發(fā)布時間：2018-03-31 11:53

  本文選題：馬駑巴貝斯蟲　切入點：二溫式PCR　出處：《新疆農業(yè)大學》2015年碩士論文

【摘要】：馬駑巴貝斯蟲病病原為駑巴貝斯蟲,該病是一種經由媒介蜱蟲傳播的嚴重影響馬屬動物健康的血液原蟲病,被世界衛(wèi)生組織(OIE)列為法定報告檢疫疫病,在我國該病被列為二類動物疫病。該病呈全球性發(fā)生,患馬呈現發(fā)熱、貧血、黃疸、血紅蛋白尿,急性病例死亡,亞急性、慢性病例終身成為帶蟲宿主,造成本土馬與引進馬互相感染、反復發(fā)病,給馬養(yǎng)殖業(yè)造成重大損失。目前尚無該病的有效治療藥物及疫苗,故研發(fā)新型檢測技術是有效的防控途徑,可及時檢測、監(jiān)控和綜合防治,有利于馬產業(yè)的健康發(fā)展。(Ⅰ)根據GenBank中的駑巴貝斯蟲(Babesia caballi)Bc48基因序列設計了一對特異性引物,建立檢測駑巴貝斯蟲的二溫式PCR方法。該方法能夠特異地擴增155 bp的片段,與雙芽巴貝斯蟲、環(huán)形泰勒蟲、馬泰勒蟲、瑟氏泰勒蟲均無交叉反應,能檢測到的最低DNA拷貝數為5.17×102 copies/μL。應用所建立的方法檢測了采集于和靜縣焉耆馬匹樣品(N=82),結果顯示,馬駑巴貝斯蟲感染率69.51%(57/82),與血液涂片檢查結果37.8%(31/82)相比,其檢出率更高。該二溫式PCR檢測方法具有較高的特異性和敏感性,可用于馬駑巴貝斯蟲的早期診斷。(Ⅱ)根據Bc48保守部分基因序列設計合成特異性引物和MGB熒光探針,建立了駑巴貝斯蟲病的MGB FQ-PCR檢測方法。對所建立的FQ-PCR檢測方法進行特異性、靈敏性和重復性試驗,并分別用FQ-PCR檢測方法和普通PCR方法對臨床樣品進行檢測對比。結果顯示,該方法靈敏度高,最小檢出量為5.17×101copies/μL的標準質粒,比常規(guī)PCR靈敏100倍;建立的FQ-PCR檢測方法標準曲線的循環(huán)閾值與模板濃度具有良好的線性關系,相關系數為0.9996,重復性好,組內與組間重復性試驗的變異系數分別為0.7%和0.42%,均小于1%;該方法能特異性檢測駑巴貝斯蟲,而對馬泰勒蟲、雙芽巴貝斯蟲、環(huán)形泰勒蟲、瑟氏泰勒蟲等病原檢測結果均為陰性。用建立的MGB-FQ PCR和常規(guī)PCR分別對90份臨床樣品進行檢測,MGB-FQ PCR和常規(guī)PCR檢出率分別為53%和30%。本次建立的駑巴貝斯蟲病MGB-FQ PCR檢測方法特異性強、靈敏度高、重復性好,可用于馬駑巴貝斯蟲病臨床樣品診斷、流行病學調查,將為蜱傳馬梨形蟲病的檢測提供新的方法。
[Abstract]:The pathogen of cabal Babes's disease is Babes caballi, a blood protozoan disease that is transmitted by ticks and seriously affects the health of equine animals. It is listed as a reported quarantine epidemic by the World Health Organization (WHO). The disease is classified as a second class animal disease in China. The disease occurs globally, with horses presenting with fever, anemia, jaundice, hemoglobinuria, acute death, subacute, chronic cases and life-long host of the parasite. As a result of mutual infection between local and imported horses, recurrent diseases have caused great losses to the horse breeding industry. At present, there are no effective drugs and vaccines for the treatment of the disease. Therefore, the development of new detection techniques is an effective way to prevent and control the disease and can be detected in a timely manner. Monitoring and integrated control are beneficial to the healthy development of horse industry. (I) A pair of specific primers were designed according to the caballi)Bc48 gene sequence of Babes caballi in GenBank. A two-temperature PCR method was established for the detection of Babes caballi. The method was able to amplify a 155bp fragment with no cross reaction with the double bud Babes worm, ringworm Taylor worm, Maltaire worm and Taylor serpentine. The lowest copy number of DNA detected was 5.17 脳 10 ~ 2 copies/ 渭 L. the results showed that the infection rate of Babes caballi was 69.511and 57 / 82, compared with the results of blood smear 37.8 / 82). This two-temperature PCR detection method has high specificity and sensitivity, and can be used in the early diagnosis of Babes caballi. (II) according to the conserved gene sequence of Bc48, specific primers and MGB fluorescent probes were designed and synthesized. A MGB FQ-PCR method was established for the detection of Babes caballi disease. The specificity, sensitivity and reproducibility of the established FQ-PCR detection method were tested, and the clinical samples were detected and compared by FQ-PCR detection method and common PCR method. The sensitivity of the method is high, the minimum detection amount is 5.17 脳 101copies/ 渭 L, and the sensitivity is 100 times higher than that of conventional PCR. The standard curve of FQ-PCR has a good linear relationship with the concentration of template, the correlation coefficient is 0.9996, and the reproducibility is good. The coefficients of variation of repeatability test were 0.7% and 0.42%, respectively, which were less than 1. The method could be used to detect Babes caballi specifically, but to MarTaylor's, Babes's double bud, Taylor's annulus. The detectable rates of MGB-FQ PCR and PCR in 90 clinical samples were 53% and 30%, respectively. The specificity of MGB-FQ PCR assay for Babes's caballi was strong. It has high sensitivity and good reproducibility. It can be used in the diagnosis and epidemiological investigation of caballi Babes's disease. It will provide a new method for the detection of tick-transmitted piridiasis.
【學位授予單位】：新疆農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S858.21

