本文選題：H9N2亞型　切入點(diǎn)：水貂　出處：《山東農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：H9N2亞型流感病毒可引起人以及各種動(dòng)物低致病性呼吸道疾病。水貂對(duì)其易感,由于我國(guó)水貂養(yǎng)殖特點(diǎn)為狐貍、貉子與其混合飼養(yǎng),從而加大了狐貍、貉子感染H9N2亞型流感病毒的機(jī)會(huì)。為研究H9N2流感病毒在水貂群中的流行及進(jìn)化情況,以及是否在狐貍和貉子種群中造成感染。2015年本實(shí)驗(yàn)室從山東省中東部地區(qū)收集到105份水貂、32份狐貍和20份貉子的肺組織,并從水貂肺組織中分離到六株H9N2亞型流感病毒,A/Mink/Shandong/Z1/2015,A/Mink/Shandong/Z2/2015,A/Mink/Shandong/Z3/2015,A/Mink/Shandong/Z4/2015,A/Mink/Shandong/Z5/2015和A/Mink/Shandong/Z6/2015。而在狐貍和貉子的肺組織中沒有分離到流感病毒。將六株分離毒株的核苷酸序列與GenBank中收錄的H9N2亞型流感病毒的核苷酸序列進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn),該六株分離毒株的八個(gè)基因片段同源性為99.2%~100%;其PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS基因與A/mink/Shangdong/F10/2013(H9N2)(Mk/SD/F10/13)毒株的相應(yīng)片段同源性最高,都在97.0%以上,而PB2基因與A/environment/Suzhou/14/2013(H7N9)同源性最高,為99.4%。為進(jìn)一步揭示六株分離毒株的分子特征,用DNASTAR軟件分別推導(dǎo)其各基因片段的氨基酸序列,并與參考毒株進(jìn)行比較分析。分析結(jié)果表明,該六株分離毒株八段氨基酸序列的同源性為98.2-100%。六株分離毒株的HA蛋白第226位氨基酸均為亮氨酸(Leu),具有SAα-2,6-Gal的受體結(jié)合特性;其裂解位點(diǎn)處氨基酸序列為RSSR,表明六株病毒均是低致病性的毒株;HA蛋白有8個(gè)潛在糖基化位點(diǎn),與參考毒株相比,在218位氨基酸處丟失了一個(gè)潛在的糖基化位點(diǎn),在313位氨基酸處增加了一個(gè)潛在的糖基化位點(diǎn);六株分離毒株P(guān)B2蛋白的氨基酸序列在627位編碼谷氨酸Glu,第701位編碼天冬酰胺Asn,第627位符合禽源流感的特點(diǎn),但第701位的天冬酰胺Asn可以補(bǔ)償?shù)?27位突變產(chǎn)生的影響,增強(qiáng)其在哺乳動(dòng)物體內(nèi)的復(fù)制能力。為了進(jìn)一步分析六株分離毒株的基因片段的起源,用GeneBank中的H9N2亞型流感病毒的序列作為參考序列,進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)生分析。HA基因的系統(tǒng)發(fā)生樹分析得出:六株分離毒株屬于歐亞Ⅲ系的Y280亞系分支,NA基因與內(nèi)部基因PB1、PA、NP、NS的系統(tǒng)發(fā)生樹分析表明:六株分離毒株屬于歐亞Ⅱ系的Shanghai/F/98亞系分支,M基因的系統(tǒng)發(fā)生樹表明:六株分離毒株屬歐亞Ⅱ系的Hong Kong/G1/97亞系分支。且以上7個(gè)片段與Mk/SD/F10/13毒株具有最近的親緣關(guān)系;PB2基因的系統(tǒng)發(fā)生樹分析表明:六株分離毒株屬于歐亞Ⅰ系的Korea/38349-p96323/96亞系分支,且與A/environment/Suzhou/14/2013(H7N9)有很近的親緣關(guān)系。為研究貂源H9N2亞型流感病毒能否在水貂種群中水平傳播,是否可以跨種傳播給狐貍、貉子。本研究用實(shí)驗(yàn)室保存的Mk/SD/F10/13毒株進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果,發(fā)現(xiàn)在接種后的第4-8天,哨兵水貂出現(xiàn)了精神沉郁、食欲減退、流清亮鼻涕、流眼淚、輕微的咳嗽等癥狀,最后攻毒水貂和哨兵水貂都恢復(fù)健康,沒有造成死亡。排毒檢測(cè)發(fā)現(xiàn)哨兵水貂在第4~6天內(nèi)能夠通過鼻腔向外界排毒。剖檢能發(fā)現(xiàn)肺臟出血、氣管環(huán)出血、脾臟腫大出血等病理學(xué)變化。組織病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)肺臟表現(xiàn)出血性間質(zhì)性肺炎,且肺泡壁充血增厚。第14天采集水貂血液樣本分離血清進(jìn)行HI抗體檢測(cè)發(fā)現(xiàn)HI抗體均為陽性。哨兵狐貍和貉子沒有表現(xiàn)臨床癥狀,也沒檢測(cè)到排毒,但第14天采集狐貍和貉子血清檢測(cè)發(fā)現(xiàn)HI抗體均為陽性。同時(shí)進(jìn)行了狐貍和貉子的致病性實(shí)驗(yàn),攻毒狐貍和貉子沒有表現(xiàn)臨床癥狀,也沒檢測(cè)到排毒,而第14天采集狐貍和貉子血清檢測(cè)發(fā)現(xiàn)HI抗體也為陽性。這些結(jié)果表明:在實(shí)驗(yàn)條件下,貂源H9N2亞型流感病毒可以在水貂種群中水平傳播,并可以跨種傳播給狐貍、貉子。此外,為進(jìn)一步研究H9N2亞型流感病毒在水貂、狐貍和貉子種群中的流行情況,進(jìn)行了血清學(xué)調(diào)查。調(diào)查結(jié)果:水貂血清中抗H9N2亞型流感病毒的抗體陽性率達(dá)為31%(97/313),高于2013年的20%。狐貍血清中抗H9N2亞型流感病毒的抗體陽性率為59.4%(76/128),貉子血清中抗H9N2亞型流感病毒的抗體陽性率為41.4%(106/256)。該結(jié)果表明H9N2亞型流感病毒在水貂群中的流行越來越廣泛,并在狐貍和貉子群中流行。本研究證實(shí)了貂源H9N2亞型流感病毒可以在水貂種群中水平傳播,并可以跨種傳播給狐貍、貉子。而且在毛皮動(dòng)物種群中廣泛流行。此外,貂源H9N2亞型流感病毒在水貂體內(nèi)持續(xù)進(jìn)化。這可能會(huì)對(duì)毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)造成危害,而且毛皮動(dòng)物也可能作為H9N2流感病毒的中間宿主而感染其他動(dòng)物,甚至可能感染人類。本研究對(duì)做好H9N2流感病毒的防制和監(jiān)測(cè)工作提供了重要的分子流行病學(xué)資料,因而具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。
