本文選題：育肥豬　切入點：一水肌酸　出處：《南京農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：宰后肌肉品質(zhì)與肌肉中能量代謝狀況緊密相關(guān)。研究證實育肥豬宰前日糧中添加一水肌酸(CMH)可以提高肌肉中磷酸肌酸含量,延緩宰后肌肉糖酵解的發(fā)生,進而影響肉品質(zhì)。胍基乙酸(GAA)是機體內(nèi)肌酸的前體物質(zhì),在畜禽體內(nèi)可以轉(zhuǎn)化為肌酸。本研究通過在育肥豬宰前日糧中添加CMH和GAA,探討其對育肥豬生長性能、屠宰性能、肉品質(zhì)、肌酸合成代謝和機體能量代謝的影響,并通過蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)分析育肥豬肌肉和血漿中的差異蛋白質(zhì)圖譜和代謝產(chǎn)物圖譜,探討CMH和GAA影響育肥豬肉質(zhì)的作用機制。1初步研究日糧中添加CMH對育肥豬屠宰性能、肉品質(zhì)和能量代謝的影響。選擇48頭健康的體重相近(90kg左右)杜長大閹公豬,隨機分為兩組,每組3個重復(fù),每個重復(fù)8頭豬。其中對照組飼喂基礎(chǔ)日糧,試驗組飼喂基礎(chǔ)日糧+0.8%CMH,飼養(yǎng)期14d。飼養(yǎng)試驗結(jié)束后,每個重復(fù)抽取體重接近于平均體重的2頭豬(6頭/處理),稱重后運輸至屠宰車間按照屠宰流程進行屠宰采樣.結(jié)果顯示:與對照組相比,添加CMH對育肥豬眼肌面積、背膘厚和瘦肉率均無顯著影響(P0.05)。日糧中添加CMH可以顯著提高背最長肌pH_(45min)(P0.05),降低滴水損失和蒸煮損失(P0.05),對L*值、a*值、b*值、剪切力及背最長肌中水分、粗脂肪、粗蛋白和灰分等常規(guī)營養(yǎng)成分含量均無顯著影響(P0.05)。盡管CMH對背最長肌的內(nèi)聚性和彈性沒有顯著影響(P0.05),但使彈性、膠黏性和咀嚼性分別增加了21.42%、26.32%和10.23%(P0.05)。添加CMH可顯著提高宰后45min的背最長肌中肌酸、ATP和ADP含量(P0.05),對磷酸肌酸和AMP含量無顯著影響(P0.05),此外添加CMH可以顯著降低乳酸含量(P0.05),降低乳酸脫氫酶(LDH)和丙酮酸激酶(PK)活性(P0.05),升高肌酸激酶(CK)活性(P0.05),對糖原含量、糖酵解潛力(GP)和己糖激酶(HK)活性影響不顯著(P0.05)。添加CMH對宰后24h的背最長肌中肌酸、磷酸肌酸、ATP、ADP和AMP含量均無顯著影響(P0.05),對宰后24h的背最長肌中乳酸含量、糖原含量、GP、LDH活性、HK活性、PK活性和CK活性也均無顯著影響(P0.05)。2研究日糧中添加CMH和GAA對育肥豬肉品質(zhì)、肌酸代謝和能量代謝的影響.選擇180頭健康的體重相近(100kg左右)杜長大閹公豬,隨機分為3組,分別為:對照組,飼喂基礎(chǔ)日糧;CMH組,飼喂基礎(chǔ)日糧+0.8%CMH;GAA組,基礎(chǔ)日糧+0.1%GAA。每組3個重復(fù),每個重復(fù)20頭豬,飼養(yǎng)期15d。飼養(yǎng)試驗結(jié)束后,每個重復(fù)抽取體重接近于平均體重的3頭豬(9頭/處理),稱重后運輸至屠宰車間按照屠宰流程進行屠宰采樣。結(jié)果顯示:(1)與對照組相比,日糧中添加GAA可以顯著提高育肥豬的平均日采食量(ADFI)和平均日增重(ADG)(P0.05),日糧中添加CMH也有提高育肥豬ADFI和ADG的趨勢(P0.05),添加CMH和GAA對育肥豬料重比無顯著影響(P0.05)。日糧中補充CMH和GAA分別有降低育肥豬背膘厚,增加其眼肌面積的趨勢(P0.05),對育肥豬屠宰率和瘦肉率均無顯著影響(P0.05)。與對照組相比,日糧中添加CMH和GAA可以顯著提高育肥豬背最長肌的pH_(45min)(P0.05),降低其滴水損失和剪切力(P0.05),對pH24h、L*值、a*值、b*值和蒸煮損失均無顯著影響(P0.05)。對半腱肌而言,添加CMH和GAA顯著提高其pH_(45min)(P0.05),并使滴水損失分別降低36.46%(P0.05)和22.92%(P0.05),而對pH24h、L*值、a*值、b*值、蒸煮損失和剪切力均無顯著影響(P0.05)。