本文選題：梅花鹿　切入點(diǎn)：鹿茸　出處：《吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：鹿茸是雄性梅花鹿或馬鹿的帶有紅黃色或棕黃色細(xì)茸毛未長(zhǎng)成硬骨時(shí)的嫩角,也是哺乳動(dòng)物中唯一能夠完全再生的器官。人們逐漸發(fā)現(xiàn)鹿茸具有特殊的分子機(jī)理,有很高的研究?jī)r(jià)值。隨著研究深入,鹿茸細(xì)胞生長(zhǎng)因子已經(jīng)被認(rèn)為是調(diào)節(jié)鹿茸再生發(fā)育的主效因子之一。近年,細(xì)胞生長(zhǎng)因子的研究已經(jīng)成為熱點(diǎn),其中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)已經(jīng)被證實(shí)存在于鹿茸頂端組織中。在鹿茸組織的快速生長(zhǎng)中,血管的分布也越來越旺盛。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子是一種促生長(zhǎng)和修復(fù)蛋白,特異性地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞,促進(jìn)其增殖,提高血管的通透性,改善血液循環(huán),在鹿茸血管生成和發(fā)育過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用。因此,本研究將對(duì)梅花鹿VEGF基因的功能進(jìn)行初步研究,為深入探討梅花鹿VEGF基因?qū)β谷咨L(zhǎng)的調(diào)節(jié)機(jī)制提供理論依據(jù),也為鹿茸細(xì)胞因子在再生醫(yī)學(xué)和腫瘤醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展提供參考依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)利用PCR技術(shù)獲得梅花鹿VEGF基因,純化回收目的片段,并插入到pMD-18T載體中,轉(zhuǎn)化進(jìn)入宿主菌大腸桿菌DH5ɑ中挑選出陽性菌對(duì)其進(jìn)行PCR反應(yīng)和雙酶切反應(yīng)鑒定,并進(jìn)行測(cè)序。采用免疫組化法檢測(cè)鹿茸VEGF蛋白在鹿茸頂端組織茸皮層、間充質(zhì)層和軟骨層的表達(dá)水平。再構(gòu)建原核表達(dá)載體pET-30a-VEGF,轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosetta宿主菌中,篩選高效率轉(zhuǎn)化子,并搖瓶培養(yǎng),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后進(jìn)行SDS-PAGE電泳檢測(cè),經(jīng)鎳離子親和層析柱純化目的蛋白,并進(jìn)行目的蛋白復(fù)性,經(jīng)Western blotting檢測(cè)重組蛋白VEGF抗原活性,最后利用MTT法檢測(cè)重組蛋白VEGF對(duì)鼠成纖維細(xì)胞NIH3T3增殖的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,克隆獲得VEGF基因序列,長(zhǎng)度為519bp,與牛、羊、豬的核苷酸序列的同源性分別為98.78%、97.56%、96.95%,與牛、羊、豬的氨基酸序列同源性分別為98.79%、97.78%、96.36%。免疫組化結(jié)果表明VEGF蛋白在茸皮層、間充質(zhì)層和軟骨層中均有表達(dá),但是沒有明顯差異。Western blotting結(jié)果表明,鹿茸VEGF重組蛋白具抗原活性,MTT實(shí)驗(yàn)表明VEGF重組蛋白對(duì)鼠成纖維NIH3T3細(xì)胞具有一定的增殖作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S825

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本文編號(hào)：1650458