本文選題：狂犬病毒　切入點(diǎn)：shRNA　出處：《微生物學(xué)報(bào)》2016年01期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：【目的】本試驗(yàn)前期已經(jīng)證實(shí),用單鏈抗體(sc Fv)-綠膿桿菌跨膜區(qū)(ETA)-酵母DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(GAL4)表達(dá)的蛋白(簡(jiǎn)寫(xiě)為SEG蛋白),SEG能與含sh RNA(short hairpin RNA)的質(zhì)粒(p RNATU6.3-sh RNA)結(jié)合形成復(fù)合物SEG-sh RNA,并靶向運(yùn)送該質(zhì)粒進(jìn)入感染狂犬病毒(Rabies virus,RV)的細(xì)胞,抑制RV復(fù)制。本研究用感染狂犬病病毒的小鼠模型,進(jìn)行SEG-sh RNA復(fù)合物小鼠體內(nèi)靶向性運(yùn)送si RNA(short interfering RNA)和抑制RV復(fù)制的研究。【方法】用已建立RV CVS-24株小鼠肌肉注射模型進(jìn)行試驗(yàn)。取50 LD_(50) CVS-24攻毒,在攻毒后12 h尾靜脈注射SEG-sh RNA,流式細(xì)胞儀檢測(cè)SEG-sh RNA的體內(nèi)靶向性;同樣方法攻毒后,尾靜脈注射SEG-sh RNA,連續(xù)4 d,攻毒后第5天小鼠腦組織用q RT-PCR、RT-PCR、Western blot、免疫熒光染色法檢測(cè)其中RV的含量;統(tǒng)計(jì)小鼠存活率;并檢測(cè)小鼠體內(nèi)IFN-α含量,從而分析SEG-sh RNA在體內(nèi)的抗病毒作用。【結(jié)果】結(jié)果表明僅在RV攻毒小鼠的注射部位檢測(cè)到綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表達(dá),未注射RV的腿部及腦、肝、脾、腎均無(wú)GFP表達(dá),說(shuō)明SEG-sh RNA可靶向RV感染細(xì)胞運(yùn)送sh RNA。攻毒后第5天腦組織q RT-PCR結(jié)果表明靶向藥物組比病毒對(duì)照減少4.88倍(3.9/0.8);RT-PCR、Western blot、免疫熒光染色試驗(yàn)結(jié)果表明使用SEG-sh RNA組病毒量明顯少于病毒對(duì)照組;且攻毒后13 d,動(dòng)物存活率達(dá)50%,而病毒對(duì)照100%死亡。檢測(cè)小鼠體內(nèi)IFN-α未見(jiàn)升高。【結(jié)論】以上試驗(yàn)表明SEG蛋白在小鼠體內(nèi)靶向運(yùn)送含sh RNA的質(zhì)粒到感染組織細(xì)胞;對(duì)小鼠體內(nèi)RV有明顯抑制作用,因此可以用于狂犬病毒感染的特異輔助性救治研究。
[Abstract]:[objective] it has been confirmed that, A protein expressed in the transmembrane region of Pseudomonas aeruginosa (DNA binding domain GAL4) (SEG protein can bind to plasmid RNA(short RNATU6.3-sh RNAs containing sh RNA(short hairpin) to form complex SEG-sh RNAs, which is targeted to transport the plasmid into the sense of entry. The cells infected with rabies virus RV, Inhibition of RV replication. A mouse model infected with rabies virus was used in this study. The aim transport of si RNA(short interfering (si RNA(short interfering) and inhibition of RV replication in mice with SEG-sh RNA complex were studied. [methods] an intramuscular injection model of RV CVS-24 strain was established. SEG-sh RNAs were injected into tail vein 12 hours after poisoning, and the in vivo targeting of SEG-sh RNA was detected by flow cytometry. SEG-sh RNA was injected into caudal vein for 4 days. On the 5th day, the brain tissue of mice was detected by Q RT-PCRX RT-PCRX Western blot, the RV content was detected by immunofluorescence staining, the survival rate of mice was counted, and the content of IFN- 偽 in mice was measured. The antiviral effect of SEG-sh RNA in vivo was analyzed. [results] the results showed that the expression of green fluorescent protein (GFP) was detected only in the injection site of RV infected mice, and no expression of GFP was found in the legs, brain, liver, spleen and kidney of mice without RV injection. The results of Q RT-PCR in brain tissue showed that the target drug group was 4.88 times lower than that of the control group. The results of immunofluorescence staining showed that the amount of virus in the group treated with SEG-sh RNA was significantly lower than that in the control group. The survival rate of the mice was 50% and the virus control was 100%. IFN- 偽 was not increased in the mice. [conclusion] the results showed that the SEG protein could transport the plasmid containing sh RNA to the infected tissue cells in vivo. It can be used in the study of specific adjuvant treatment of rabies virus infection.
【作者單位】： 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所;吉林省人畜共患病預(yù)防與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專(zhuān)項(xiàng)(201103032,201303042)~~
【分類(lèi)號(hào)】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 楊瑞梅;崔燕;楊松濤;王承宇;單虎;王化磊;夏咸柱;;基于狂犬病病毒G蛋白scFv介導(dǎo)的靶向shRNA制備與鑒定[J];微生物學(xué)報(bào);2010年02期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 魯毅;李任峰;徐萍;王三虎;田獻(xiàn)禮;;RNAi的抗病毒機(jī)制及應(yīng)用[J];生命的化學(xué);2011年04期

