發(fā)布時(shí)間：2018-03-21 06:22

  本文選題：差異表達(dá)蛋白　切入點(diǎn)：下丘腦　出處：《沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：近幾年來(lái),我國(guó)養(yǎng)鵝業(yè)逐漸向規(guī)�；�、集約化、現(xiàn)代化方向發(fā)展,其屠宰量、飼養(yǎng)量均處于世界首位。但種鵝繁殖效率低,整體生產(chǎn)性能低,制約著我國(guó)養(yǎng)鵝業(yè)的發(fā)展,然而,豁眼鵝作為我國(guó)優(yōu)良的高產(chǎn)地方品種,其產(chǎn)蛋性能居世界鵝種前列,有"鵝中國(guó)寶"之美譽(yù),是用于科研研究和種鵝培育的理想鵝種。遼寧豁眼鵝,具有較高的產(chǎn)蛋量,較強(qiáng)的繁殖性能、抗粗飼性、抗寒性等良好性狀。近年來(lái),隨著引進(jìn)種鵝數(shù)量的增加,以及與其他種鵝雜交范圍的擴(kuò)大化,導(dǎo)致豁眼鵝自身優(yōu)良種質(zhì)特性發(fā)生蛻化,特別在高產(chǎn)蛋、高繁殖方面,導(dǎo)致其飼養(yǎng)經(jīng)濟(jì)效益的下降。因此,利用分子生物學(xué)方法篩選以及鑒定其產(chǎn)蛋性能相關(guān)的功能蛋白,進(jìn)而挖掘調(diào)控產(chǎn)蛋性能的主效基因,進(jìn)而通過(guò)分子育種以提高其產(chǎn)蛋性能顯得非常重要。本研究以遼寧豁眼鵝為研究對(duì)象,首先通過(guò)同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量(Isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技術(shù)篩選產(chǎn)蛋前和產(chǎn)蛋期下丘腦組織差異表達(dá)蛋白,應(yīng)用生物信息學(xué)工具對(duì)表達(dá)差異極顯著或顯著的蛋白進(jìn)行功能分析,然后通過(guò)Western Blotting技術(shù)檢測(cè)產(chǎn)蛋前和產(chǎn)蛋期兩個(gè)階段豁眼鵝下丘腦組織中Complexin 1和EAAT2蛋白的表達(dá)量變化情況,接著構(gòu)建了Complexin 1和EAAT2的原核表達(dá)載體,進(jìn)行原核表達(dá)水平的檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果如下:(1)篩選出34個(gè)差異顯著或極顯著的差異表達(dá)蛋白,其中18個(gè)上調(diào)表達(dá),16個(gè)下調(diào)表達(dá),這些蛋白主要影響促性腺激素釋放激素、類固醇類激素、孕激素的合成等生理過(guò)程。(2)在豁眼鵝下丘腦組織檢測(cè)到Complexin 1和EAAT2蛋白,其蛋白分子量分別為15kDa和60kDa。產(chǎn)蛋前到產(chǎn)蛋期,Complexin 1和EAAT2的蛋白表達(dá)量呈上升趨勢(shì),并且產(chǎn)蛋期的表達(dá)量極顯著高于產(chǎn)蛋前。(3)成功獲得豁眼鵝Complexin 1和EAAT2兩個(gè)基因的ORF編碼區(qū),片段大小分別為399 bp和500 bp。(4)成功構(gòu)建出克隆載體pMD-18T-Complexin 1和pMD-18T-EAAT2,以及蛋白原核表達(dá)載體pET28a-Complexin 1和pET28a-EAAT2,并且成功在大腸桿菌中表達(dá)出Complexin 1蛋白和EAAT2蛋白。由本研究可知,經(jīng)iTRAQ技術(shù)和Western Blotting技術(shù)等成功鑒定出差異蛋白Complexin 1和EAAT2,其蛋白表達(dá)水平與產(chǎn)蛋性能有一定相關(guān)性,其中產(chǎn)蛋期Complexin 1和EAAT2兩種蛋白上調(diào),此結(jié)果將為進(jìn)一步探討豁眼鵝的分子選育工作奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S835
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本文編號(hào)：1642634