本文選題：傳染性造血器官壞死病病毒(IHNV) + 糖蛋白　； 參考：《中國獸醫(yī)雜志》2017年01期

【摘要】：本研究旨在克隆G基因全長并與其他傳染性造血器官壞死病病毒(IHNV)株進(jìn)行分析,為IHNV的預(yù)防檢測提供依據(jù)。通過提取IHNV-G蛋白RNA并進(jìn)行擴(kuò)增,將其克隆到p MD-18T并與p Chlamy-4載體相連,重組到萊茵衣藻中并提取總蛋白,結(jié)果可得:擴(kuò)增片段長度為1 500 bp,經(jīng)SDS-PAGE電泳得到一條大約為58 k Da的蛋白條帶,Westen Blot分析結(jié)果顯示,重組萊茵衣藻所表達(dá)的蛋白可以與6×HIS標(biāo)簽抗體特異性結(jié)合;并且以重組表達(dá)的G蛋白為抗原,鼠抗IHNV血清為一抗,辣根過氧化物酶標(biāo)記的驢抗鼠IgG為二抗,再次進(jìn)行Westen Blot檢驗(yàn),其結(jié)果顯示,經(jīng)誘導(dǎo)后的G蛋白能與鼠抗IHNV血清反應(yīng),并在58 k Da處出現(xiàn)了一條明顯的特異性條帶,具有良好的反應(yīng)原性。表明重組萊茵衣藻表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建成功。
[Abstract]:The purpose of this study was to clone the G gene and analyze it with other infectious hematopoietic organ necrosis virus (IHNV) strains in order to provide evidence for the prevention and detection of IHNV.IHNV-G protein RNA was extracted and amplified, then cloned into p MD-18T and ligated with p Chlamy-4 vector. The protein was recombined into Chlamydomonas rhinorrhoeae and the total protein was extracted.The results showed that the amplified fragment length was 1 500 BP, and a protein band of about 58 kDa was obtained by SDS-PAGE electrophoresis. The results showed that the expressed protein of Chlamydomonas rhinella could specifically bind to 6 脳 HIS tag antibody.Using recombinant G protein as antigen, mouse anti IHNV serum as first antibody and horseradish peroxidase labeled donkey anti mouse IgG as second antibody, Westen Blot test was carried out again. The results showed that the induced G protein could react with mouse anti IHNV serum.There was a specific band at 58 kDa, which had good reactivity.The results showed that the recombinant expression system of Chlamydomonas rhinella was successfully constructed.
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;內(nèi)蒙古烏蘭察布市農(nóng)牧業(yè)綜合行政執(zhí)法支隊(duì);內(nèi)蒙古烏蘭察布市水產(chǎn)站;吉林省衛(wèi)生檢測檢驗(yàn)中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(30972191) 吉林省留學(xué)人員創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)項(xiàng)目(201523) 長春市農(nóng)業(yè)先進(jìn)實(shí)用技術(shù)的示范推廣項(xiàng)目(20130215) 農(nóng)業(yè)部948項(xiàng)目(2014Z34)
【分類號】：S852.65

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本文編號：1738208