[Abstract]:H9N2 subtype influenza virus can cause the human and animal low pathogenic respiratory diseases. The mink susceptible, because the characteristics of China's mink breeding fox, raccoon and mixed feeding, thereby increasing the fox, raccoon infected with H9N2 subtype influenza virus epidemic and opportunities. The evolution of the flu virus group of mink H9N2 flow, and whether the fox and raccoon population caused by infection of.2015 years from the middle part of Shandong province to collect 105 copies of 32 copies of mink, Fox and raccoon 20 lung tissue, lung tissue and isolated from mink in six strains of influenza virus subtype H9N2, A/Mink/Shandong/Z1/2015, A/Mink/Shandong/Z2/2015, A/Mink/Shandong/Z3/2015, A/Mink/Shandong/Z4/2015 A/Mink/Shandong/Z5/2015 and A/Mink/Shandong/Z6/2015., and the fox and raccoon in lung tissue was not isolated influenza virus. Six strains of isolated strains Nucleotide sequence and nucleotide sequences of GenBank included in the H9N2 subtype of influenza virus comparison showed that the six strains of isolated strains of eight genes homologous to 99.2%~100%; PB1, PA, HA, NP, NA, M and NS gene and A/mink/Shangdong/F10/2013 (H9N2) (Mk/SD/ F10/13) of the corresponding homologous strains the highest in more than 97%, while the PB2 gene and A/environment/Suzhou/14/2013 (H7N9) the highest homology to 99.4%. for further reveal the molecular characteristics of six strains of isolated strains, the amino acid sequences by DNASTAR software are derived the gene fragments, and the results were compared with reference strains. The results show that the six strains of isolates eight amino acid sequence homology was 98.2-100%. of six strains of isolated strains of HA protein of 226th amino acids were leucine (Leu), with SA alpha -2,6-Gal receptor binding characteristics of the amino acid sequence of the cleavage site; As RSSR, showed that six strains of the virus are low pathogenic strain; HA protein has 8 potential glycosylation sites, compared with the reference strains, 218 amino acids at the loss of a potential glycosylation sites, a potential glycosylation site in the amino acid 313 increase; six strains of isolates of PB2 protein in 627 amino acid sequence encoding glutamic acid Glu, 701st bit Asn 627th bit encoding asparagine, in line with the characteristics of avian influenza, but 701st of the 627th Asn asparagine can compensate the effect produced by mutation, enhance its ability in the complex system of mammalian origin. In order to further analysis of six strains of gene fragment isolated strains, with GeneBank sequence in the H9N2 subtype of influenza virus as a reference sequence for the phylogenetic analysis of phylogenetic tree analysis of.HA gene of six strains of isolates belonging to the Eurasian Y280 sub branch of the Department of, NA gene and PB1 gene of PA, internal, NP, tree NS system analysis showed that six strains of isolates belonging to the Eurasian Shanghai/F/98 sub branch of the Department, the system of M gene phylogenetic tree showed that six strains of isolates belonging to Hong Kong/G1/97, the Eurasian II sub line branches. And more than 