本文選題：豬圓環(huán)病毒型(PCV)　切入點(diǎn)：熒光抗體　出處：《江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)》2017年03期

【摘要】：本研究旨在利用原核大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)1株豬圓環(huán)2型病毒(Porcine circovirus type 2,PCV2)小分子熒光抗體,以及該熒光抗體用于PCV2病毒直接免疫熒光(Direct immunofluorescence assay,DIF)檢測(cè)。選取1株篩選到的PCV2特異性納米抗體基因V22,按照E.coli原核表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行密碼子優(yōu)化重新合成,與熒光蛋白基因融合后插入p ET28(a)中,20℃條件下誘導(dǎo)表達(dá)16 h,利用SDS-PAGE、Western-blot技術(shù)鑒定蛋白是否表達(dá)及其可溶性,并對(duì)可溶熒光抗體蛋白進(jìn)行鎳柱親和層析純化,純化蛋白用于建立PCV2特異性DIF檢測(cè)方法,同時(shí)對(duì)其工作條件、工作濃度、特異性以及穩(wěn)定性進(jìn)行驗(yàn)證,并與PCV2經(jīng)典間接免疫熒光檢測(cè)方法進(jìn)行比較,驗(yàn)證其靈敏度。結(jié)果表明,PCV2熒光抗體基因在E.coli原核表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá),可溶蛋白占目的蛋白的60%左右;純化后熒光抗體蛋白呈現(xiàn)明顯綠色,具有良好的熒光活性,不同批次表達(dá)及純化的熒光抗體效果一致,-20℃保存6個(gè)月后抗體效價(jià)不變;PCV2特異性DIF試驗(yàn)結(jié)果表明該熒光抗體只對(duì)PCV2病毒感染細(xì)胞具有良好的反應(yīng)原性,利用該抗體建立的直接免疫熒光法能夠用于PCV2病毒滴度的測(cè)定,滴度測(cè)定結(jié)果與間接免疫熒光法檢測(cè)結(jié)果一致。說明,在原核系統(tǒng)中成功表達(dá)PCV2的小分子熒光抗體,該熒光抗體蛋白具有良好的特異性、靈敏度及穩(wěn)定性,用該抗體建立的PCV2特異性DIF操作簡(jiǎn)單,且具有較好的特異性和敏感性,對(duì)PCV2的檢測(cè)有潛在應(yīng)用價(jià)值。
[Abstract]:The purpose of this study was to express a porcine circovirus type 2 PCV2 small molecular fluorescent antibody by using prokaryotic Escherichia coli system. And the fluorescent antibody was used to detect PCV2 virus direct immunofluorescence assay-DIF.A selected PCV2 specific nano-antibody gene V22 was optimized and resynthesized according to the E.coli prokaryotic expression system. After fusion with fluorescent protein gene, the protein was induced to express at 20 鈩，

本文編號(hào)：1659467