發(fā)布時(shí)間：2018-04-02 14:34

  本文選題：旋毛蟲　切入點(diǎn)：微衛(wèi)星標(biāo)記　出處：《吉林大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：旋毛蟲病是由旋毛蟲引起的一種嚴(yán)重的人獸共患病。目前國際公認(rèn)的旋毛線蟲屬分為9個(gè)種及3個(gè)未命名的基因型,他們分別是T.spiralis,T1;T.nativa,T2;T.britovi,T3;T.pseudospiralis,T4;T.murrelli,T5;T6;T.nelsoni,T7;T8;T9;T.papuae,T10;T.zimbabwensis,T11;T.patagoniensis,T12。旋毛蟲宿主分布范圍廣泛,可感染人及百余種哺乳動(dòng)物、爬行動(dòng)物和鳥類,呈全球性分布。人類主要是通過生食或半生食感染旋毛蟲肌幼蟲的豬肉而引發(fā)感染。旋毛蟲感染在中國每年造成約18億人民幣的經(jīng)濟(jì)損失,而美國及歐盟更是每年高達(dá)10億美元和5.7億美元。同時(shí),該病的人畜共患性也給疫區(qū)人民的身體健康帶來嚴(yán)重危害。準(zhǔn)確鑒別旋毛蟲種類,不僅是研究旋毛蟲的基礎(chǔ)及前提,也對防治旋毛蟲病具有重要意義。長期以來,旋毛蟲蟲種是依據(jù)成蟲的形態(tài)、流行病學(xué)特點(diǎn)等進(jìn)行分類鑒定。然而,不同旋毛蟲種間個(gè)體差異并不明顯,傳統(tǒng)的分類方法的局限性越來越突出,迫切需要研發(fā)新的分類方法。分子生物學(xué)的發(fā)展、測序技術(shù)的進(jìn)步等給旋毛蟲分類技術(shù)帶來了新思路,近年來科學(xué)家們不斷嘗試從分子水平探討旋毛蟲的遺傳關(guān)系分析及分類鑒定方法。SSR是眾多分類鑒定方法中頗具優(yōu)點(diǎn)的一種。這主要是因?yàn)镾SR本身具有分布廣泛、多態(tài)性高、種類多、孟德爾共顯性遺傳等優(yōu)點(diǎn)。SSR標(biāo)記法十分適合用于寄生蟲分類鑒定方法的研究。本研究根據(jù)Genebank上已公布的旋毛蟲T1全基因組序列,利用程序MISA對基因組中的SSR進(jìn)行查找,之后利用primer3-1.1.4-WINXP程序?qū)SR引物進(jìn)行設(shè)計(jì)并送公司合成了50對引物。利用3%瓊脂糖電泳技術(shù)分離SSR-PCR產(chǎn)物,初篩選出能夠用于區(qū)分旋毛蟲遺傳差異較大的四個(gè)蟲種(T.spiralis(T1),T.native(T2),T.britovi(T3),T.pseudospiralis(T4))的10對引物,這10對引物兼具擴(kuò)增條帶清晰、多態(tài)性高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。進(jìn)而優(yōu)化了每對引物的退化溫度、SSR-PCR反應(yīng)體系及程序,最終確定的SSR-PCR反應(yīng)體系為:20μL反應(yīng)體系中Ex-Taq酶0.5 U,上下游引物的終濃度各為0.1 pmol/μL,DNA模板終濃度為7.5 ng/μL;確定的SSR-PCR反應(yīng)程序?yàn)?98℃預(yù)變性5 min;98℃10 s,56℃(或54℃或58℃,不同引物退火溫度不同)30 s,72℃30 s,35個(gè)循環(huán);72℃延伸7 min。之后,使用8%聚丙烯酰胺變性PAGE電泳技術(shù)分離SSR-PCR產(chǎn)物,最終篩選出了可用于12個(gè)旋毛蟲蟲種及基因型鑒定的兩對SSR核心引物(8號(hào)、10號(hào)引物),每對核心引物都能夠完全區(qū)分12個(gè)旋毛蟲蟲種及基因型。為了進(jìn)一步驗(yàn)證本研究建立的旋毛蟲蟲種分類鑒定的SSR-PCR技術(shù)體系,分別使用本實(shí)驗(yàn)建立的SSR-PCR法(利用篩選到的10號(hào)引物)和多重PCR法同時(shí)對豬和犬體內(nèi)分離的未知旋毛蟲蟲種進(jìn)行蟲種鑒定,兩種方法鑒定的結(jié)果一致。實(shí)踐證明本研究建立的用于旋毛蟲蟲種分類鑒定的SSR-PCR技術(shù)體系方法可行、結(jié)果可靠。本文建立了適用于旋毛蟲蟲種分類鑒定的SSR-PCR技術(shù)體系,實(shí)現(xiàn)了利用SSR標(biāo)記技術(shù)通過單對引物對旋毛蟲的12個(gè)蟲種及基因型進(jìn)行分類鑒定,為旋毛蟲病的病原學(xué)、流行病學(xué)的研究以及旋毛蟲病的防治等方面奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.7

【參考文獻(xiàn)】

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1 李斌,夏慶友,魯成,周澤揚(yáng);蜜蜂EST中的微衛(wèi)星分析(英文)[J];遺傳學(xué)報(bào);2004年10期

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本文編號(hào)：1700847