本文選題：豬　切入點：ISG基因　出處：《中國獸醫(yī)科學》2017年03期

【摘要】：本研究從家豬外周血淋巴細胞中提取總RNA,通過RT-PCR克隆出家豬ISG 15基因,經(jīng)測序和序列分析,將ISG 15片段與p ET28a質(zhì)粒連接,構建重組原核表達載體p ET28a-ISG15;經(jīng)IPTG誘導表達后,通過Ni柱純化,以獲得ISG15蛋白。用純化的ISG15蛋白免疫家兔,制備多克隆抗體。結果顯示,家豬ISG 15基因CD S區(qū)長504 bp,編碼167個氨基酸,包括兩個泛素樣結構域(N端第3~75位和C端第81~156位氨基酸肽段)及C末端保守序列為LRLRGG;W estern-blot分析表明重組ISG15蛋白的免疫原性良好;經(jīng)ELISA測定血清中抗體的效價為1∶102 400。上述研究結果為進一步揭示家豬ISG15蛋白的功能奠定了基礎。
[Abstract]:In this study, total RNAs were extracted from peripheral blood lymphocytes of domestic pigs. ISG 15 gene of domestic pigs was cloned by RT-PCR. After sequencing and sequence analysis, the recombinant prokaryotic expression vector pET28a-ISG15 was constructed by ligating the ISG 15 fragment with p ET28a plasmid, which was induced by IPTG.ISG15 protein was purified by Ni column.Rabbits were immunized with purified ISG15 protein to prepare polyclonal antibodies.The results showed that the length of CD S region of ISG 15 gene in domestic pigs was 504 BP, encoding 167 amino acids.The amino acid peptide of the N-terminal of two Ubiquiquiform domains, the N-terminal of Ubiquiquitin, and the amino acid peptide at the C-terminal of 81n, 156) and the conserved sequence of the C-terminal were LRLRGGGG W estern-blot analysis showed that the immunogenicity of the recombinant ISG15 protein was good, and the titer of antibody in serum determined by ELISA was 1102: 400.The results laid a foundation for further revealing the function of ISG15 protein in domestic pigs.
【作者單位】： 河南農(nóng)業(yè)大學牧醫(yī)工程學院;
【基金】：河南省高�？萍紕�(chuàng)新人才支持計劃項目(14HASTIT022) 國家自然科學基金資助項目(31272567) 河南省高�？萍紕�(chuàng)新團隊支持計劃資助項目(14IRTSTHN015)
【分類號】：S828

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本文編號：1705777