本文選題：奶山羊　切入點：子宮內(nèi)膜上皮細胞　出處：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：本研究以奶山羊子宮內(nèi)膜上皮細胞(EEC)為研究對象,構(gòu)建雙熒光素酶報告載體驗證miR-182與NTS和TES的靶向關(guān)系,用Real-time PCR、Western Blot等方法研究miR-182對基因NTS、TES和Caspase-8、p38表達量的影響。構(gòu)建pcDNA3.1(+)過表達載體,研究NTS和TES的相互作用、對Caspase-8和p38蛋白表達量以及對子宮內(nèi)膜上皮細胞凋亡的影響。主要研究結(jié)果如下:1.驗證mi R-182與NTS和TES的靶向調(diào)節(jié)關(guān)系生物信息學(xué)預(yù)測發(fā)現(xiàn)奶山羊NTS基因3'UTR存在mi R-182靶位點,TES基因CDS區(qū)存在miR-182靶位點。構(gòu)建雙熒光素酶報告載體,分別與miR-182模擬物、Negative control(NC)共轉(zhuǎn)染到293T細胞中。結(jié)果表明,與對照組NC相比,miR-182模擬物顯著抑制了熒光素酶活性,表明miR-182通過與NTS-3'UTR相互作用導(dǎo)致熒光素酶活性降低(P0.05),與TES基因CDS區(qū)相互作用導(dǎo)致熒光素酶活性降低(P0.05)。據(jù)此,本研究初步鑒定NTS和TES為miR-182的靶基因。2.驗證mi R-182對NTS、TES、Caspase-8、p38表達量的影響采用Real-time PCR和Western Blot技術(shù)檢測NTS和TES基因的表達水平。結(jié)果表明,與對照組相比,miR-182在mRNA和蛋白水平均顯著抑制靶基因NTS和TES的表達(P0.05)。采用Western Blot技術(shù)發(fā)現(xiàn)mi R-182顯著增加了Caspase-8的蛋白表達量(P0.05),減少了p38的蛋白表達量(P0.05)。3.檢測NTS和TES對Caspase-8、p38表達量的影響構(gòu)建pcDNA3.1(+)-NTS和pcDNA3.1(+)-TES過表達載體并轉(zhuǎn)染EEC,采用Western Blot技術(shù)檢測Caspase-8和p38表達量,并與對照組相比。結(jié)果顯示過表達NTS和TES顯著降低了Caspase-8蛋白表達量(P0.05),增加了p38的蛋白表達量(P0.05)。這一結(jié)果與miR-182對Caspase-8、p38表達量的影響結(jié)果相反。4.驗證NTS和TES的相互作用和對EEC凋亡的影響將pcDNA3.1(+)-NTS和pcDNA3.1(+)-TES過表達載體轉(zhuǎn)染EEC,通過Real-time PCR和Western Blot技術(shù)檢測NTS和TES基因的表達水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)過表達NTS顯著抑制了TES mRNA和蛋白水平表達量(P0.05)。而過表達TES基因只減少了NTS蛋白的表達量(P0.05),對NTS mRNA沒有顯著影響(P0.05)。用流式細胞儀檢測pcDNA3.1(+)-NTS和pcDNA3.1(+)-TES對EEC凋亡的影響,結(jié)果表明NTS和TES均顯著抑制了EEC凋亡(P0.05)。以上結(jié)果表明,NTS和TES為miR-182的靶基因,mi R-182可能通過下調(diào)NTS和TES,上調(diào)Caspase-8而影響奶山羊子宮內(nèi)膜上皮細胞的凋亡。
[Abstract]:In this study, a double luciferase report vector was constructed to study the targeting relationship between miR-182 and NTS and TES in dairy goat endometrial epithelial cells (EECs). The effect of miR-182 on the expression of NTSnTES and Caspase-8 p38 was studied by Real-time PCR Western Blot. PcDNA3.1 () overexpression vector was constructed to study the interaction between NTS and TES. The main results are as follows: 1. To verify the targeted regulatory relationship between miR-182 and NTS and TES. Bioinformatics prediction found that the 3UTR of NTS gene of dairy goats exists mi R-182. There is a miR-182 target site in the CDS region of the tes gene. A double luciferase reporter vector was constructed. The results showed that the mimics of nmmiR-182 significantly inhibited luciferase activity in 293T cells compared with the control group (NC). The results showed that the activity of luciferase decreased by interaction of miR-182 with NTS-3'UTR, and the activity of luciferase decreased by interaction with CDS region of TES gene. In this study, NTS and TES were identified as target genes of miR-182. The effect of miR-182 on the expression of Caspase-8 p38 was detected by Real-time PCR and Western Blot techniques. Compared with the control group, pmiR-182 significantly inhibited the expression of target gene NTS and TES at both mRNA and protein levels. Using Western Blot technique, it was found that miR-182 significantly increased the protein expression of Caspase-8 and decreased the protein expression of p38. Detection of NTS and TES on Caspase-8p38 was carried out. PcDNA3.1 (Western Blot technique was used to detect the expression of Caspase-8 and p38). The results showed that overexpression of NTS and TES significantly decreased the expression of Caspase-8 protein, increased the expression of p38 protein and increased the expression of p38 protein. This result was contrary to the effect of miR-182 on the expression of Caspase-8 p38. 4. The interaction between NTS and TES was verified. Real-time PCR and Western Blot were used to detect the expression level of NTS and TES genes. The results showed that overexpression of NTS significantly inhibited the expression of TES mRNA and protein levels (P0.05). The expression of TES gene only reduced the expression of NTS protein (P0.05), but had no significant effect on NTS mRNA. Flow cytometry was used to detect the effect of pcDNA3.1 (pnts) and pcDNA3.1 (P0.05) on the apoptosis of EEC. The results showed that both NTS and TES inhibited EEC apoptosis significantly (P 0.05). The results indicated that the target genes of miR-182, TES and TES, might affect the apoptosis of endometrial epithelial cells of dairy goats by down-regulating NTS and tes and up-regulating Caspase-8.
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S827

