發(fā)布時(shí)間：2018-04-13 20:38

  本文選題：豬流行性腹瀉病毒 + 分離鑒定　； 參考：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一種高度接觸性腸道傳染病,發(fā)病特征為腹瀉、嘔吐、脫水,新生仔豬的死亡率高達(dá)100%,各種年齡豬和不同品系的豬群均易感。該病于1971年在歐洲首次被報(bào)道后,不久相繼在亞洲及南美相繼暴發(fā),給全球養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。自2010年10月開始,PED在中國東南部10余個(gè)養(yǎng)豬大省暴發(fā)并迅速波及到全國,呈現(xiàn)出高發(fā)病率、高死亡率的態(tài)勢,死亡仔豬超過100萬頭,給中國養(yǎng)豬業(yè)造成了沉重的打擊。近幾年P(guān)ED的流行范圍仍在不停的擴(kuò)大,成為嚴(yán)重危害中國養(yǎng)豬業(yè)的傳染病之一,直至目前仍沒有削減的趨勢。為進(jìn)一步了解豬流行性腹瀉病毒的流行特點(diǎn)及遺傳變異情況,加強(qiáng)對(duì)豬流行性腹瀉的防控,本研究對(duì)疑似PED的仔豬小腸和糞便樣品進(jìn)行了PEDV的分離與鑒定,并對(duì)分離到的毒株的S基因進(jìn)行了序列測定與遺傳變異分析,其主要結(jié)果如下:1.PEDV SX-YL株的分離與鑒定:將經(jīng)RT-PCR鑒定為PEDV陽性的病料樣品處理后,接種于Vero細(xì)胞,盲傳至8代時(shí),部分細(xì)胞開始出現(xiàn)皺縮、變圓、顆粒物質(zhì)增多、折光性增強(qiáng)等CPE,對(duì)其進(jìn)行TCID50測定,TCID50為10-6.125/mL。為證明該病變是由PEDV所引起,采用RT-PCR對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行了PEDV N基因的擴(kuò)增,結(jié)果均為陽性。進(jìn)一步進(jìn)行了間接免疫熒光檢測(IFA),結(jié)果表明,用PEDV陽性小鼠血清在PEDV感染24h后的Vero細(xì)胞中檢測到了病毒抗原的存在,可見到紅色熒光,而未被PEDV感染的Vero細(xì)胞,觀察不到熒光。最終確定該病毒為PEDV,將其命名為PEDV SX-YL株。2.PEDV SX-YL株S基因的遺傳變異分析:對(duì)前面分離到的PEDV SX-YL株的S基因進(jìn)行測序,結(jié)果表明,該毒株S基因全長為4149bp,編碼1382個(gè)氨基酸,與歐洲經(jīng)典毒株CV777、韓國分離株DR13、歐洲近年流行株以及中國近年流行株的S基因進(jìn)行比對(duì),該毒株與經(jīng)典毒株CV777、DR13、SC1402毒株同源性高達(dá)99%以上,處于同一分支,表明其與經(jīng)典毒株的親緣關(guān)系較近。綜上所述,該研究從疑似PED的仔豬病料成功分離出一株P(guān)EDV毒株,與經(jīng)典毒株有較近的親緣關(guān)系,為陜西規(guī)�；i場PED科學(xué)合理的免疫程序制定與有效防控提供了參考信息。
[Abstract]:Porcine epidemic diarrhea (PED) is a highly contact intestinal infectious disease caused by porcine epidemic diarrhea virus (PEDVV), characterized by diarrhea, vomiting, dehydration.The mortality rate of newborn piglets is as high as 100, and pigs of all ages and strains are susceptible.The disease was reported for the first time in Europe in 1971, and soon after outbreak in Asia and South America, which caused serious economic losses to the global pig industry.The outbreak of PED in more than 10 major pig raising provinces in southeast China began in October 2010 and spread rapidly to the whole country, showing a trend of high morbidity and high mortality. More than 1 million piglets died, which caused a heavy blow to the pig industry in China.In recent years, the epidemic scope of PED is still expanding, and it has become one of the infectious diseases that seriously harms the pig industry in China. Up to now, there is still no trend of reduction.In order to further understand the epidemic characteristics and genetic variation of porcine epidemic diarrhea virus and strengthen the prevention and control of porcine epidemic diarrhea, the small intestine and fecal samples of piglets suspected of PED were isolated and identified by PEDV.The S gene of the isolated strain was sequenced and genetic variation was analyzed. The main results were as follows: 1. The isolates of PEDV SX-YL strain were isolated and identified as follows: the samples identified by RT-PCR as PEDV positive were treated and inoculated into Vero cells for 8 passages.Some cells began to crinkle, round, increase in particle matter, increase in refraction, and other CPEs. The TCID50 of these cells was 10 ~ 6.125% mL / mL by TCID50.In order to prove that the lesion was caused by PEDV, RT-PCR was used to amplify the PEDV N gene of cell culture, and the results were all positive.Further indirect immunofluorescence assay was performed. The results showed that the presence of virus antigen was detected in Vero cells 24 hours after PEDV infection with the serum of PEDV positive mice. Red fluorescence could be seen in Vero cells without PEDV infection, but no fluorescence could be observed in Vero cells infected with PEDV.Finally, the virus was named PEDV SX-YL strain. 2.The genetic variation analysis of S gene of PEDV SX-YL strain: the S gene of PEDV SX-YL strain was sequenced. The result showed that the S gene of the virus strain was 4149 BP, encoding 1382 amino acids.Compared with the classical European strain CV777, the Korean isolate DR13, the European strain of recent epidemic and the Chinese strain of recent years, the S gene of this strain is more than 99% homology with the classical strain CV777, DR13, SC1402, and is in the same branch.The results showed that the relationship between the strain and the classical strain was close.To sum up, a strain of PEDV virus was successfully isolated from the piglets infected with suspected PED, which was closely related to the classical strain, which provided reference information for the establishment of scientific and reasonable immunization procedures and effective prevention and control of PED in large-scale pig farms in Shaanxi Province.
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.651

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本文編號(hào)：1746104