本文選題：A型產(chǎn)氣莢膜梭菌　切入點(diǎn)：分離鑒定　出處：《山東農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：近年來,我國許多兔場(chǎng)頻繁爆發(fā)兔腹瀉性腸炎,主要由A型產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的一種腸道疾病,給兔養(yǎng)殖戶造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。該病發(fā)病迅速,死亡率高,所以對(duì)該病的預(yù)防工作至關(guān)重要。本試驗(yàn)建立的A型產(chǎn)氣莢膜梭菌的感染模型,不僅為產(chǎn)氣莢膜梭菌病有關(guān)疫苗的效力檢驗(yàn);抗毒素血清的治療效果評(píng)價(jià)提供了感染模型,還為評(píng)估菌株的毒力,產(chǎn)氣莢膜梭菌的致病機(jī)制研究提供參考。通過細(xì)菌的分離培養(yǎng),染色涂片鏡檢,分離純化,生化實(shí)驗(yàn)及多重PCR初步診斷臨床病例中分離的產(chǎn)氣莢膜梭菌基因型為A型。從臨床發(fā)病兔的肝臟共分離出4株A型產(chǎn)氣莢膜梭菌,和參考菌株NCTC 528經(jīng)過菌種的復(fù)蘇、增菌和產(chǎn)毒素培養(yǎng),所產(chǎn)毒素進(jìn)行卵磷脂酶活性實(shí)驗(yàn)和小鼠LD50的測(cè)定和比較。在相同的產(chǎn)毒條件下得到產(chǎn)毒效果比較好的菌株(濟(jì)寧株1)。NCTC 528和濟(jì)寧株1菌株經(jīng)過重新復(fù)蘇、增菌和產(chǎn)毒,所得的培養(yǎng)物用于感染家兔。培養(yǎng)物通過不同處理方式、不同感染方式接種2kg健康家兔,研究結(jié)果表明:腹腔注射NCTC528除菌毒素(小鼠LD50:24.25;卵磷脂酶活性:24)可在6-8小時(shí)致死家兔;最小致死劑量是3ml;肌肉注射528除菌毒素(小鼠LD50:24.25;卵磷脂酶活性:24)的最小致死劑量是4ml;肌肉注射全菌液(小鼠LD50:25.25;毒素卵磷脂酶活性:25,細(xì)菌濃度1.3×109cfu/ml)最小致死量是5ml,對(duì)腹腔和肌肉注射的感染死亡兔進(jìn)行剖檢病變和組織病理學(xué)病變的觀察,病變主要特征是:腹腔和肌肉注射除菌毒素都出現(xiàn)了胃黏膜脫落和小腸黏膜彌散性出血現(xiàn)象;但胃粘膜有潰瘍?cè)?盲腸漿膜面有出血病變少見。分別以培養(yǎng)物(細(xì)菌濃度1.3×109cfu/ml,卵磷脂酶活性效價(jià)25),30ml,40ml,50ml灌服2kg家兔,并飼喂不同飼料配方飼料,僅見短期腹瀉,未見死亡。2Kg家兔回腸注射感染全菌液(細(xì)菌濃度1.6×108cfu/ml,卵磷脂酶活性為24)5ml、8ml、10ml。部分兔出現(xiàn)腹瀉死亡,不能穩(wěn)定復(fù)制病變,血常規(guī)監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn):攻毒后一周淋巴細(xì)胞比率、血小板總數(shù)和白細(xì)胞總數(shù)明顯比正常值偏高,證明體內(nèi)發(fā)生炎癥反應(yīng)。感染后3周血清中A型產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素抗體效價(jià)為1:200-1:400。據(jù)攻毒后存活家兔的腸道菌群分析發(fā)現(xiàn)產(chǎn)氣莢膜梭菌在這些腸內(nèi)容物(空腸、回腸、盲腸)中,并不是優(yōu)勢(shì)菌。
[Abstract]:In recent years, many rabbit farms in China frequently outbreak diarrhoeal enteritis, mainly caused by Clostridium perfringens type A, which causes great economic losses to rabbit farmers. The infection model of Clostridium perfringens type A not only provides an infection model for testing the efficacy of the vaccine related to Clostridium perfringens, but also provides an infection model for the evaluation of the therapeutic effect of antitoxin serum. It also provides a reference for evaluating the virulence of the strain and studying the pathogenic mechanism of Clostridium perfringens. The genotypes of Clostridium perfringens isolated from clinical cases diagnosed by biochemical experiments and multiple PCR were genotype A. four strains of Clostridium perfringens type A were isolated from the liver of clinically infected rabbits, and the reference strain NCTC 528 was resuscitated. Lecithin enzyme activity of the toxin and LD50 of mice were tested and compared. Under the same conditions, the strains producing the toxin (Jining strain 1).NCTC 528 and Jining strain 1) were resuscitated after resuscitation, and the strain of Jining strain 1).NCTC 528 and the strain of Jining strain 1 were resuscitated. The culture was used to infect rabbits. The culture was inoculated with 2kg healthy rabbits by different treatment and different infection methods. The results showed that intraperitoneal injection of NCTC528 sterilizing toxin (LD50: 24.25; lecithin activity: 24) could kill rabbits in 6-8 hours. The minimum lethal dose for intramuscular injection of 528 sterilizing toxin (LD50: 24.25; lecithin activity: 24) is 4 ml; the minimum lethal dose for intramuscular injection of 528 sterilizing toxin (LD50: 25.25); the minimum lethal dose for intramuscular injection of bacteriostasis (LD50: 25.25; bacterial concentration 1.3 脳 10 9 cfumlP) is 5 ml. The pathological changes and histopathological changes were observed in the dead rabbits infected by intraperitoneal and intramuscular injection. The main features of the lesion are: intraperitoneal and intramuscular injection of sterilizing toxin has occurred gastric mucosal shedding and small intestinal mucosal diffuse bleeding phenomenon, but gastric mucosal ulcer focus, Bleeding lesions on the serosa of cecum were rare. Culture (bacterial concentration 1.3 脳 10 9 cfur / ml, lecithin enzyme activity titer 25 ~ 30 ml ~ 40 ml ~ (50 ml)) was administered to 2kg rabbits, and fed with different feed formulations, only short-term diarrhea was observed. There was no death. 2Kg rabbit ileum infecting the whole bacterial fluid (bacterial concentration 1.6 脳 10 8 cfur / ml, lecithin enzyme activity 24 5 ml 8 ml 10 ml). Some rabbits died of diarrhea and could not replicate the disease stably. The blood routine monitoring found that the lymphocyte ratio was 1 week after exposure to the virus. The total number of platelets and white blood cells were obviously higher than the normal value. The antibody titer of Clostridium perfringens type A toxin in serum was 1: 200-1: 400 at 3 weeks after infection. According to the intestinal flora analysis of surviving rabbits after infection, it was found that Clostridium perfringens was found in these intestinal contents (jejunum, ileum, cecum). Is not the dominant bacteria.
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S858.291

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本文編號(hào)：1663123