本文選題：梅花鹿　切入點：鹿茸　出處：《吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：鹿茸是雄性梅花鹿或馬鹿的帶有紅黃色或棕黃色細茸毛未長成硬骨時的嫩角,也是哺乳動物中唯一能夠完全再生的器官。人們逐漸發(fā)現(xiàn)鹿茸具有特殊的分子機理,有很高的研究價值。隨著研究深入,鹿茸細胞生長因子已經(jīng)被認為是調(diào)節(jié)鹿茸再生發(fā)育的主效因子之一。近年,細胞生長因子的研究已經(jīng)成為熱點,其中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)已經(jīng)被證實存在于鹿茸頂端組織中。在鹿茸組織的快速生長中,血管的分布也越來越旺盛。血管內(nèi)皮生長因子是一種促生長和修復(fù)蛋白,特異性地作用于血管內(nèi)皮細胞,促進其增殖,提高血管的通透性,改善血液循環(huán),在鹿茸血管生成和發(fā)育過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用。因此,本研究將對梅花鹿VEGF基因的功能進行初步研究,為深入探討梅花鹿VEGF基因?qū)β谷咨L的調(diào)節(jié)機制提供理論依據(jù),也為鹿茸細胞因子在再生醫(yī)學(xué)和腫瘤醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展提供參考依據(jù)。本實驗利用PCR技術(shù)獲得梅花鹿VEGF基因,純化回收目的片段,并插入到pMD-18T載體中,轉(zhuǎn)化進入宿主菌大腸桿菌DH5ɑ中挑選出陽性菌對其進行PCR反應(yīng)和雙酶切反應(yīng)鑒定,并進行測序。采用免疫組化法檢測鹿茸VEGF蛋白在鹿茸頂端組織茸皮層、間充質(zhì)層和軟骨層的表達水平。再構(gòu)建原核表達載體pET-30a-VEGF,轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosetta宿主菌中,篩選高效率轉(zhuǎn)化子,并搖瓶培養(yǎng),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后進行SDS-PAGE電泳檢測,經(jīng)鎳離子親和層析柱純化目的蛋白,并進行目的蛋白復(fù)性,經(jīng)Western blotting檢測重組蛋白VEGF抗原活性,最后利用MTT法檢測重組蛋白VEGF對鼠成纖維細胞NIH3T3增殖的影響。實驗結(jié)果表明,克隆獲得VEGF基因序列,長度為519bp,與牛、羊、豬的核苷酸序列的同源性分別為98.78%、97.56%、96.95%,與牛、羊、豬的氨基酸序列同源性分別為98.79%、97.78%、96.36%。免疫組化結(jié)果表明VEGF蛋白在茸皮層、間充質(zhì)層和軟骨層中均有表達,但是沒有明顯差異。Western blotting結(jié)果表明,鹿茸VEGF重組蛋白具抗原活性,MTT實驗表明VEGF重組蛋白對鼠成纖維NIH3T3細胞具有一定的增殖作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S825

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本文編號：1650458