.5EID50, the experimental chickens and the control group were both in good spirits and had no obvious clinical symptoms and pathological changes.There was no histopathological injury in trachea and kidney, and the morbidity and mortality were 0, which indicated that P100 had no pathogenicity and had good safety with 104.5EID50.SPF chickens were inoculated by nasal drip for 2 weeks with homologous SDZB0808 and heterotoxic SDIB821/2012 at 106.0 EID50.The results showed that the broilers immunized with 1: P100 had 100% clinical protection. P100 was passed on for 5 consecutive generations in chickens. The tested chickens of each generation had no clinical characteristics and were in good spirits. The disease materials of each generation were collected for RT-PCR detection.The results showed that P100 had a good stability and the virulence of chicken embryo was not strong after passage. The results showed that there were obvious pathological changes in chicken embryo after 10 days inoculation with chicken embryo, which indicated that P100 had good stability and the virulence of chicken embryo was not strong after passage.In conclusion, P100 could be used as a candidate for IBV attenuated vaccine because of its good safety, qualified immunity and stable virulence.
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.4

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本文編號：1750939