2 程朝飛;宮苗苗;李剛;趙占中;朱鴻飛;袁維峰;史利軍;;抗狂犬病病毒核蛋白單鏈抗體的表達(dá)及活性鑒定[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2013年09期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 周碎央;c-Abl在上皮性卵巢腫瘤中的表達(dá)及其惡性行為作用機(jī)制的初步探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 張守峰;李清竹;李忠;劉曄;張菲;盧彥欣;夏咸柱;扈榮良;;細(xì)胞水平狂犬病病毒感染的RNA干擾[J];病毒學(xué)報(bào);2006年06期

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉曄;張守峰;張菲;趙敬慧;扈榮良;;我國(guó)首次從吉林省境內(nèi)蝙蝠體內(nèi)分離獲得狂犬病毒[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2012年12期

2 梁名奕;狂犬病毒在慢性感染細(xì)胞培養(yǎng)中對(duì)宿主細(xì)胞的影響[J];微生物學(xué)免疫學(xué)譯刊;1980年03期

3 任永禮;狂犬病研究進(jìn)展[J];廣東衛(wèi)生防疫資料;1986年04期

4 Maria Tollis;B.Dietzschold;C.B.Volia;H.Koprowski;張德禮;;猴接種狂犬病毒核糖核蛋白誘生抗狂犬病保護(hù)性免疫[J];北京實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);1992年01期

5 張世珍,梁米芳,董關(guān)木,鄭海法,侯云德;人源抗狂犬病毒單克隆抗體Fab段基因的獲得和表達(dá)[J];病毒學(xué)報(bào);2001年01期

6 黃薇,徐葛林,胡巧玲,李萍,王繼鱗,嚴(yán)家新,吳杰,祝玉桃,阮力,朱家鴻;雙表達(dá)狂犬病毒基因的非復(fù)制型痘苗病毒改建及免疫效果[J];中國(guó)病毒學(xué);2004年04期

7 熊成龍;邵中軍;魏紀(jì)東;居麗雯;周聯(lián)娣;姜慶五;;河南省8株狂犬病毒磷蛋白基質(zhì)蛋白基因分析[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2008年09期

8 賀福合;;淺談狂犬病毒的分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜禽種業(yè);2008年19期

9 劉聞一;鄭鈞豐;覃敏;黃勇;王意銀;鮑曉偉;李乙江;范泉水;張富強(qiáng);邱薇;江禹;涂長(zhǎng)春;李作生;;中國(guó)蝙蝠攜帶狂犬病毒研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2009年11期

10 梁紅茹;劉曉慧;陳晶;孫招金;郭霄峰;;狂犬病毒新型快速熒光斑點(diǎn)抑制實(shí)驗(yàn)方法的建立[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2009年07期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 劉聞一;鄭鈞豐;覃敏;黃勇;王意銀;鮑曉偉;李乙江;范泉水;張富強(qiáng);邱薇;江禹;涂長(zhǎng)春;李作生;;中國(guó)蝙蝠攜帶狂犬病毒研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2009年

2 鄭鈞豐;劉亮;王意銀;鮑曉偉;李乙江;岳鈴;王志慧;黃微;范泉水;張富強(qiáng);邱薇;江禹;涂長(zhǎng)春;李作生;;蝙蝠攜帶狂犬病毒研究現(xiàn)狀[A];動(dòng)物檢疫學(xué)分會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2010年

3 洪英;朱志雄;;淺談狂犬病[A];福建省科協(xié)第四屆學(xué)術(shù)年會(huì)衛(wèi)星會(huì)議“動(dòng)物疫病防治與人類(lèi)健康”學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

4 夏咸柱;;加強(qiáng)動(dòng)物狂犬病防控研究,從源頭上防控人類(lèi)狂犬病[A];全國(guó)獸醫(yī)外科學(xué)第13次學(xué)術(shù)研討會(huì)、小動(dòng)物醫(yī)學(xué)第1次學(xué)術(shù)研討會(huì)暨奶牛疾病第3次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2006年

5 張永振;;中國(guó)狂犬病毒的遺傳多樣性及其進(jìn)化[A];第二屆全國(guó)人畜共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

