本文選題：山羊副流感病毒型　切入點：N蛋白　出處：《畜牧獸醫(yī)學(xué)報》2017年01期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：山羊副流感病毒3型可引起山羊呼吸道疾病,與支原體、細菌等混合感染引起廣泛的發(fā)病與死亡,筆者擬通過建立基于N蛋白的間接ELISA抗體檢測方法用于該病的監(jiān)測。設(shè)計引物擴增目的基因N,克隆到質(zhì)粒pET32a(+)上,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET32a-N,并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21中,IPTG誘導(dǎo)表達重組N蛋白并鑒定。通過條件優(yōu)化建立ELISA抗體檢測方法,并檢測臨床樣品與HI試驗進行比較。本試驗成功構(gòu)建重組質(zhì)粒,誘導(dǎo)表達的蛋白質(zhì)(47ku)經(jīng)SDS-PAGE與Western blot鑒定,證明其正確表達且具有良好的抗原性與特異性。利用純化的蛋白質(zhì)作為包被抗原優(yōu)化間接ELISA反應(yīng)條件,確定其最佳抗原包被濃度為1μg·mL-1、血清稀釋度為1∶200、血清作用時間60min、酶標二抗工作濃度為1∶6 000、二抗反應(yīng)時間30min、底物顯色時間10min。通過對138份臨床血清樣品檢測發(fā)現(xiàn)其與HI試驗結(jié)果符合率達88.41%。本研究建立的間接ELISA檢測方法敏感、特異、準確,適用于臨床樣品的檢測與血清流行病學(xué)調(diào)查。
[Abstract]:Goat parainfluenza virus type 3 can cause respiratory diseases in goats, and mixed infection with mycoplasma and bacteria causes widespread morbidity and mortality. The aim of this study was to establish an indirect ELISA antibody detection method based on N protein. Primers were designed to amplify the target gene Nand cloned into plasmid pET32a (). The recombinant plasmid pET32a-Nwas constructed and transformed into E. coli BL21 to induce the expression and identification of recombinant N protein. The detection method of ELISA antibody was established by optimizing the conditions, and the clinical samples were detected and compared with HI test. The recombinant plasmid was successfully constructed in this experiment. SDS-PAGE and Western blot showed that the protein was correctly expressed and had good antigenicity and specificity. The purified protein was used as the coating antigen to optimize the indirect ELISA reaction conditions. The best antigen coating concentration was 1 渭 g 路mL -1, the dilution of serum was 1: 200, the time of action was 60 min, the working concentration of enzyme labeled second antibody was 1: 6 000, the reaction time of the second antibody was 30 min, and the color reaction time of substrate was 10 min. 138 clinical serum samples were detected and found to be with HI. The coincidence rate of the test results was 88.41. The indirect ELISA detection method established in this study was sensitive. Specific, accurate, suitable for the detection of clinical samples and seroepidemiological investigation.
【作者單位】： 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所農(nóng)業(yè)部獸用生物制品工程技術(shù)重點實驗室;南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院;
【基金】：江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金項目[CX(14)2090] “十三五”國家重點研發(fā)計劃(2016YFD0500900)
【分類號】：S852.654

【參考文獻】

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1 李文良;毛立;程素平;王秋生;黃加春;張紋紋;楊蕾蕾;江杰元;;山羊源副流感病毒3型的分離與分子鑒定[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2015年02期

【共引文獻】

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2 郝飛;李文良;毛立;楊蕾蕾;張紋紋;江杰元;;山羊副流感病毒3型人工感染山羊的致病性[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2016年12期

3 周天賜;毛立;李文良;郝飛;魏建忠;江杰元;;山羊副流感病毒3型HN蛋白單克隆抗體的制備與鑒定[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2016年04期

4 王鐘毓;李文良;郝飛;毛立;楊蕾蕾;張紋紋;江杰元;;山羊副流感病毒3型JS2013分離株對豚鼠致病性的研究[J];現(xiàn)代畜牧獸醫(yī);2015年09期

【二級參考文獻】

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1 師新川;溫永俊;王鳳雪;王煒;王建科;程世鵬;武華;;牛副流感病毒3型核衣殼蛋白基因的真核表達[J];畜牧與獸醫(yī);2012年11期

2 毛立;竇永喜;翟軍軍;王玉朝;鞏偉;才學(xué)鵬;;小反芻獸疫病毒RT-PCR檢測方法的建立[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2010年06期

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1 鄭德明,劉學(xué)明,孫榮武;抗Sm抗體的檢測及其診斷價值[J];白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1989年01期

2 王立蘭;舒素蕓;;進口丙種球蛋白中麻疹等抗體檢測[J];生物制品學(xué)雜志;1989年02期

3 鄭優(yōu)榮,侯華嘉,何珠,陳沖;廣州地區(qū)1995～1997年HIV抗體檢測情況分析[J];暨南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);1998年06期

4 謝飛,程烽,朱忠勇;抗β_2糖蛋白1抗體研究進展[J];中華風(fēng)濕病學(xué)雜志;2003年02期

5 ;姜老師信箱[J];中國生物工程雜志;2010年12期

6 侯爵;孫靜;徐智勇;范文玲;張怡軒;劉勇;郝彥玲;;HIV-1 CN54 Pol P51抗原高效表達、純化、復(fù)性及在抗體檢測中的應(yīng)用[J];生物工程學(xué)報;2010年02期

7 吳惠英;賀爭嗚;衛(wèi)禮;王秀清;雷培琪;;對淋巴球脈絡(luò)叢腦膜炎病毒抗體檢測方法的研究[J];北京實驗動物科學(xué);1989年02期

8 王靜;李�；�;栗克喜;;新生牛血清中乙腦抗體的檢測及其方法的建立[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進展;2006年01期

