發(fā)布時(shí)間：2018-04-09 03:27

  本文選題：新型鴨細(xì)小病毒　切入點(diǎn)：克隆　出處：《中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)》2017年02期

【摘要】：為研究新型鴨細(xì)小病毒(Novel duck parvovirus,NDPV)NS1蛋白的生物學(xué)功能,根據(jù)NDPV DS15株NS1基因(Gen Bank登錄號(hào):KU947420)設(shè)計(jì)1對(duì)特異性引物,對(duì)NS1全基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增,將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物克隆入pGEX-4T-1載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEX-4T-NS1,并進(jìn)行測(cè)序鑒定。經(jīng)鑒定正確后重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到BL21感受態(tài)細(xì)胞,SDS-PAGE和Western blot進(jìn)行表達(dá)鑒定。將測(cè)序獲得NS1基因編碼蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果顯示,本研究構(gòu)建的重組質(zhì)�？稍谠思�(xì)胞中成功表達(dá)97kDa的NS1融合蛋白。進(jìn)一步生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示,NS1蛋白為酸性、可溶性蛋白,由627個(gè)氨基酸組成,分子質(zhì)量約為72kDa。該蛋白主要位于胞漿,不含信號(hào)肽序列,無(wú)跨膜區(qū),含有絲/蘇氨酸激酶底物模序和1個(gè)潛在磷酸化位點(diǎn)(s546),抗原表位主要集中在多肽的C端。NS1基因的同源性及系統(tǒng)發(fā)生樹分析表明,NDPV與鵝細(xì)小病毒(Goose parvovirus,GPV)處于同一進(jìn)化分支,遺傳進(jìn)化關(guān)系最近。本研究結(jié)果為揭示NDPV NS1在病毒的復(fù)制、增殖以及致病機(jī)制中的作用奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to study the biological function of novel duck parvovirusNDPV-NS1 protein of duck parvovirus, a pair of specific primers were designed according to the accession number of NS1 gene Genin Bank of NDPV DS15 strain: KU947420). The whole NS1 gene was amplified by PCR, and the PCR amplification product was cloned into pGEX-4T-1 vector.The recombinant plasmid pGEX-4 T-NS1 was constructed and sequenced.After identification, the recombinant plasmid was transformed into BL21 competent cells and expressed by SDS-PAGE and Western blot.The NS1 gene encoding protein was sequenced for bioinformatics analysis.The results showed that the recombinant plasmid could successfully express the NS1 fusion protein of 97kDa in prokaryotic cells.Further bioinformatics analysis showed that the NS1 protein was acidic and soluble, consisting of 627 amino acids with a molecular weight of about 72 kDa.The protein is mainly located in the cytoplasm, does not contain signal peptide sequence, and has no transmembrane region.The sequence of silk / threonine kinase substrates and a potential phosphorylation site (S546) were found. The homology of NS1 gene and phylogenetic tree analysis showed that NDPV and Goose parvovirusGPVs were in the same evolutionary branch as goose parvovirus (Goose parvovirus).Genetic and evolutionary relationships are recent.The results laid a foundation for revealing the role of NDPV NS1 in the replication, proliferation and pathogenesis of the virus.
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所;青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)青年基金(31502068) 上海市科委科技創(chuàng)新醫(yī)藥與農(nóng)業(yè)領(lǐng)域項(xiàng)目(13391901602)
【分類號(hào)】：S852.65

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 Anderson L;趙洪禮;;人類細(xì)小病毒[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊(cè));1991年04期

2 劉明慧;石踐;單振振;袁寶;任文陟;;貓細(xì)小病毒的分離與鑒定[J];吉林畜牧獸醫(yī);2008年10期

3 汪曉鄆;時(shí)坤;刁燕;尹茉莉;馮海峰;杜銳;;鹿源細(xì)小病毒的分離與鑒定[J];經(jīng)濟(jì)動(dòng)物學(xué)報(bào);2009年01期

4 劉碧濤;任常寶;張曉戰(zhàn);許冬蕾;鄭良焰;唐兆新;;貓細(xì)小病毒的分離與鑒定[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年09期

5 蘇兆眾;羅祖玉;;哺乳動(dòng)物及人自主性細(xì)小病毒研究概況[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊(cè));1987年03期

6 羅祖玉,王順德,王健,劉為平;細(xì)小病毒核苷酸序列同源性的比較——對(duì)抗癌作用的一點(diǎn)啟示[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1990年04期

