本文選題：口蹄疫O型病毒　切入點：二溫式RT-PCR　出處：《中國畜牧獸醫(yī)》2017年02期

【摘要】：試驗通過對口蹄疫病毒核苷酸序列的比對分析,在O型口蹄疫病毒的P1基因保守區(qū),設(shè)計1對特異性引物,應(yīng)用均勻設(shè)計法優(yōu)化反應(yīng)參數(shù),建立口蹄疫O型病毒二溫式RT-PCR檢測方法。對該法進行特異性試驗、敏感性試驗檢測。結(jié)果表明,該二溫式RT-PCR方法只對口蹄疫O型病毒敏感,對其他血清型的口蹄疫病毒及常見的豬病病毒均不敏感;擴增條帶與預(yù)期目的片段大小相符,擴增片段經(jīng)克隆、測序發(fā)現(xiàn)與引物所在基因序列的同源性為100%;檢測病毒RNA的敏感性為1.665pg/μL,其敏感性與三步法PCR敏感性檢測結(jié)果沒有差異。運用該法對54頭攻毒試驗的動物進行檢測,陽性鑒定結(jié)果與三步法PCR鑒定結(jié)果一致,與三步法PCR相比該法節(jié)省了20min,表明所建立的口蹄疫O型病毒二溫式RT-PCR方法是一種準確、快速、特異、敏感的檢測方法。
[Abstract]:By comparing the nucleotide sequences of foot-and-mouth disease virus (FMDV), a pair of specific primers were designed in the P1 region of foot-and-mouth disease virus type O (FMDV), and the reaction parameters were optimized by uniform design method.A two-temperature RT-PCR method for the detection of foot-and-mouth disease virus type O (FMDV) was established.The specificity test and sensitivity test were carried out.The results showed that the two-temperature RT-PCR method was only sensitive to foot-and-mouth disease type O virus, but not to other serotypes of foot-and-mouth disease virus and common swine disease virus, and the amplified band was consistent with the expected target fragment size, and the amplified fragment was cloned.The result of sequencing showed that the homology of the gene sequence with the primer was 100, and the sensitivity of detecting virus RNA was 1.665pg/ 渭 L, which had no difference from that of three-step PCR sensitivity detection.The method was used to detect 54 head attack virus test animals. The result of positive identification was consistent with that of three-step PCR method. Compared with three-step PCR method, the method saved 20 minutes, which indicated that the two-temperature RT-PCR method of foot-and-mouth disease virus type O was accurate.Rapid, specific and sensitive detection method.
【作者單位】： 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院;新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所;天康生物股份有限公司;
【基金】：自治區(qū)科研機構(gòu)創(chuàng)新發(fā)展專項資金(2016D04008) 自治區(qū)產(chǎn)學(xué)研聯(lián)合培養(yǎng)研究生示范基地項目(xjaucxy-yjs-20152008)
【分類號】：S855.3

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：1724581