本文選題：豬　切入點(diǎn)：ISG基因　出處：《中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)》2017年03期

【摘要】：本研究從家豬外周血淋巴細(xì)胞中提取總RNA,通過(guò)RT-PCR克隆出家豬ISG 15基因,經(jīng)測(cè)序和序列分析,將ISG 15片段與p ET28a質(zhì)粒連接,構(gòu)建重組原核表達(dá)載體p ET28a-ISG15;經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后,通過(guò)Ni柱純化,以獲得ISG15蛋白。用純化的ISG15蛋白免疫家兔,制備多克隆抗體。結(jié)果顯示,家豬ISG 15基因CD S區(qū)長(zhǎng)504 bp,編碼167個(gè)氨基酸,包括兩個(gè)泛素樣結(jié)構(gòu)域(N端第3~75位和C端第81~156位氨基酸肽段)及C末端保守序列為L(zhǎng)RLRGG;W estern-blot分析表明重組ISG15蛋白的免疫原性良好;經(jīng)ELISA測(cè)定血清中抗體的效價(jià)為1∶102 400。上述研究結(jié)果為進(jìn)一步揭示家豬ISG15蛋白的功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In this study, total RNAs were extracted from peripheral blood lymphocytes of domestic pigs. ISG 15 gene of domestic pigs was cloned by RT-PCR. After sequencing and sequence analysis, the recombinant prokaryotic expression vector pET28a-ISG15 was constructed by ligating the ISG 15 fragment with p ET28a plasmid, which was induced by IPTG.ISG15 protein was purified by Ni column.Rabbits were immunized with purified ISG15 protein to prepare polyclonal antibodies.The results showed that the length of CD S region of ISG 15 gene in domestic pigs was 504 BP, encoding 167 amino acids.The amino acid peptide of the N-terminal of two Ubiquiquiform domains, the N-terminal of Ubiquiquitin, and the amino acid peptide at the C-terminal of 81n, 156) and the conserved sequence of the C-terminal were LRLRGGGG W estern-blot analysis showed that the immunogenicity of the recombinant ISG15 protein was good, and the titer of antibody in serum determined by ELISA was 1102: 400.The results laid a foundation for further revealing the function of ISG15 protein in domestic pigs.
【作者單位】： 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院;
【基金】：河南省高�？萍紕�(chuàng)新人才支持計(jì)劃項(xiàng)目(14HASTIT022) 國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31272567) 河南省高校科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)支持計(jì)劃資助項(xiàng)目(14IRTSTHN015)
【分類號(hào)】：S828

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本文編號(hào)：1705777