7 張英;細(xì)小病毒的分子生物學(xué)[J];中國(guó)病毒學(xué);1996年03期

8 賀亦龍;邵周伍林;白小飛;趙健;侯振中;張?jiān)?;水禽細(xì)小病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因的克隆與分析[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2014年11期

9 郎海波;布麥利亞木姑麗·阿不都克日木;李上標(biāo);許朋;傅思武;;國(guó)內(nèi)細(xì)小病毒研究進(jìn)展[J];中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志;2014年08期

10 夏咸柱,韓慧民,李剛,朱明琛,李玉文,鄒全明,殷震;犬、貓、貂細(xì)小病毒通用快速診斷盒的研制[J];病毒學(xué)報(bào);1987年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前6條

1 楊松濤;王淑君;馮浩;張仁舟;曾林;夏志平;鄒嘯環(huán);王承宇;連海;孫兆增;孟軻音;王澤;夏咸柱;;猴源細(xì)小病毒的分離鑒定[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)小動(dòng)物醫(yī)學(xué)分會(huì)第四次學(xué)術(shù)研討會(huì)、中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)外科學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（1）[C];2009年

2 楊松濤;王淑君;馮浩;張仁舟;曾林;夏志平;鄒嘯環(huán);王承宇;連海;孫兆增;孟軻音;王澤;夏咸柱;;猴源細(xì)小病毒的分離鑒定[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2009年

3 張?jiān)?胡奇林;童光志;相文華;;鵝和番鴨細(xì)小病毒全基因克隆與序列分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)成立大會(huì)暨第一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

4 柴秀麗;陳濤;閆喜軍;張海玲;趙建軍;羅國(guó)良;;北極狐細(xì)小病毒分離及VP2基因的進(jìn)化分析[A];首屆中國(guó)獸藥大會(huì)——獸醫(yī)生物制品學(xué)、獸醫(yī)微生物學(xué)學(xué)術(shù)論壇論文集（2008）[C];2008年

5 左靜;馬麗敏;雷連成;;水貂腸炎細(xì)小病毒PLD株的分離鑒定[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)生物制品學(xué)分會(huì)中國(guó)微生物學(xué)會(huì)獸醫(yī)微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)（第三屆中國(guó)獸藥大會(huì)學(xué)術(shù)論壇）論文集[C];2010年

6 柴秀麗;陳濤;張海玲;閆喜軍;趙建軍;羅國(guó)良;王鳳雪;邵西群;;果子貍細(xì)小病毒分離及VP2基因的進(jìn)化分析[A];科技創(chuàng)新與節(jié)能減排——吉林省第五屆科學(xué)技術(shù)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 毛亞萍;水貂腸炎細(xì)小病毒致病株的分離及VP2蛋白部分關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)的功能研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

2 李雪梅;鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒部分基因組克隆、序列分析及VP2-VP3基因的表達(dá)[D];中國(guó)人民解放軍軍需大學(xué);2001年

3 布日額;GPV VP及NS基因克隆及其原核表達(dá)產(chǎn)物的研究和應(yīng)用[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 程楠;貓泛白細(xì)胞減少癥病毒反向遺傳學(xué)操作系統(tǒng)的建立[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

2 趙虹;番鴨細(xì)小病毒和鴨甲肝病毒3型廣西株全基因序列分析及其分子生物學(xué)診斷方法的建立[D];廣西大學(xué);2015年

3 賀亦龍;5株水禽細(xì)小病毒基因組的克隆與遺傳進(jìn)化分析[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 左靜;水貂腸炎細(xì)小病毒抗原性分析及其特異性馬源抗體的制備[D];吉林大學(xué);2011年

5 李曉剛;家蠶對(duì)細(xì)小病毒樣病毒（中國(guó)株）非敏感性因子的初步研究[D];江蘇大學(xué);2010年

6 楊莘;水貂腸炎細(xì)小病毒NS1基因的真核表達(dá)與生物學(xué)特性分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

7 康洪濤;貉細(xì)小病毒分離鑒定及免疫原性研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

8 王欣;番鴨細(xì)小病毒的分離鑒定、VP基因的克隆及其原核表達(dá)[D];西南大學(xué);2008年

9 張彥鵬;鴨細(xì)小病毒04-Nb株分離鑒定、基因組測(cè)序及VP2蛋白的表達(dá)[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（武漢病毒研究所）;2006年

10 鄧雪鋒;細(xì)小病毒B19獨(dú)特區(qū)磷脂酶A2功能初步研究[D];華中師范大學(xué);2009年

，

本文編號(hào)：1724654