7 pieces with Mk/SD/F10/13 strains had the closest relationship; phylogenetic tree analysis of PB2 gene showed that six strains of isolates belonging to the Korea/38349-p96323/96 sub line I Eurasian branch, and A/environment/Suzhou/14/2013 (H7N9) are closely related. For the study of mink H9N2 subtypes of influenza viruses can spread in the mink population level, whether can cross species spread to the fox, raccoon. This study used Mk/SD/F10/13 strains preserved in the laboratory of animal experiment. The results of animal experiment, found in the first 4-8 days after inoculation, the spirit of Shen Yu sentinel mink, reduced appetite Back flow clear nose, tears, slight cough and other symptoms, finally challenged mink and mink are sentinel health recovery, caused no death. Detection of sentinel mink can detox detoxification to the outside through the nasal cavity in the first 4~6 days. Autopsy found lung hemorrhage, tracheal bleeding and pathological changes of spleen hemorrhage the pathological observation found. Pulmonary manifestations of hemorrhagic interstitial pneumonia, histopathology, and alveolar wall congestion thickening. Blood samples collected fourteenth days of mink separation of serum HI antibody detection of HI antibody was positive. The fox and raccoon does not show clinical symptoms, also not detected detoxification, but fourteenth days to collect the fox and raccoon serum detection HI antibody was positive. At the same time tested pathogenic Fox and raccoon, Fox and raccoon attack showed no clinical symptoms, no detectable detoxification, and fourteenth days to collect the fox and raccoon dog Sub serum detection HI antibody was also positive. These results show that under the experimental conditions, the source of mink H9N2 subtype influenza virus can spread in mink population level, and can spread to the fox, raccoon. In addition, for the further study of H9N2 subtype influenza virus in mink, Fox and raccoon population prevalence the serological investigation has been conducted. Results: the positive rate of antibody of mink serum anti influenza virus subtype H9N2 was 31% (97/313), the antibody positive rate higher than the 2013 fox 20%. serum anti influenza virus subtype H9N2 was 59.4% (76/ 128), the antibody positive rate of serum anti H9N2 raccoon influenza virus type 41.4% (106/256). The results show that the H9N2 subtype of influenza virus in mink in popular more and more widely, and popular in the fox and raccoon populations. This study confirmed the mink H9N2 influenza virus from mink populations in water Flat transmission, and can spread to the fox, and raccoon. Popular in fur animal populations. In addition, the source of mink H9N2 subtype influenza virus continued evolution in mink body. This may cause harm to the fur animal breeding, animal fur and may also serve as intermediate hosts of H9N2 influenza virus infection and other animal. May even infect humans. This study for the H9N2 influenza virus prevention and monitoring work provides important molecular epidemiological data, so it has important significance in public health.