日糧中添加CMH和GAA對育肥豬背最長肌和半腱肌中水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分等常規(guī)營養(yǎng)成分含量,內(nèi)聚性、彈性和咀嚼性均無顯著影響(P0.05),但有降低背最長肌硬度和膠黏性的趨勢(P0.05)。對半腱肌而言,日糧中添加CMH和GAA有降低其硬度、提高其彈性和咀嚼性的趨勢(P0.05),但對其內(nèi)聚性和膠黏性均無顯著影響(P0.05)。添加CMH和GAA對肌肉中T22弛豫時間無顯著影響(P0.05)。(2)日糧中補充CMH可以顯著提高背最長肌中肌酸和磷酸肌酸含量,及半腱肌中磷酸肌酸含量(P0.05),對肝臟和腎臟中肌酸和磷酸肌酸含量無顯著影響(P0.05)。補充CMH還可以顯著提高背最長肌中CK活性(P0.05)。日糧中補充GAA可以顯著提高背最長肌中肌酸和磷酸肌酸含量,半腱肌中磷酸肌酸含量和肝臟中肌酸含量(P0.05),對腎臟中肌酸和磷酸肌酸含量無顯著影響(P0.05);對背最長肌中CK活性有提高趨勢(P0.05,對半腱肌中CK活性影響不顯著(P0.05)。日糧中添加CMH和GAA對背最長肌、半腱肌和肝臟中L-精氨酸:甘氨酸瞇基轉(zhuǎn)移酶(AGAT)表達無顯著影響(P0.05),可以顯著降低腎臟中AGAT的表達(P0.05)。補充CMH可以顯著升高半腱肌、肝臟和腎臟中S-腺苷蛋氨酸:胍基乙酸甲基轉(zhuǎn)移酶(GAMT)的表達(P0.05),補充GAA可以顯著升高肝臟中的GAMT表達(P0.05),對背最長肌和腎臟中GAMT的表達都有提高趨勢(P0.05)。補充CMH可以顯著升高背最長肌、肝臟和腎臟中肌酸轉(zhuǎn)運蛋白(CreaT)表達(P0.05),補充GAA可以顯著升高背最長肌中CreaT的表達(P0.05),對其它組織中CreaT的表達也都有提高趨勢(P0.05)。(3)日糧中添加CMH和GAA均可以顯著增加育肥豬背最長肌和半腱肌中ATP含量(P0.05),但對ADP和AMP含量無顯著影響(P0.05)。日糧中添加CMH有降低背最長肌中乳酸含量趨勢(P0.05),可以顯著降低LDH活性(P0.05),對HK活性也有降低趨勢(P0.05),對其糖原含量、GP和PK活性均無顯著影響(P0.05);并可以顯著提高半腱肌中糖原含量(P0.05),有降低乳酸含量的趨勢(P0.05),對GP、LDH活性、HK活性和PK活性均無顯著影響(P0.05)。日糧中添加GAA可以顯著降低育肥豬背最長肌中乳酸含量(P0.05),降低其HK活性(P0.05),對LDH活性也有降低趨勢(P0.05);并可顯著提高半腱肌中糖原含量(P0.05),降低乳酸含量(P0.05)。日糧中添加CMH可以顯著提高背最長肌中AMPKα2和半腱肌中GYS的表達(P0.05),有提高背最長肌中GLUT4和GYS以及半腱肌中AMPKα2和GLUT4的表達的趨勢(P0.05)。補充GAA可顯著增加背最長肌中AMPKα2的表達(P0.05),有提高背最長肌中GLUT4和GYS以及半腱肌中AMPKα2、GLUT4和GYS表達的趨勢(P0.05)。3研究日糧中添加CMH和GAA對育肥豬背最長肌中蛋白表達譜的影響。試驗設(shè)計同試驗二,將背最長肌中蛋白質(zhì)提取液經(jīng)過雙向凝膠電泳(2-DE)和質(zhì)譜后成功鑒定出27種差異蛋白。其中與對照組相比,添加CMH組中有17種蛋白表達上調(diào);添加GAA組中有11種蛋白表達上調(diào),7種蛋白表達下調(diào)。通過GO顯著性分析確定,CMH組的差異蛋白主要參與肌肉中肌絲的滑動、肌肉的收縮、對過氧化氫刺激的應(yīng)答、ATP酶活性的調(diào)節(jié)、肌肉肌節(jié)結(jié)構(gòu)的形成、細(xì)胞成分的調(diào)控、過氧化氫的分解代謝和糖酵解等生物過程;主要參與胞漿、外胞體、肌原纖維、細(xì)胞骨架、細(xì)肌絲(原肌球蛋白)、肌節(jié)、Z-線、線粒體基質(zhì)和粗肌絲(肌球蛋白)等細(xì)胞組分;主要參與同一蛋白的聯(lián)結(jié)、肌動蛋白的聯(lián)結(jié)、微絲活動的活性、原肌球蛋白的聯(lián)結(jié)、過氧化物酶的活性、肌肉的結(jié)構(gòu)組成、羥基氫過氧化物還原酶的活性和蛋白激酶C的聯(lián)結(jié)等分子功能;主要與糖酵解/糖異生途徑、肌纖維的緊密連接、HIF信號通路和甲狀腺激素信號通路等通路相關(guān)。