本文選題：豬圓環(huán)病毒型　切入點：重組桿狀病毒　出處：《中國獸醫(yī)學(xué)報》2017年02期

【摘要】：采用融合PCR方法將豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)Cap基因和人單純皰疹病毒Ⅰ型病毒(HSV-1)VP22蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)域串聯(lián)得到Cap-VP22基因,將其插入到桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pFastBac Dual構(gòu)建pFast-Cap-VP22重組轉(zhuǎn)移載體,通過轉(zhuǎn)化含有Bacmid的DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)3種抗性和藍(lán)白斑篩選,獲得含Cap-VP22基因的重組穿梭質(zhì)粒rBac-2Cap-VP22。重組穿梭質(zhì)粒轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞(Sf9),獲得重組桿狀病毒。重組桿狀病毒感染Sf9細(xì)胞,通過PCR、間接免疫熒光(IFA)、電鏡觀察對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行檢測。結(jié)果表明,成功構(gòu)建含雙拷貝Cap-VP22基因的桿狀病毒載體,IFA證實重組蛋白在Sf9細(xì)胞中獲得正確表達(dá),與PCV2陽性血清具有良好的反應(yīng)原性;電鏡觀察結(jié)果顯示細(xì)胞上清中的目的蛋白可裝配形成直徑約17nm的病毒樣顆粒(VLPs);表明C端融合VP22蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)域序列并不影響Cap蛋白的組裝。本研究為進(jìn)一步研制安全、高效的PCV2疫苗奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Cap-VP22 gene was constructed by inserting porcine circovirus type 2 PCV2Cap gene and human herpes simplex virus type I virus (HSV-1) VP22 protein transduction domain into the baculovirus transfer vector pFastBac Dual.The recombinant shuttle plasmid rBac-2 Cap-VP22 containing Cap-VP22 gene was obtained by transformation of DH10Bac competent cells containing Bacmid.The recombinant shuttle plasmid was transfected into insect cell line Sf9 and the recombinant baculovirus was obtained.Sf9 cells were infected with recombinant baculovirus. The expression products were detected by indirect immunofluorescence and electron microscopy.The results showed that the recombinant protein was correctly expressed in Sf9 cells and had good reactivity with PCV2 positive serum.The results of electron microscopy showed that the target protein in the supernatant could assemble the virus like particles about 17nm in diameter, indicating that the C-terminal fusion VP22 protein transduction domain did not affect the assembly of Cap protein.This study lays a foundation for the further development of a safe and efficient PCV2 vaccine.
【作者單位】： 廣西獸醫(yī)研究所廣西畜禽疫苗新技術(shù)重點實驗室;
【基金】：廣西自然科學(xué)基金資助項目(2014GXNSFAA118120) 廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)資助項目(桂科合14125008-2-6) 廣西重點實驗室建設(shè)資助項目(14-045-31-A-5)
【分類號】：S852.651

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本文編號：1728891