本文選題：當(dāng)歸揮發(fā)油　切入點(diǎn)：不同炮制品　出處：《甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：以LC-Q/TOF-MS為分析平臺(tái),通過(guò)建立角叉菜膠致大鼠足腫脹急性炎癥模型,分別用當(dāng)歸炭揮發(fā)油(C-VOAS)、酒當(dāng)歸揮發(fā)油(J-VOAS)、土當(dāng)歸揮發(fā)油(T-VOAS)和油當(dāng)歸揮發(fā)油(Y-VOAS)進(jìn)行干預(yù),對(duì)當(dāng)歸揮發(fā)油抗炎作用進(jìn)行評(píng)價(jià)。研究以大鼠的血漿和炎性浸出液為生物樣本,就生物樣本的預(yù)處理方法和色譜分離條件進(jìn)行探討,并用質(zhì)量控制(Quality control,QC)樣本對(duì)樣品的分析方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。然后采用代謝組學(xué)研究策略,探討當(dāng)歸揮發(fā)油的抗炎機(jī)制,采用SIMCA-P 13.0分析軟件,篩選差異代謝物,并構(gòu)建差異性代謝物的代謝途徑,研究當(dāng)歸不同炮制品揮發(fā)油對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹炎癥的抗炎作用,從整體代謝水平上,考察當(dāng)歸不同炮制品揮發(fā)油對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹炎癥的抗炎作用機(jī)理,為解決中藥的整體效應(yīng)和物質(zhì)基礎(chǔ)提供新思路和新方法。主要研究結(jié)論如下:1采用LC-Q/TOF-MS分析平臺(tái),對(duì)血漿和炎性浸出液等樣品預(yù)處理方法進(jìn)行選擇,并對(duì)色譜分離條件進(jìn)行優(yōu)化,結(jié)果表明,采用甲醇進(jìn)行脫蛋白處理,更適合樣本的LC-Q/TOF-MS測(cè)定,色譜分離條件為:流速為0.4 mL/min;柱溫為35°C;流動(dòng)相組成A:超純水(含0.1%甲酸),B:乙腈(含0.1%甲酸);梯度洗脫程為:0-1min為5%B,1-6min由5%B線性變化到20%B,6-9min由20%B線性變化到50%B,9-13min由50%B線性變化到95%B,13-15min保持為95%B。進(jìn)樣量為4μL,自動(dòng)進(jìn)樣器溫度為4℃。利用QC樣本,對(duì)已經(jīng)確定的樣品預(yù)處理方法和色譜分離條件進(jìn)行評(píng)價(jià),結(jié)果表明,血漿和炎性浸出液的QC樣本組分均得到了良好的分離,峰形對(duì)稱,基線穩(wěn)定;在正離子檢測(cè)模式下,血漿和炎性浸出液樣品組分平均檢出率經(jīng)計(jì)算為93.628%和90.1535%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為5.784%和2.197%;在負(fù)離子檢測(cè)模式下,血漿和炎性浸出液樣品組分平均檢出率經(jīng)計(jì)算為95.628%和90.2981%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為4.162%和6.4708%。這表明所選擇的色譜分離條件可以有效地使血漿和炎性浸出液等目標(biāo)樣品的組分得到分離,分析平臺(tái)重復(fù)性良好,可以用于對(duì)實(shí)驗(yàn)中所有樣品的分析,所得數(shù)據(jù)也可以用于代謝組學(xué)的進(jìn)一步多維統(tǒng)計(jì)分析。2采用LC-Q/TOF-MS測(cè)定空白對(duì)照組(Control)、炎癥模型組(Model)、當(dāng)歸炭揮發(fā)油組(C-VOAS)、酒當(dāng)歸揮發(fā)油組(J-VOAS)、土當(dāng)歸揮發(fā)油組(T-VOAS)和油當(dāng)歸揮發(fā)油組(Y-VOAS)的血漿和炎性浸出液中代謝物,分別從血漿和炎性浸出液鑒定和推測(cè)出34、34種代謝物。采用主成分分析法和正交偏最小二乘法判別分析法對(duì)血漿和炎性浸出液進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)Control、Model完全分離,C-VOAS、J-VOAS、T-VOAS和Y-VOAS靠近對(duì)照組,表明急性炎癥模型復(fù)制成功,且C-VOAS、J-VOAS、T-VOAS和Y-VOAS對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹急性炎癥模型的炎癥反應(yīng)具有一定的作用,呈現(xiàn)恢復(fù)到正常狀態(tài)的趨勢(shì)。根據(jù)變量重要性投影(variable importance for theprojection)、結(jié)合T-test結(jié)果篩選差異代謝物,發(fā)現(xiàn)C-VOAS潛在的藥理效應(yīng)比較明顯,可以使多個(gè)差異代謝物回調(diào)到正常狀態(tài)。利用代謝組學(xué)途徑分析(Metabolomics Pathway Analysis,MetPA)數(shù)據(jù)庫(kù),對(duì)差異代謝物的代謝途徑進(jìn)行分析。3通過(guò)整合的研究的思路,將血漿和炎性浸出液中分析得到的差異性代謝物進(jìn)行整合,總共得到42種差異性代謝物,并將差異性代謝物輸入MetPA數(shù)據(jù)庫(kù),構(gòu)建相應(yīng)的代謝通路,進(jìn)一步就當(dāng)歸揮發(fā)油干預(yù)大鼠角叉菜膠急性炎癥模型的機(jī)制進(jìn)行分析研究,從而為此類研究提供更完整、更系統(tǒng)的理論依據(jù)。分析結(jié)果表明,當(dāng)歸揮發(fā)油可以通過(guò)調(diào)節(jié)三羧酸循環(huán)、提高葡萄糖含量、使脂肪酸代謝紊亂恢復(fù)而達(dá)到抗炎作用,當(dāng)歸揮發(fā)油能回調(diào)變化的代謝物,結(jié)合對(duì)角叉菜膠所致炎癥的發(fā)生機(jī)制的推測(cè),認(rèn)為篩選的差異性代謝物中花生四烯酸、琥珀酸、丙酮酸、葡萄糖、硬脂酸、蘋(píng)果酸具有生物學(xué)意義,可以作為角叉菜膠致炎及當(dāng)歸揮發(fā)油抗炎的生物標(biāo)志物,并且當(dāng)歸炭揮發(fā)油對(duì)大鼠角叉菜膠急性炎癥模型的干預(yù)效果最佳。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S853.7

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1711402