發(fā)布時(shí)間：2018-03-24 09:44

  本文選題：豬圓環(huán)病毒型　切入點(diǎn)：重組Cap蛋白　出處：《中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)》2017年06期

【摘要】：本試驗(yàn)將編碼PCV2 Cap蛋白的基因克隆到pET-32a載體中,構(gòu)建成重組質(zhì)粒pET-32a-Cap,并轉(zhuǎn)化到BL21宿主菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),通過(guò)SDS-PAGE鑒定PCV2 Cap重組蛋白的表達(dá)情況,用Ni~+親和柱純化重組蛋白,并免疫產(chǎn)蛋雞來(lái)制備抗Cap的多克隆抗體IgY,通過(guò)間接ELISA檢測(cè)抗體滴度和抗Cap IgY抗體與PCV2的結(jié)合力。結(jié)果顯示,Cap蛋白能在原核細(xì)胞中成功重組表達(dá),蛋白主要以可溶性存在于細(xì)胞裂解液上清中,Ni~+柱純化的重組蛋白經(jīng)五次免疫產(chǎn)蛋雞后卵黃抗體的滴度可達(dá)1∶64 000,所制備的IgY抗體與病毒和Cap蛋白的結(jié)合力較高。上述結(jié)果為研制檢測(cè)PCV2 Cap蛋白試劑盒奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In this experiment, the gene encoding PCV2 Cap protein was cloned into pET-32a vector, and the recombinant plasmid pET-32a-Cap. was constructed, and transformed into BL21 host strain to induce expression. The expression of PCV2 Cap recombinant protein was identified by SDS-PAGE, and the recombinant protein was purified by Ni-affinity column. The polyclonal antibody against Cap was prepared by immunizing laying hens. The titer of antibody and the binding force of Cap IgY antibody to PCV2 were detected by indirect ELISA. The results showed that the captophan protein could be successfully expressed in prokaryotic cells. The yolk antibody titer of the recombinant protein, mainly soluble in the supernatant of cell lysate, was up to 1:64 000 after five times immunization, and the IgY antibody had higher binding power with virus and Cap protein. The results laid a foundation for the development of PCV2 Cap protein kit.
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;
【基金】：陜西省國(guó)際科技合作基地建設(shè)項(xiàng)目(2015SD0018)
【分類號(hào)】：S852.651

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