【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.65

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;流感病毒可能致命的秘密被發(fā)現(xiàn)[J];中國(guó)家禽;2001年22期

2 王均忠 ,Simon M.Shane;流感病毒的跨種感染[J];國(guó)外畜牧學(xué)(豬與禽);2002年05期

3 劉明,張?jiān)?楊濤;A型流感病毒反義遺傳學(xué)研究進(jìn)展[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2004年01期

4 羅天海;Ian Brown;;豬正面臨著禽型流感病毒的威脅[J];國(guó)外畜牧學(xué)(豬與禽);2006年06期

5 李世宏;梁紀(jì)蘭;楊銳樂;嚴(yán)作廷;王東升;蘭菁;;中藥抗流感病毒研究進(jìn)展[J];中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志;2007年05期

6 ;甲型H1N1流感病毒[J];飼料工業(yè);2009年10期

7 ;A型流感病毒復(fù)制機(jī)理研究獲進(jìn)展[J];中國(guó)家禽;2013年08期

8 魏浩澈;季宏偉;徐志文;周遠(yuǎn)成;陳蕾;吳云飛;;A型流感病毒在豬群中的流行情況[J];養(yǎng)豬;2013年03期

9 苗鳳源;;經(jīng)鼻接種A型流感病毒對(duì)鼷鼠嗅粘膜的影響[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).耳鼻咽喉科學(xué)分冊(cè);1987年02期

10 ;高溫、紫外線等是流感病毒的克星[J];農(nóng)村科學(xué)實(shí)驗(yàn);2005年12期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 伍銳;段正贏;劉澤文;楊克禮;梁望旺;鄧均華;周丹娜;田永祥;;A型流感病毒為載體的開發(fā)及其應(yīng)用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國(guó)免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

2 杜雄偉;李葉;楊卓;;A型流感病毒對(duì)小鼠致病機(jī)制的研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2009年

3 曲敬來;;流感病毒A上呼吸道感染快速診治的研究[A];中醫(yī)藥防治感染病之研究（九）——第九次全國(guó)中醫(yī)藥防治感染病學(xué)術(shù)交流大會(huì)論文集[C];2009年

4 高福;;流感病毒侵入與多肽抑制藥物[A];第二屆傳染病診治高峰論壇暨2009年浙江省感染病、肝病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

5 楊琴;張興曉;楊靈芝;郭慶棟;;流感病毒在三種細(xì)胞中的生長(zhǎng)對(duì)比[A];山東畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)專業(yè)委員會(huì)第一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

6 袁達(dá)康;黃勇;楊華可;黎景全;李艷芬;;東莞市2004-2008年流感病毒監(jiān)測(cè)結(jié)果及分析[A];新發(fā)傳染病防治學(xué)習(xí)研討會(huì)論文集[C];2008年

7 高玉偉;夏咸柱;扈榮良;王立剛;劉丹;鄒嘯環(huán);黃耕;賀文琦;;虎流感病毒的分離、鑒定、基因分析與抗體調(diào)查(摘要)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下）[C];2003年

8 李葉;廖明;辛朝安;;A型流感病毒對(duì)小鼠致病機(jī)制的研究進(jìn)展[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

9 曲敬來;常曉;;流感病毒A上呼吸道感染快速診治的研究[A];2005年全國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議學(xué)術(shù)論文集[C];2005年

10 祝艷華;王雯慧;陳懷濤;;中藥抗流感病毒作用的研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十五次、中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病生專業(yè)委員會(huì)第十四次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2007年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 江卉邋通訊員 胡運(yùn)海 實(shí)習(xí)生 汪紅燕;今冬江城流感病毒有加劇趨勢(shì)[N];湖北日?qǐng)?bào);2008年