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 高德才;郭續(xù);;一例犬吉氏巴貝斯蟲的診治與臨床分析[J];中國動物保健;2012年10期

2 王軼男;錢年超;黃國明;胡詩悅;薛書江;賈立軍;張守發(fā);;牛瑟氏泰勒蟲與牛卵形巴貝斯蟲多重PCR檢測方法的建立[J];中國獸醫(yī)科學;2013年04期

3 白啟，，劉光遠，韓根鳳，惠禹;甘肅張家川牛卵形巴貝斯蟲的分離及補充傳播試驗[J];中國獸醫(yī)科技;1994年09期

4 陳啟軍，李德昌;巴貝斯蟲分子生物學研究進展[J];中國獸醫(yī)科技;1995年06期

5 殷宏,羅建勛,呂文順,呂文祥,張其才,王玉英,劉天斌,律光啟,李忠義,竇云龍,趙鵬宇,常思明;莫氏巴貝斯蟲和羊巴貝斯蟲在我國的分離及形態(tài)學觀察[J];中國獸醫(yī)科技;1997年10期

6 任鈺峰;馬瑛;錢麗莉;;一例犬感染吉氏巴貝斯蟲的病例報告[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2014年02期

7 白音查汗,五十嵐郁男;牛卵形巴貝斯蟲的體外培養(yǎng)[J];中國獸醫(yī)寄生蟲病;2001年02期

8 梁億林;鄧耿高;楊龍飛;龐偉;;犬韋氏巴貝斯蟲的分子鑒定[J];廣東農業(yè)科學;2011年14期

9 黃國明;賈立軍;薛書江;張守發(fā);;牛卵形巴貝斯蟲巢式PCR診斷方法的建立及初步應用[J];中國獸醫(yī)學報;2012年10期

10 王婧;周緒正;李冰;魏曉娟;范穎;劉翠翠;張繼瑜;;抗巴貝斯蟲藥物的研究進展[J];中國畜牧獸醫(yī);2013年04期

相關會議論文 前10條

1 牛慶麗;關貴全;馬米玲;劉志杰;劉愛紅;高金亮;任巧云;李有全;劉軍龍;羅建勛;殷宏;;用反向線狀印跡方法檢測和區(qū)別羊的泰勒蟲和巴貝斯蟲[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第六次代表大會暨第十次學術研討會論文集[C];2009年

2 周金林;沈杰;小沼操;;吉氏巴貝斯蟲二個亞細胞標記分子的克隆和部分功能鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2003年學術年會論文集[C];2003年

3 羅建勛;殷宏;劉光遠;關貴全;劉志杰;劉愛紅;黨志勝;馬米玲;魯炳義;孫彩琴;白啟;呂文順;陳溥言;;我國牛的巴貝斯蟲分子分類學研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第五次代表大會暨第八次學術研討會論文集[C];2004年

4 黃國明;賈立軍;薛書江;張守發(fā);;牛卵形巴貝斯蟲巢式PCR診斷方法的建立及初步應用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第六次代表大會暨第十一次學術研討會論文集[C];2011年

