本文選題：奶山羊乳腺上皮細胞　切入點：泌乳　出處：《東北農(nóng)業(yè)大學》2015年碩士論文

【摘要】：具有泌乳功能的乳腺是哺乳動物的特殊腺體。為了提高奶山羊的泌乳量,研究者們在分子生物學的基礎上對乳腺進行了大量的研究。mi RNA是一類長度約為18~25個核苷酸組成的單鏈非編碼RNA,大量存在于在人類和哺乳動物的細胞中并發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。本研究以奶山羊乳腺上皮細胞中的mi R-142-3p為研究對象,通過使用mi Rbase數(shù)據(jù)庫對mi R-142-3p靶位點預測發(fā)現(xiàn),mi R-142-3p以不完全配對的方式結合于催乳素受體(PRLR)3’UTR區(qū)域即它們之間存在靶向關系,所以推測mi R-142-3p可能與奶山羊乳腺上皮細胞泌乳功能密切相關。本研究旨在通過mi R-142-3p基因過表達與抑制,進一步研究mi R-142-3p對奶山羊乳腺上皮細胞的泌乳調(diào)節(jié)作用。本研究利用脂質(zhì)體載體向奶山羊乳腺上皮細胞中轉(zhuǎn)染mi R-142-3p mimics和mi R-142-3p inhibitor并作用48h,進而研究mi R-142-3p對奶山羊乳腺上皮泌乳功能的調(diào)控作用。應用q RT-PCR檢測技術檢測Prlr及其相關通路基因的變化;利用Western blotting方法檢測mi R-142-3p對PRLR等泌乳相關通路蛋白的影響;利用免疫熒光檢測PRLR在奶山羊乳腺上皮細胞中的定位及表達;應用EDU法檢測奶山羊乳腺上皮細胞增殖;應用流式檢測法檢測奶山羊乳腺上皮細胞周期及凋亡;使用CCK試劑盒檢測奶山羊乳腺上皮細胞活力的變化。同時收集作用48h后的培養(yǎng)液,應用TG試劑盒檢測奶山羊乳腺上皮細胞甘油三酯的分泌的變化及乳糖試劑盒檢測其分泌乳糖的變化情況。實驗結果表明:①應用q RT-PCR方法分別檢測過表達及抑制mi R-142-3p時mi R-142-3p與靶基因Prlr的變化,mi R-142-3p過表達,mi R-142-3p表達量升高,Prlr下調(diào);mi R-142-3p抑制,mi R-142-3p表達量降低,Prlr上調(diào)。②Western blotting技術檢測結果顯示,mi R-142-3p過表達時,奶山羊乳腺上皮細胞中PRLR、SREBP、AKT1、p-AKT1、m TOR、p-m TOR、STAT5、p-STAT5、CSN2、PPARγ、Cyclin D1表達量均下降;mi R-142-3p抑制時,奶山羊乳腺上皮細胞中PRLR、SREBP、AKT1、p-AKT1、m TOR、p-m TOR、STAT5、p-STAT5、CSN2、PPARγ、Cyclin D1表達均升高;過表達及抑制時,GLUT1均表達變化不顯著。③利用免疫熒光結果顯示,mi R-142-3p在細胞水平調(diào)控PRLR位置,并使PRLR表達水平降低。④應用EDU法檢測奶山羊乳腺上皮細胞增殖,結果顯示mi R-142-3p可抑制奶山羊乳腺上皮細胞增殖。⑤流式細胞檢測法檢測奶山羊乳腺上皮細胞周期及凋亡,發(fā)現(xiàn)mi R-142-3p可抑制細胞周期,促進細胞凋亡。⑥使用CCK法檢測奶山羊乳腺上皮細胞活力的變化,結果顯示mi R-142-3p可抑制細胞活力。⑦采用TG試劑盒及乳糖試劑盒分別檢測奶山羊乳腺上皮細胞分泌甘油三酯及乳糖的變化情況,結果顯示mi R-142-3p可抑制奶山羊乳腺上皮細胞甘油三酯的生物合成,但對乳糖分泌無顯著影響。綜上所述,mi R-142-3p通過抑制PRLR的表達,下調(diào)泌乳信號相關通路蛋白,從而抑制乳腺上皮奶山羊乳腺上皮細胞的增殖和活力,促進細胞凋亡,并對奶山羊乳腺上皮細胞的泌乳功能具有負向調(diào)節(jié)作用。
[Abstract]:In order to improve the lactation amount of breast epithelial cells of dairy goats , the effects of mi R - 142 - p on the lactation function of breast epithelial cells of milk goats were investigated by using the method of Western blotting . The results showed that mi R - 142 - p could inhibit the proliferation of mammary epithelial cells of dairy goats . The results showed that mi R - 142 - p could inhibit the proliferation of mammary epithelial cells of milk goats .

【學位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S827

【參考文獻】

相關博士學位論文 前1條

1 陸黎敏;MAPK1和eEF1B對奶牛乳腺上皮細胞泌乳調(diào)控作用及機理研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2013年

相關碩士學位論文 前1條

1 張兆波;miR-142-3p靶向抑制IRAK-1表達調(diào)控BCG與巨噬細胞免疫應答反應[D];寧夏醫(yī)科大學;2013年

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本文編號：1671876