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體外誘導(dǎo)大熊貓大腸埃希菌對普多沙星的耐藥性及其機(jī)制研究

發(fā)布時(shí)間:2018-03-17 04:33

  本文選題:大熊貓 切入點(diǎn):大腸埃希菌 出處:《西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)》2017年03期  論文類型:期刊論文


【摘要】:【目的】探究大熊貓?jiān)创竽c埃希菌對新型動(dòng)物專用氟喹諾酮類藥物普多沙星的耐藥機(jī)制。【方法】以從大熊貓?bào)w液分離的對氟喹諾酮類藥物敏感的大腸埃希菌株為研究對象,采用環(huán)丙沙星、麻保沙星和普多沙星通過體外逐漸遞增藥物濃度的方法誘導(dǎo)其成為耐藥菌株。采用PCR擴(kuò)增和基因測序的方法,分析誘導(dǎo)耐藥菌株的靶位基因gyrA和parC耐藥決定區(qū)(QRDR)的基因突變情況。采用外排泵抑制劑苯丙氨酸-精氨酸-β-萘酰胺(PAβA)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法探討外排泵在體外耐藥中的作用。【結(jié)果】采用體外濃度遞增法可誘導(dǎo)大熊貓大腸埃希菌對3種氟喹諾酮類藥物產(chǎn)生耐藥性,其中環(huán)丙沙星最易產(chǎn)生耐藥性,其次是麻保沙星,普多沙星相對較慢。普多沙星誘導(dǎo)的耐藥菌首先在gyrA基因發(fā)生點(diǎn)突變,隨著MIC的升高,靶基因突變位點(diǎn)也逐漸增多。環(huán)丙沙星和麻保沙星誘導(dǎo)的4株耐藥菌的gyrA基因出現(xiàn)Ala 119Glu突變,而該突變在普多沙星所誘導(dǎo)的突變體中未發(fā)現(xiàn)。acrB,emrE和mdfA 3種外排泵基因在所有誘導(dǎo)的耐藥菌株中均出現(xiàn)不同程度的過量表達(dá),特別是在環(huán)丙沙星和麻保沙星誘導(dǎo)突變體中的表達(dá)明顯高于在普多沙星誘導(dǎo)突變體中的表達(dá)。3種受試外排泵基因的表達(dá)均隨MIC的升高而增加!窘Y(jié)論】普多沙星引起的大熊貓致病性大腸埃希菌多重耐藥性,主要由靶基因的點(diǎn)突變和外排泵基因的過量表達(dá)所導(dǎo)致。
[Abstract]:[objective] to investigate the mechanism of resistance of Escherichia coli to prodofloxacin, a novel animal specific fluoroquinolone drug. [methods] A strain of Escherichia coli, which was sensitive to fluoroquinolones, was isolated from the body fluid of giant panda. Ciprofloxacin, eplofloxacin and profloxacin were induced to become drug-resistant strains by increasing drug concentration in vitro. PCR amplification and gene sequencing were used. The gene mutations of target gene gyrA and parC resistance determinant region (parC) in drug-resistant strains were analyzed. The efflux pump inhibitor, phenylalanine-arginine-尾-naphthalamide PA 尾-A) and real-time fluorescence quantitative PCR were used to study the resistance of efflux pump in vitro. [results] the drug resistance of Escherichia coli to three fluoroquinolones was induced by increasing concentration in vitro. Ciprofloxacin was the most susceptible to drug resistance, followed by eplofloxacin, which was relatively slow. Profloxacin induced drug resistant bacteria first mutated in the gyrA gene, and with the increase of MIC. The mutation sites of target gene also increased gradually. The gyrA gene of 4 drug-resistant strains induced by ciprofloxacin and epofloxacin showed Ala 119Glu mutation. However, in the pudofloxacin induced mutants, three efflux pump genes, acrBnemrE and mdfA, were not found to be overexpressed to varying degrees in all induced drug-resistant strains. Especially in ciprofloxacin and epofloxacin induced mutants, the expression of 3.3-species efflux pump genes increased with the increase of MIC. [conclusion] the expression of profloxacin induced mutants was significantly higher than that of profloxacin induced mutants. [conclusion] the expression of profloxacin induced by profloxacin increased with the increase of MIC. The pathogenic Escherichia coli from the giant panda has multiple drug resistance. It is mainly caused by point mutation of target gene and overexpression of efflux gene.
【作者單位】: 西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;陜西省富平縣畜牧獸醫(yī)局;
【基金】:中央高;究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目(2452016044) 西北農(nóng)林科技大學(xué)博士科研啟動(dòng)基金項(xiàng)目(2013BSJJ012);西北農(nóng)林科技大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(2014068)
【分類號】:S852.61

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7 吳,

本文編號:1623208


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