本文選題：狂犬病 + IgG�。� 參考：《吉林大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：狂犬病是由彈狀病毒科、狂犬病病毒屬的狂犬病病毒（RABV）引起的一種人獸共患病毒病，患病動(dòng)物和人常出現(xiàn)嚴(yán)重的腦脊髓炎癥狀，一旦發(fā)病，死亡率接近100%。全世界每年因感染狂犬病死亡的人數(shù)約6萬(wàn)人，其中絕大部分發(fā)生在非洲和亞洲。狂犬病的自然宿主范圍很廣，幾乎所有的溫血?jiǎng)游锞筛腥敬瞬　Ｈ俏覈?guó)狂犬病毒最主要的貯藏宿主和傳播媒介，95%以上的人狂犬病是通過(guò)患病犬咬傷或者舔舐破損皮膚而引起。 世界衛(wèi)生組織（WHO）和世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）認(rèn)為體內(nèi)中和抗體水平≥0.5IU/mL時(shí)，機(jī)體能抵抗該病的感染。動(dòng)物免疫覆蓋率達(dá)到70%時(shí)，可有效控制狂犬病的傳播。因此在狂犬病控制過(guò)程中，通過(guò)提高犬狂犬疫苗免疫覆蓋率并結(jié)合抗體監(jiān)測(cè)，可有效防止免疫失敗及漏免現(xiàn)象，這對(duì)于控制我國(guó)狂犬病的流行傳播有著十分重要的意義。目前WHO和OIE推薦的中和抗體檢測(cè)方法分別為快速熒光灶抑制試驗(yàn)（RFFIT）和熒光抗體病毒中和試驗(yàn)（FAVN）。雖然這兩種方法能夠?qū)w內(nèi)中和抗體準(zhǔn)確定量，但都需要操作強(qiáng)毒和細(xì)胞，還需一定的儀器設(shè)備，對(duì)血清的質(zhì)量要求也較高，且試驗(yàn)周期較長(zhǎng)，不適于大規(guī)模的樣品檢測(cè)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）通過(guò)酶催化底物的顏色變化來(lái)指示抗原抗體反應(yīng)，不僅可以避免上述兩種方法的弊端，而且可以實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的大批量快速檢測(cè)。辣根過(guò)氧化物酶（HRP）因其分子量小，對(duì)化學(xué)修飾的穩(wěn)定性好等優(yōu)勢(shì)，成為ELISA中最常用的標(biāo)記酶。本試驗(yàn)擬通過(guò)硫酸銨沉淀和Protein A親和層析法提取犬高免血清中的抗狂犬病毒IgG抗體，并經(jīng)PAGE電泳鑒定純度后，采用過(guò)碘酸鈉氧化法標(biāo)記HRP，將此酶標(biāo)抗體作為競(jìng)爭(zhēng)抗體，采用直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法（c-ELISA）測(cè)定血清樣品中的抗體效價(jià)，以此來(lái)避免間接ELISA法在大規(guī)�？贵w檢測(cè)中存在的非特異性。 犬抗狂犬病病毒IgG抗體純化。本實(shí)驗(yàn)中，，采用改進(jìn)的硫酸銨沉淀法提取犬高免血清中抗狂犬病病毒IgG抗體，經(jīng)Protein A親和層析法精純后，用SDS-PAGE和ELISA檢測(cè)純化抗體的純度和活性。經(jīng)檢測(cè)，硫酸銨沉淀純化后的抗體回收率為96%，抗體效價(jià)約為38102，Protein A親和層析的抗體效價(jià)約為39102。 純化抗體的HRP標(biāo)記及其工作濃度篩選。應(yīng)用過(guò)碘酸鈉氧化法將HRP標(biāo)記到純化IgG上，經(jīng)45%硫酸銨沉淀收獲酶標(biāo)記抗體。經(jīng)紫外分光光度法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，酶標(biāo)抗體中的酶結(jié)合率為39%。通過(guò)方陣法確定的ELISA最適反應(yīng)條件為：最佳抗原包被濃度為50μ g/mL，酶標(biāo)抗體最佳稀釋度為1:1000。應(yīng)用犬易感的幾種病原包被，發(fā)現(xiàn)所制酶標(biāo)抗體與它們均無(wú)交叉反應(yīng)性。 ELISA檢測(cè)抗體標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立。將標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清二倍倍比稀釋后，采用c-ELISA法測(cè)血清抗體效價(jià)和吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到的線性回歸方程為Y=－6.387X＋5.617，決定系數(shù)為R2=0.940。確定該方法的敏感度為0.25IU/mL，檢測(cè)范圍為0.25-4IU/mL。采用該方法測(cè)定血清樣品中抗體滴度，并與FAVN法對(duì)比，發(fā)現(xiàn)兩者所得結(jié)果無(wú)顯著性差異（P=0.092，P＞0.05）。精密性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，平均板內(nèi)變異系數(shù)為4.76%，平均板間變異系數(shù)為5.89%。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.655

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 張和平;岳喜慶;馮巧萍;劉長(zhǎng)江;孟憲文;;飽和硫酸銨法提取血清中IgG最佳條件的研究[J];中國(guó)乳品工業(yè);2006年01期

2 孟勝利;徐葛林;程滿榮;舒祥;雷勇良;朱風(fēng)才;周敦金;王定明;明賀田;吳杰;嚴(yán)家新;楊曉明;;中國(guó)狂犬病病毒遺傳多樣性分析[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2010年05期

本文編號(hào)：1739258