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 田文儒,何劍斌,叢霞,曹榮峰,姜忠玲,宋學(xué)雄;產(chǎn)后奶牛子宮內(nèi)膜的掃描電鏡觀察[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2004年02期

2 田振;楊增明;;子宮內(nèi)膜接受性的建立和分子調(diào)控[J];動物學(xué)雜志;2008年04期

3 崔曉妮;陶爽;劉祥新;田文儒;曹榮峰;;基質(zhì)金屬蛋白酶在奶牛子宮內(nèi)膜組織中的表達[J];中國獸醫(yī)雜志;2014年06期

4 Watson E D;王應(yīng)安;;孕馬子宮內(nèi)膜的前列腺素合成抑制因子[J];國外獸醫(yī)學(xué).畜禽疾病;1992年03期

5 張素麗;張明;鄭鴻培;郭廣濤;;整合素在哺乳動物子宮內(nèi)膜“植入窗”期作用的研究進展[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2007年01期

6 王國卿;張乃生;郭夢堯;楊正濤;;子宮內(nèi)膜細胞外基質(zhì)研究進展[J];中國畜牧獸醫(yī);2009年11期

7 宋宇軒;曹斌云;王建剛;李勝;程雪妮;朱廣琴;;不同性腺激素水平對子宮內(nèi)膜細胞體外增殖的影響[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2006年10期

8 范瑞文,赫曉燕,董常生;生長因子β1(TGF β1)和孕酮對著床期子宮內(nèi)膜的調(diào)節(jié)作用[J];畜牧獸醫(yī)雜志;2003年05期

9 馬廣威;;一例馬鹿子宮內(nèi)膜腺瘤[J];特產(chǎn)研究;1990年01期

10 袁榮華;白薩日娜;曹貴方;;綿羊上皮細胞三種純化與培養(yǎng)方法的比較研究[J];畜牧與飼料科學(xué)(奶牛版);2006年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 王麗娜;;子宮內(nèi)膜血流與子宮內(nèi)膜容受性[A];婦科內(nèi)分泌與輔助生殖論壇論文集[C];2011年

2 陳貴安;王海燕;;子宮內(nèi)膜出血機理及修復(fù)[A];高泌乳素血癥和功能失調(diào)性子宮出血專題研討會論文集[C];2007年

3 辛廖冰;范盈盈;;絕經(jīng)后子宮內(nèi)膜增厚的臨床與病理分析[A];2012年浙江省婦產(chǎn)科學(xué)及圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會暨《婦產(chǎn)科常見疾病規(guī)范化治療新進展》及《圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)熱點追蹤》學(xué)習(xí)班論文集[C];2012年

4 林俊;阮菲;;子宮內(nèi)膜去除術(shù)[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議婦科內(nèi)鏡會場（婦科內(nèi)鏡學(xué)組）論文匯編[C];2012年

5 田文儒;何劍斌;叢霞;曹榮峰;姜忠玲;宋學(xué)雄;;產(chǎn)后奶牛子宮內(nèi)膜的掃描電鏡觀察[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2003年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2003年

6 周亮;王榮;李蓉;;妊娠和妊娠失敗患者在超排周期第10天子宮內(nèi)膜差異基因表達譜[A];第一屆中華醫(yī)學(xué)會生殖醫(yī)學(xué)分會、中國動物學(xué)會生殖生物學(xué)分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

7 馬彩輝;李予;王文軍;麥美琪;楊冬梓;陳向紅;張清學(xué);古少君;;體外受精-胚胎移植失敗者子宮內(nèi)膜整合素β3與細胞問隙連接蛋白43表達的研究[A];第二屆全國不育癥研討會論文匯編[C];2007年