5 關貴全;Emmanuelle Moreau;Nadine Brisseau;羅建勛;殷宏;Alain Chauvin;;不同種綿羊的紅細胞對巴貝斯蟲體外易感性的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第六次代表大會暨第十一次學術研討會論文集[C];2011年

6 謝俊仁;劉光遠;田占成;羅金;沈輝;;用反向線性印跡方法檢測和區(qū)分馬泰勒蟲和駑巴貝斯蟲的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第六次代表大會暨第十一次學術研討會論文集[C];2011年

7 羅建勛;殷宏;劉光遠;關貴全;劉志杰;劉愛紅;黨志勝;馬米玲;魯炳義;孫彩琴;白啟;呂文順;陳溥言;;牛的巴貝斯蟲未定種在小亞璃眼蜱飽血雌蟲體內的發(fā)育形態(tài)觀察[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第五次代表大會暨第八次學術研討會論文集[C];2004年

8 劉愛紅;羅建勛;關貴全;馬米玲;劉志杰;黨志勝;高金亮;任巧云;殷宏;;建立于18S rRNA基因測序基礎上的羊巴貝斯蟲分子分類學研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第五次代表大會暨第八次學術研討會論文集[C];2004年

9 羅金;劉光遠;謝俊仁;田占成;沈輝;;18S rRNA序列差異在馬梨形蟲分類學中的應用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第六次代表大會暨第十一次學術研討會論文集[C];2011年

10 張慶麗;胡敏;周艷琴;趙俊龍;;東方巴貝斯入侵相關的牛紅細胞糖蛋白受體基因的克隆及功能研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第六次代表大會暨第十一次學術研討會論文集[C];2011年

相關重要報紙文章 前10條

1 李延生;務實成就賽貝斯數據庫管理龍頭地位[N];中國企業(yè)報;2003年

2 美聯;菲·莫成功收購納貝斯克[N];廠長經理日報;2000年

3 ;增持浙江蘭貝斯[N];中國證券報;2003年

4 本報記者 劉曦　通訊員 何爾海;深圳知名臺企資方棄廠躲債[N];中華工商時報;2005年

5 由健;擅長設計博物館的建筑師——利貝斯金德[N];中華建筑報;2004年

6 本報記者　　劉波;墨西哥外長德爾貝斯：中墨能源協(xié)議討論中[N];21世紀經濟報道;2006年

7 貝斯印;貝斯印的平臺式結構:將省錢進行到底[N];中國包裝報;2009年

8 本報記者 姜洪軍;老鼠曾經絆大象 “性感”世通毀于造假丑聞[N];中國計算機報;2011年

9 記者 張四代;印度將參與加拿大鉀肥項目[N];農資導報;2009年

10 深圳特區(qū)報記者 梁婷　實習生 王艷春;五彩膠帶組合出大千世界[N];深圳特區(qū)報;2011年

相關博士學位論文 前2條

1 羅建勛;巴貝斯蟲未定種的發(fā)現及牛巴貝斯蟲病的免疫診斷和藥物防治研究[D];南京農業(yè)大學;2004年

2 楊其清;犬吉氏巴貝斯蟲重組表達抗原檢測技術的建立及其在流行病學調查上的應用[D];南京農業(yè)大學;2013年

相關碩士學位論文 前8條

1 王錦明;莫氏巴貝斯蟲在我國的流行狀況調查及馬達復合物組件蛋白基因的初步研究[D];中國農業(yè)科學院;2013年

2 尚澤松;犬巴貝斯蟲套式PCR檢測方法的建立與應用[D];河南科技大學;2014年

3 張楊;馬駑巴貝斯蟲二溫式、熒光PCR檢測方法的建立及其初步應用[D];新疆農業(yè)大學;2015年

4 劉愛紅;建立于18SrRNA基因測序基礎上的羊巴貝斯蟲分子分類學研究[D];甘肅農業(yè)大學;2003年

5 劉鐵;梅里貝斯·德姆的聲樂教學理論對我國聲樂教學的啟示[D];曲阜師范大學;2014年

6 薛書江;駑巴貝斯蟲BC-48基因片段在大腸桿菌中的表達與初步應用[D];延邊大學;2007年

7 張浩浩;羊巴貝斯蟲細菌人工染色體文庫構建及物理圖譜繪制[D];中國農業(yè)科學院;2014年

8 羅金;馬泰勒蟲分類學定位佐證及PCR、ELISA檢測方法的建立[D];甘肅農業(yè)大學;2011年

本文編號：1690622