本文選題：多殺性巴氏桿菌　切入點：OmpH　出處：《青海大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：多殺性巴氏桿菌(Pasteurella multocida,Pm)是青藏高原牦牛出血性敗血癥的病原菌,但目前對Pm的毒力因子及致病機制并不清楚。H蛋白(OmpH)對Pm的致病力和侵襲力起到關(guān)鍵性的作用,也是Pm最重要的外膜蛋白之一。本研究前期克隆并表達(dá)了牦牛P0910株的OmpH,研究發(fā)現(xiàn)重組OmpH是一種重要的免疫保護性蛋白,可對小鼠產(chǎn)生90%的保護力,而Pm OmpH對細(xì)胞的粘附、入侵及對宿主的致病過程則有待進(jìn)一步的研究,鑒此,本研究通過對Pm親本株P(guān)0910的血清抵抗性、抗吞噬作用以及對牦牛支氣管黏膜上皮細(xì)胞的黏附能力等生物學(xué)特性進(jìn)行研究,為闡釋多殺性巴氏桿菌OmpH介導(dǎo)牦牛出血性敗血癥的致病作用機制及制備ompH基因缺失疫苗奠定重要的理論基礎(chǔ)。本實驗研究了P0910親本株在抵抗牦牛血清中補體的殺菌作用。結(jié)果表明用新鮮牦牛血清與滅活牦牛血清處理P0910株,不同稀釋度細(xì)菌的存活率存在著差異,但隨著菌液濃度的降低,新鮮牦牛血清的殺菌作用強于滅活牦牛血清,推測細(xì)菌抵抗血清中補體的作用可能是Pm的一種致病機制。本實驗利用小鼠腹腔巨噬細(xì)胞研究了P0910親本株的抗吞噬作用。分別用抗OmpH抗血清和正常血清處理P0910株,測定小鼠腹腔巨噬細(xì)胞對細(xì)菌的吞噬能力。結(jié)果表明:小鼠腹腔巨噬細(xì)胞對用抗OmpH抗血清處理的P0910株的吞噬能力強于用正常血清處理后的細(xì)菌(P0.05(P=0.0178),說明抗OmpH抗血清可促進(jìn)巨噬細(xì)胞對P0910株的吞噬能力,表明OmpH具有抗吞噬作用。本實驗采用支氣管結(jié)扎灌注酶冷消化法和支氣管組織貼壁法培養(yǎng)牦牛支氣管黏膜上皮細(xì)胞,結(jié)果兩種方法都獲得了牦牛支氣管黏膜上皮細(xì)胞,細(xì)胞活性好,純度高;但支氣管結(jié)扎灌注酶冷消化法能顯著提高細(xì)胞的活力和數(shù)量,便于操作,可作為牦牛支氣管黏膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)的首選方法。在此基礎(chǔ)上建立牦牛支氣管黏膜上皮細(xì)胞黏附模型,研究P0910株對細(xì)胞的黏附能力。以對數(shù)生長期不同含菌量的菌液侵染牦牛支氣管黏膜上皮細(xì)胞和牦牛成纖維細(xì)胞,結(jié)果表明,P0910均可黏附在牦牛支氣管黏膜上皮細(xì)胞和牦牛成纖維細(xì)胞,當(dāng)含菌量為1.0×10~7CFU/mL且侵染4h后,黏附能力最強且P0910株對牦牛支氣管黏膜上皮細(xì)胞的黏附能力遠(yuǎn)強于牦牛成纖維細(xì)胞。鑒此,本研究通過對牦牛多殺性巴氏桿菌P0910親本株的生物學(xué)特性進(jìn)行研究,為下一步進(jìn)行P0910ompH基因缺失株及互補株的生物學(xué)功能研究提供了研究方法,進(jìn)而為PmOmpH介導(dǎo)牦牛出血性敗血癥的致病作用研究奠定了理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:In this study , we studied the anti - phagocytosis of P0910 strain by using anti - OmpH antiserum and normal serum . The results showed that the anti - OmpH antiserum could enhance the phagocytosis of P910 strain . The results showed that the anti - OmpH antiserum could enhance the phagocytic ability of P910 strain .

【學(xué)位授予單位】：青海大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S858.23

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本文編號：1697855