2 ;新流感病毒可能已在豬身上悄悄傳播多年[N];新華每日電訊;2009年

3 記者 葛進(jìn)　陳超;日拍到新型流感病毒真實(shí)形態(tài)[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

4 特約記者 吳志軍　記者 蔡鵬程;研制成功迅速殺滅流感病毒新產(chǎn)品[N];解放軍報(bào);2009年

5 河北省邢臺(tái)市第一醫(yī)院副主任醫(yī)師 黃根柱;流感病毒有四怕[N];健康報(bào);2009年

6 本報(bào)記者 馬佳;陳繼明：為流感病毒繪制族譜[N];北京科技報(bào);2009年

7 江南雪舞;禽流感病毒與流感病毒有何關(guān)系？[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2005年

8 主任醫(yī)師 冀衡;流感病毒[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2003年

9 楊孝文　編譯;揭開20世紀(jì)初西班牙大流感致命秘密[N];北京科技報(bào);2007年

10 本報(bào)駐美國(guó)記者 毛黎;“狼”依然在家門口徘徊[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張文婧;抗A型流感病毒和腸道病毒71型天然化合物的篩選及其抗病毒分子機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 吳玲;A型流感病毒四種亞型同步檢測(cè)分型方法建立及兩株H5N1亞型禽流感病毒地方株的特性研究[D];武漢大學(xué);2013年

3 范文輝;犬Ⅲ型干擾素的功能特點(diǎn)及B型流感病毒NEP蛋白出核功能研究[D];廣西大學(xué);2015年

4 申新田;寡聚噻吩及皂苷類衍生物抑制流感病毒進(jìn)入靶細(xì)胞的作用及機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

5 趙化陽;小鼠動(dòng)物模型在哮喘氣道高反應(yīng)治療和抗流感藥物篩選中的應(yīng)用研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 萬志敏;抗體壓下H9N2流感病毒囊膜糖蛋白關(guān)鍵抗原表位氨基酸的變異分析[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

7 高偉;新型甲型H1N1流感病毒致ALI發(fā)病機(jī)制研究—炎癥、細(xì)胞凋亡以及免疫調(diào)控[D];南京大學(xué);2012年

8 陽元娥;抗甲型流感病毒卵黃抗體的制備、活性評(píng)價(jià)及其應(yīng)用研究[D];廣東工業(yè)大學(xué);2016年

9 江靜雯;B型流感病毒誘發(fā)天然免疫應(yīng)答及M1核質(zhì)穿梭對(duì)于病毒復(fù)制的調(diào)控研究[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2016年

10 孔暉暉;H7N9亞型流感病毒遺傳演化分析及H7N9弱毒疫苗在哺乳動(dòng)物模型上的免疫效力評(píng)價(jià)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 孟慧芝;A型流感病毒條形碼檢測(cè)技術(shù)研究[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 胡云光;人季節(jié)性流感病毒H3N2小鼠適應(yīng)株的建立及分子機(jī)制的初步探究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

3 劉兵;SPF雞與BALB/c小鼠體內(nèi)流感病毒唾液酸受體組織分布的差異性分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

4 戴玉柱;五重?zé)晒舛縍T-PCR檢測(cè)甲型流感病毒方法的建立和應(yīng)用及2010～2013年杭州地區(qū)人H3N2病毒流行病學(xué)分析[D];浙江大學(xué);2015年

5 孫偉洋;B型流感病毒感染性克隆的構(gòu)建及其免疫原性研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

6 王靜;HD-11細(xì)胞感染H9N2流感病毒后先天性免疫相關(guān)基因mRNA表達(dá)變化的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

7 李朋;貂源H9N2亞型流感病毒的分子生物學(xué)特性及其致病性研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 王倩;苦參主要成分的分離提取及其抗犬流感病毒的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 萬勇;甲型流感病毒不同亞型混合感染分析及N9亞型流感病毒NA基因進(jìn)化分析[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

10 王攀;MicroRNA在甲型H1N1流感病毒介導(dǎo)肺部炎性損傷調(diào)控作用的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：1644358