6 張海林;唐青;陶曉燕;王曉光;張?jiān)浦?楊衛(wèi)紅;米竹青;王靜林;章域震;馮云;鄭維斌;魯國(guó)勇;李勝?lài)?guó);;云南省保山市人間狂犬病的調(diào)查及病毒分子生物學(xué)特征分析[A];第二屆全國(guó)人畜共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

7 李積林;;加強(qiáng)犬只管理,有效防止狂犬病發(fā)生[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2009學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2009年

8 姚文榮;張永振;熊成龍;;浙江省一例狂犬病患者的核酸檢測(cè)分析[A];全國(guó)人畜共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

9 張永振;;中國(guó)狂犬病毒的特征及其流行特點(diǎn)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)熱帶病與寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)機(jī)會(huì)性感染學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2007年

10 張春斐;林荷芹;張紅楓;;34例狂犬病的臨床特點(diǎn)與防護(hù)對(duì)策[A];全國(guó)傳染病護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專(zhuān)題講座會(huì)議論文匯編[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 艾琳工作室策劃;笑笑得了狂犬病[N];中國(guó)教育資訊報(bào);2002年

2 鄭靈巧;狂犬病防控要找出我們的差距[N];健康報(bào);2007年

3 記者 李學(xué)華;南非發(fā)明廉價(jià)狂犬病治療藥物[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

4 祖述憲 安徽醫(yī)科大學(xué)流行病學(xué)教授 采訪 本報(bào)記者 李鵬;狂犬病的防疫誤區(qū)[N];北京科技報(bào);2010年

5 編譯 王金元;美國(guó)少女成為首位狂犬病治愈者[N];北京科技報(bào);2005年

6 防犬病;狂犬病及其防治[N];廣西日?qǐng)?bào);2000年

7 世界衛(wèi)生組織供稿 海萃譯;狂犬病威脅少年兒童[N];健康報(bào);2001年

8 ;被寵物咬傷必須接種狂犬病疫[N];遼寧日?qǐng)?bào);2004年

9 關(guān)春苓;遠(yuǎn)離狂犬病 重點(diǎn)在預(yù)防[N];消費(fèi)日?qǐng)?bào);2003年

10 本報(bào)記者 王蔚佳 通訊員 黃顯斌;科學(xué)防治：狂犬病不可怕[N];中國(guó)消費(fèi)者報(bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前8條

1 楊洋;野毒株狂犬病毒逃避樹(shù)突狀細(xì)胞識(shí)別的機(jī)制[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 韓小虎;狂犬病毒單克隆抗體的研制及應(yīng)用研究[D];吉林大學(xué);2007年

3 柯雪梅;蝙蝠攜帶狂犬病毒檢測(cè)方法的建立及在中國(guó)南方的調(diào)查研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

4 殷相平;動(dòng)物狂犬病基因工程亞單位疫苗研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

5 熊成龍;中國(guó)狂犬病毒的遺傳學(xué)特征[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2006年

6 楊瑞梅;單鏈抗體介導(dǎo)狂犬病毒shRNA靶向制劑的研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

7 高明華;狂犬病毒G，，N基因的表達(dá)、單克隆抗體制備與膠體金免疫層析檢測(cè)試紙的研制[D];吉林大學(xué);2007年

8 唐青;狂犬病毒核衣殼蛋白和糖蛋白抗原性分析及糖蛋白基因遺傳變異性研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1998年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 劉鈺蓉;VSV-SAD嵌合糖蛋白狂犬假病毒及其可調(diào)控輔助腺相關(guān)病毒體系的構(gòu)建[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 于金寧;中國(guó)狂犬病毒時(shí)空動(dòng)力學(xué)及其與狂犬病疫情的關(guān)系[D];山東大學(xué);2010年

3 唐婕;狂犬病毒的電鏡檢測(cè)及其糖蛋白基因的克隆與序列分析[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

4 王鐵成;狂犬病毒膠體金檢測(cè)試紙的制備與初步應(yīng)用[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2009年

5 薛琳;狂犬病毒熒光抗體的制備及初步應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2007年

6 羅世民;狂犬病弱毒疫苗Flury-lep株生物學(xué)特性檢測(cè)與分析[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

7 陳俊;減毒活疫苗免疫犬只前后狂犬病毒攜帶率及免疫效果研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2009年

8 王莉莉;我國(guó)南方部分地區(qū)蝙蝠攜帶狂犬病毒的病原生態(tài)學(xué)研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

9 馬益萍;檢測(cè)犬狂犬病毒抗體的間接ELISA方法的建立[D];揚(yáng)州大學(xué);2008年

10 段冶;抗狂犬病毒G蛋白單鏈抗體FV57的結(jié)構(gòu)與功能研究及分子改造[D];吉林大學(xué);2013年

本文編號(hào)：1650168