GAA組的差異蛋白主要參與肌肉中肌絲的滑動、細(xì)胞成分的調(diào)控、糖酵解、肌肉的收縮、肌肉肌節(jié)結(jié)構(gòu)的形成、嘌呤核苷酸分解代謝、白介素1信號通路和糖異生等生物過程;主要參與細(xì)胞骨架、外胞體、細(xì)肌絲(原肌球蛋白)、胞漿、絲狀肌動蛋白、細(xì)胞外結(jié)構(gòu)、丙酮酸脫氫酶復(fù)合物和Z-線等細(xì)胞組分;主要參與肌肉的結(jié)構(gòu)組成、蛋白的聯(lián)結(jié)、蛋白激酶C的活性、3-羥基異丁酸脫氫酶活性、細(xì)胞支架蛋白的聯(lián)結(jié)、FAZT蛋白的聯(lián)結(jié)、肌鈣蛋白C的聯(lián)結(jié)、丙酮酸脫氫酶的活性和蛋白激酶C抑制劑的活性等分子功能;主要與糖酵解/糖異生途徑、HIF-1信號通路、嘌呤代謝、磷酸戊糖途徑和三羧酸循環(huán)等通路相關(guān)。4使用代謝組學(xué)方法研究日糧中添加CMH和GAA對育肥豬代謝的影響。試驗設(shè)計同試驗二,使用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)對育肥豬血漿中代謝物質(zhì)進行分離和鑒定。試驗結(jié)果顯示:日糧中補充CMH可以改變育肥豬血漿中21種代謝物的含量,其中有17種比對照組中含量低,主要包括支鏈氨基酸、生糖氨基酸、脂肪酸、乳酸、�；撬岬�;4種代謝物比對照組中含量高,主要是葡萄糖、乳糖等糖類以及甘氨酸和肌酸酐。這些代謝產(chǎn)物主要與蛋白質(zhì)合成代謝、半乳糖代謝、支鏈氨基酸代謝、氮循環(huán)、�；撬岽x、脂代謝、谷胱甘肽代謝和膽汁酸合成等相關(guān)。日糧中補充GAA可以改變育肥豬血漿中24種代謝物的含量,其中有19種比對照組中含量高,主要包括支鏈氨基酸、生糖氨基酸、脂肪酸、乳酸、�；撬岬�;有5種代謝物比對照組中含量高,主要是葡萄糖、松二糖、琥珀酸、甘氨酸和肌酸酐。這些代謝產(chǎn)物主要與蛋白質(zhì)合成代謝、氮循環(huán)和尿素循環(huán)、脂代謝、支鏈氨基酸代謝、谷胱甘肽代謝、精氨酸和脯氨酸代謝以及�；撬岽x等相關(guān)。綜上所述,得出如下結(jié)論:(1)日糧中添加CMH和GAA可提高育肥豬生長性能,改善豬肉品質(zhì),其主要通過促進組織對肌酸的吸收和轉(zhuǎn)運,抑制GAA和肌酸在體內(nèi)的合成,促進肌酸和磷酸肌酸在機體內(nèi)的沉積,并激活A(yù)MPK信號通路,從而提高肌肉中ATP儲備,通過降低糖酵解酶活性延緩宰后肌肉的糖酵解,降低肌肉中乳酸的積累來實現(xiàn)的。(2)通過蛋白質(zhì)組技術(shù)研究了CMH和GAA對育肥豬背最長肌差異蛋白表達譜的影響,通過差異性篩選共成功鑒別差異蛋白27個,其中CMH影響的差異蛋白有17個,GAA影響的差異蛋白有18個。通過GO分析和KEGG分析發(fā)現(xiàn),CMH和GAA對育肥豬背最長肌的影響原理比較類似,都可以通過影響肌纖維的結(jié)構(gòu)蛋白的表達、調(diào)控肌肉能量代謝和抗氧化狀態(tài)來影響豬肉品質(zhì)。但是兩種添加劑的作用機制也略有不同,其中CMH可以通過調(diào)控肌纖維的緊密連接和甲狀腺激素信號通路來影響骨骼肌的代謝,而GAA可以通過調(diào)控嘌呤代謝、磷酸戊糖途徑來影響骨骼肌的代謝。(3)通過代謝組學(xué)研究發(fā)現(xiàn),日糧中添加CMH改變了育肥豬血漿中21種代謝物的含量,主要集中在與蛋白質(zhì)合成代謝、半乳糖代謝、支鏈氨基酸代謝、氮循環(huán)、�；撬岽x、脂代謝、谷胱甘肽代謝和膽汁酸合成等相關(guān)的代謝過程。日糧中添加GAA改變了育肥豬血漿中24種代謝物的含量,主要集中在與蛋白質(zhì)合成代謝、氮循環(huán)和尿素循環(huán)、脂代謝、支鏈氨基酸代謝、谷胱甘肽代謝、精氨酸和脯氨酸代謝以及牛磺酸代謝等相關(guān)的代謝過程。
