本文選題：鴨疫里默氏桿菌 + 分離��； 參考：《安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：鴨疫里默氏桿菌病又稱鴨傳染性漿膜炎(Duck infectious serositis),是由鴨疫里默氏桿菌(Riemerella anatipestifer,RA)引起的一種主要侵害鴨的細(xì)菌性傳染病,該病發(fā)病率、死亡率都很高,嚴(yán)重影響全球養(yǎng)鴨業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。2013年7月和2014年4月安徽省內(nèi)兩鵝養(yǎng)殖場先后爆發(fā)雛鵝急性死亡的病例,患病雛鵝出現(xiàn)拉白色或綠色拉稀、腳掌發(fā)黃無血色、頭頸扭曲震顫、共濟(jì)失調(diào)等癥狀,甚至有部分病鵝未表現(xiàn)癥狀就急性死亡。對病死雛鵝剖檢可見心臟、肝臟覆蓋纖維素性滲出物,腦膜嚴(yán)重出血。根據(jù)臨床的表現(xiàn)和剖檢所見病理變化初步懷疑為鴨疫里默氏桿菌病。從患病雛鵝的腦部取樣進(jìn)行細(xì)菌分離,獲得的單個(gè)菌落直徑約1mm,凸起,濕潤,光滑,呈露珠狀,鏡檢為革蘭氏染色陰性短小桿菌。通過使用PCR方法擴(kuò)增分離菌株的16S rRNA后進(jìn)行測序,序列比對結(jié)果顯示,兩株分離菌株與鴨疫里默氏桿菌同源性為99%,證實(shí)引起這兩起雛鵝急性死亡疫病的病原菌為RA,分別命名為LAG1株和HFG1株。兩株RA分離株的生化特性試驗(yàn)結(jié)果一致,二者均為觸酶試驗(yàn)結(jié)果和脲酶試驗(yàn)結(jié)果陽性,不還原硝酸鹽,不能液化明膠,多種糖微量反應(yīng)試驗(yàn)、醇酵解試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、MR試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)結(jié)果均為陰性。通過血清凝集試驗(yàn)鑒定這兩株鵝源RA均為血清15型。根據(jù)RA ompA基因序列的保守區(qū)設(shè)計(jì)引物,建立檢測RA的PCR方法,敏感性試驗(yàn)表明所建立的PCR檢測方法可檢出213ng的RA的DNA。對抗生素的耐藥性檢測結(jié)果表明LAG1株和HFG1株RA對β-內(nèi)酰胺類藥物(d18mm),四環(huán)素類藥物(d16mm),大環(huán)內(nèi)酯類藥物高度敏感(d23mm);對氯霉素中度敏感(17mmd13mm);對氨基糖苷類藥物耐藥(d11mm)。LAG1和HFG1對不良環(huán)境的抵抗力略有不同,在酸性條件下HFG1的耐受能力較強(qiáng),而在堿性條件下LAG1的耐受力較強(qiáng);在抵抗氧化劑方面H2O2對LAG1和HFG1的最小殺菌濃度(MBC)分別為40mM和20mM;在抵抗洗滌劑TritonX-100對LAG1和HFG1的最小殺菌濃度(MBC)均為0.004%。采用10倍倍比稀釋的方法將菌液計(jì)數(shù)并稀釋到含菌量為109、108、107、106、105、104和103CFU/mL的7個(gè)稀釋度,采用腿部肌肉注射的方法攻毒7日齡櫻桃谷鴨,測定LAG1和HFG1的半數(shù)致死量(LD50),結(jié)果顯示:LAG1株的LD50為7.75×103CFU;HFG1株的LD50為5.91×105CFU。將這兩株RA分別制備油乳劑滅活苗免疫櫻桃谷鴨測定其對血清1型WJ4、血清2型Yb2、血清10型HXb2及原菌株的免疫保護(hù)效率,結(jié)果顯示LAG1株制備的滅活油乳劑疫苗在二次免疫14d后,對原菌株和10型HXb2的攻擊可以提供較高的保護(hù),保護(hù)率分別可以達(dá)到85.7%(6/7)和71.43%(5/7),對血清1型WJ4、血清2型Yb2攻擊的保護(hù)率很低均為14.2%(1/7);。使用HFG1株所制備的滅活油乳劑疫苗對原菌株具有很好的保護(hù)率為85.7%(6/7),對血清10型HXb2的保護(hù)力欠佳,為和57.14%(4/7)。對血清1型WJ4無保護(hù)力,對血清2型Yb2的保護(hù)率僅為14.2%(1/7)。結(jié)果對RA疫苗的研制提供一定的指導(dǎo)意義。
[Abstract]:Riemer's disease, also known as Duck infectious serositis, is a major bacterial infectious disease which is caused by Riemerella anatipestifera. The incidence and mortality of the disease are very high.In July 2013 and April 2014, the two goose farms in Anhui Province have experienced acute goose deaths. The sick chicks appear to be white or green, their feet are yellow and bloodless, and their heads and necks are twisted and tremors.Ataxia and other symptoms, and even some sick geese did not show symptoms on the acute death.The heart and liver were covered with cellulose exudate and meningeal hemorrhage was observed in dead goose.According to the clinical manifestation and the pathological changes of autopsy, it was suspected to be Riemer's disease of duck.The isolated bacteria were isolated from the brain of the infected