9 李麗;劉運龍;陳知航;張玉民;劉學(xué)龍;程遠國;;重組人血清白蛋白抗體檢測方法的建立及確證[J];生物技術(shù)通訊;2013年03期

10 劉愛京,呂占軍,宋淑霞,侯潔,王曉梅;21種抗體對胚胎不同器官蛋白質(zhì)表達的研究[J];河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2001年03期

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1 全慧芬;;愛滋病流行狀況及孕產(chǎn)婦免費病毒抗體檢測宣教[A];中國水利電力醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)學(xué)會臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會外科專業(yè)、護理專業(yè)2007年會論文匯編[C];2007年

2 虞偉;張瑾;顧晨曦;賈麗;李曉軍;武建國;;三種不同固相化方法用于抗CCP抗體的測定研究與結(jié)果評價[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2008年

3 張申英;張欣欣;劉晶;盧敏;汪垣;;重組丙型肝炎病毒包膜蛋白2抗體檢測及其臨床意義[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國感染病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

4 孫建新;吉旭陽;畢曉郁;;丙肝病毒單片段抗體檢測分析[A];第十屆全軍檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

5 劉帥;王貝貝;崔麗麗;靳興軍;張躍;汪明;;幾種弓形蟲IgG抗體檢測方法的比較分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第六次代表大會暨第十一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

6 張方;王嘉祺;馬慧;;老年住院患者呼吸道常見病毒IgM抗體檢測[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國呼吸病學(xué)術(shù)會議暨學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2006年

7 許慧;崔京濤;郝英英;倪安平;;巨細胞病毒IgG抗體親合力分析與IgM抗體檢測的評價[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2008年

8 吳敏慧;劉毅;劉洪莉;;血小板交叉配合及抗體檢測方法的建立及其應(yīng)用[A];中國輸血協(xié)會第四屆輸血大會論文集[C];2006年

9 許慧;崔京濤;郝英英;倪安平;;巨細胞病毒IgG抗體親合力分析與IgM抗體檢測的評價[A];第五次全國中青年檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

10 鄭優(yōu)榮;李少華;侯華嘉;黃小丹;陳沖;;廣州地區(qū)1995～1999年獻血人群HIV抗體檢測情況分析[A];中國輸血1999年年會暨紀念A(yù)BO血型發(fā)現(xiàn)100周年學(xué)術(shù)交流論文專輯[C];1999年

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1 通訊員 劉弈　鄧順梅;建始縣疫控中心抗體檢測技術(shù)全面更新[N];恩施日報;2009年

2 陳建忠;HIV抗體檢測女性注意事項[N];保健時報;2004年

3 記者 戎明昌邋林亞茗 通訊員 郭云云;將HIV抗體檢測納入醫(yī)保[N];南方日報;2008年

4 ;動物診斷用狂犬病抗體檢測試劑盒問世[N];今日信息報;2003年

5 浦 汶;變實驗鼠為高效“抗體工廠”[N];大眾科技報;2003年

6 ;最新調(diào)查顯示四成兒童體內(nèi)有SARS抗體[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2003年

7 本報記者 聶翠蓉;小小納米抗體潛力大[N];科技日報;2005年

8 張東;“檢得出，，檢得了，檢得好”[N];中國國門時報;2005年

9 通訊員燕文華 張金生;沙灣采用抗體檢測牲畜防疫[N];伊犁日報(漢);2009年

10 記者馮瑾;提倡新人接受病毒抗體檢測[N];新疆日報(漢);2009年

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1 陳長春;抗BONTS抗體的制備、篩選及抗體間協(xié)同保護機制的研究[D];上海交通大學(xué);2012年

2 付慶鋒;血清P53抗體與BRAF基因突變檢測在PTC診療中的決策作用[D];吉林大學(xué);2016年

3 潘鵬濤;基于p53抗體的腫瘤早期篩查及腫瘤檢測研究[D];東北師范大學(xué);2014年

4 高寶山;腎移植受者血清多反應(yīng)性抗體與HLA抗體的相關(guān)性及對移植腎長期存活的影響[D];吉林大學(xué);2015年

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1 汪嘉佳;流式細胞術(shù)檢測血小板脫糖方法建立及意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

2 毛倩倩;一種犬細小病毒IgG抗體檢測試劑盒的研制[D];南陽師范學(xué)院;2015年

3 時曉麗;豬流行性腹瀉病毒N蛋白單克隆抗體的研制與抗原捕獲ELISA抗體檢測方法的建立[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 葉麗娜;北京地區(qū)牛傳染性鼻氣管炎血清學(xué)調(diào)查及其抗體檢測間接ELISA方法的建立[D];江西農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 劉學(xué)博;山東省不同地區(qū)不同人群三種流感病毒血凝素抗體水平調(diào)查[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 趙永祥;四川部分地區(qū)2013-2014年豬繁殖與呼吸綜合征流行病學(xué)調(diào)查[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 王芳蕊;天津市高致病性豬繁殖與呼吸綜合征流行病學(xué)調(diào)查及活疫苗應(yīng)用試驗[D];吉林大學(xué);2016年

8 喬一丹;WTH3多克隆抗體的制備及其鑒定[D];吉林大學(xué);2016年

9 耿曉蕊;河北省某規(guī)模化豬場CSF、PRRS和PR抗體的檢測與分析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

10 李春燕;豬重要病毒檢測方法的建立及其在2015年陜西省豬群中的感染及抗體檢測[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

本文編號：1601984