8 張靜;劉莉;;絕經(jīng)期子宮內(nèi)膜增厚天然孕酮治療67例臨床觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會第三次全國絕經(jīng)學(xué)術(shù)會議暨絕經(jīng)相關(guān)問題學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2011年

9 尹素芳;陳曉娜;陳曉光;;取子宮內(nèi)膜組織190例病理性診斷研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國婦科腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

10 楊開選;徐煉;萬宇;宋波;何英;葉綠;吳秀麗;楊帆;孫亮;;418例子宮內(nèi)膜良性疾病會診結(jié)果的病理分析[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2007年學(xué)術(shù)年會暨第九屆全國病理大會論文匯編[C];2007年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 馮瑤邋記者 楊麗佳;子宮內(nèi)膜“搬家”到肺獲復(fù)原[N];健康報;2007年

2 海軍總醫(yī)院婦產(chǎn)科 王藹明 王明凱;子宮內(nèi)膜也會沙化[N];健康報;2013年

3 徐飛;子宮內(nèi)膜不安分 “游走”全身惹禍端[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2008年

4 上海市浦東新區(qū)公利醫(yī)院 中醫(yī)科 吳昆倉 主任醫(yī)師;子宮內(nèi)膜增厚的形成與控制[N];上海中醫(yī)藥報;2008年

5 庚萬煬;當(dāng)心：子宮內(nèi)膜亂跑[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2007年

6 韋立功 　 覃江萍;微波子宮內(nèi)膜消除術(shù)治療月經(jīng)過多[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

7 本報記者 王建影;子宮內(nèi)膜為何在子宮外瘋長[N];保健時報;2004年

8 趙藍韻;“長腿”的子宮內(nèi)膜[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2006年

9 河北省河間市人民醫(yī)院 程懷孟;經(jīng)期氣胸：子宮內(nèi)膜跑到胸腔[N];大眾衛(wèi)生報;2012年

10 滕成梅;子宮內(nèi)膜“亂走”怎么辦[N];中國醫(yī)藥報;2001年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 冉靜;鋅指轉(zhuǎn)錄因子ZEB1促進子宮內(nèi)膜EMT在胚胎著床的功能及機制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

2 鄭圣霞;月經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜干細胞移植治療重度宮腔粘連的臨床前期研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

3 許春燕;基于miR-135a調(diào)控作用探討歸腎丸治療腎虛—薄型子宮內(nèi)膜大鼠的機制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

4 周峰;低劑量米非司酮對人植入窗期子宮內(nèi)膜水通道蛋白1的影響[D];浙江大學(xué);2016年

5 包珊;功血雌激素誘導(dǎo)VEGF-MMPs途徑及其血清標(biāo)志物研究[D];南華大學(xué);2015年

6 Kamran Ullah;內(nèi)分泌紊亂和女性不孕：Phoenixin-14和雌激素水平的病理生理學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2017年

7 陽艷軍;子宮內(nèi)膜異位癥人體組織學(xué)模型構(gòu)建及內(nèi)異癥和非內(nèi)異癥患者子宮內(nèi)膜粘附特點分析[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2006年

8 路軍麗;連續(xù)聯(lián)合雌、孕激素補充治療中子宮內(nèi)膜的改變及監(jiān)測的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年

9 趙靜;骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療薄型子宮內(nèi)膜的實驗研究[D];中南大學(xué);2013年

10 潘曉玉;Claudin-3和claudin-4在子宮內(nèi)膜惡性轉(zhuǎn)化中的意義[D];山東大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 楊陽;內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)中CB1受體及水解酶FAAH在多囊卵巢綜合征患者子宮內(nèi)膜的表達與分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 王常燕;內(nèi)源性大麻素系列對不明原因性不孕患者種植窗期子宮內(nèi)膜的影響及其作用機制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 劉上飛;缺氧影響奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞OPN和cyclinG1的表達[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 賀田芳媛;凋膜止崩膏宮腔應(yīng)用對子宮內(nèi)膜癌前病變相關(guān)抑癌基因Rb2/pl30表達的影響[D];陜西中醫(yī)藥大學(xué);2015年

5 劉潔;缺氧調(diào)節(jié)奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞表達MUC1和S100A11的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 孫艷艷;GRIM-19在小鼠圍著床期子宮內(nèi)膜中表達及其作用的研究[D];山東大學(xué);2015年

7 趙永玲;促血管生成素評估IVF患者子宮內(nèi)膜血管形成及內(nèi)膜容受性[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

8 郭文娟;咖啡酸抗LPS誘導(dǎo)的犬子宮內(nèi)膜上皮細胞炎性損傷作用[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 李雪婷;薄型子宮內(nèi)膜治療的新進展[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2015年

10 鄭婷;腔內(nèi)理療對反復(fù)種植失敗患者子宮內(nèi)膜HOXA10及Emx2的影響[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2015年

，

本文編號：1567601