[Abstract]:The energy metabolism of muscle quality and muscle after slaughter in closely related. Studies have confirmed that adding creatine monohydrate in fattening pigs slaughtered the grain (CMH) can improve the content of creatine in muscle, delayed onset muscle glycolysis after slaughter, thereby affecting meat quality. Guanidinoacetic acid (GAA) is the precursor of creatine in vivo. In animal body can be transformed into creatine. In this study, through the addition of CMH and GAA in the diet of pigs slaughtered, to explore the growth performances of fattening pigs, slaughter performance, meat quality, effects of creatine metabolism and synthesis of energy metabolism, and through egg proteomics and metabolomics analysis of differences of proteome and fertility metabolites in plasma and muscle of pigs, preliminary study on the action mechanism of.1 on CMH and GAA of fattening pig meat quality of fattening pig slaughter performance of CMH supplementation, affecting meat quality and energy metabolism. Choose 48 healthy The similar weight (about 90kg) of Duroc barrows, were randomly divided into two groups, with 3 replicates of 8 pigs per replicate. The control group was fed the basal diet, the test group was fed on the basal diet +0.8%CMH 14D. feeding period after the feeding trial, 2 pigs per replicate from close to the average weight of weight the (6 / treatment), after weighing the transport to slaughter workshop according to the process of slaughter slaughter sampling. The results showed that: compared with the control group, adding CMH of fattening pigs were not significantly affected eye muscle area, backfat thickness and lean rate (P0.05). Dietary supplementation of CMH can significantly improve the longissimus muscle pH_ (45min) (P0.05), reduce the drip loss and cooking loss (P0.05), L* value, a* value, b* value, crude fat and moisture, shear stress and longissimus muscle, have no significant effect on conventional nutrient contents of crude protein and ash (P0.05). Although the CMH of longissimus muscle the cohesive and elastic no 鏈夋樉钁楀獎鍝，

本文編號：1576495