goose. The single colony was about 1 mm in diameter, protruding, moist, smooth and dewdrop.The 16s rRNA of the isolated strain was amplified by PCR and sequenced.The homology between the two isolates and Riemer Duck strain was 99. It was confirmed that the pathogen causing the acute death blight of Gosling was RAA, named LAG1 strain and HFG1 strain, respectively.The biochemical characteristics of the two RA isolates were identical. Both of them were positive results of thixozyme test and urease test, no reduction of nitrate, no liquefaction of gelatin, multi-sugar micro-reaction test, alcohol fermentation test and V-P test.The results of indole test were negative.The seroagglutination test identified the two geese RA as serotype 15.According to the conserved region of RA ompA gene primer was designed to establish a PCR method for detecting RA. The sensitivity test showed that the established PCR detection method could detect 213ng RA.Resistance to adverse environments is slightly different,The tolerance of HFG1 in acidic condition was stronger than that of LAG1 in alkaline condition.The minimum bactericidal concentration of H2O2 to LAG1 and HFG1 were 40mM and 20mM, respectively, and the minimum bactericidal concentration of TritonX-100 to LAG1 and HFG1 were 0.004.The bacterial fluid was counted and diluted to 7 dilutions containing 109108107106105104 and 103CFU/mL by 10 times dilution, and the 7 day old Cherry Valley duck was poisoned by leg intramuscular injection.Half lethal dose (LD50) of LAG1 and HFG1 were determined. The results showed that the LD50 of the strain was 7.75 脳 10 ~ 3 CFU / F _ 1 and the LD50 of the strain was 5.91 脳 10 ~ 5 CFU.Cherry Valley Ducks were immunized with oil emulsion inactivated vaccine prepared from these two strains of RA, respectively. The immune protection efficiency of these two strains against serotype 1 WJ4, serotype 2 Yb2, serotype 10 HXb2 and original strain were determined. The results showed that the inactivated oil emulsion vaccine prepared by LAG1 strain was immunized for 14 days after secondary immunization.The protective rates of the original strain and type 10 HXb2 were 85.7% and 71.43%, respectively. The protective rates of WJ4 and type 2 Yb2 were 14.2 / 7 / 7 respectively.The inactivated oil emulsion vaccine prepared with HFG1 strain had a good protective rate of 85.7% to the original strain, and had poor protection to serotype 10 HXb2 (57.14% / 7%).There was no protective effect on serum type 1 WJ4, but the protective rate of serum type 2 Yb2 was only 14.2g / 7.The results provide some guidance for the development of RA vaccine.
【學(xué)位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.61

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本文編號：1740289