本文關(guān)鍵詞： 恒河猴 干擾素-γ 原核表達(dá) 生物學(xué)活性　出處：《中國獸醫(yī)科學(xué)》2017年03期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為構(gòu)建以恒河猴干擾素-γ為目的基因的原核表達(dá)重組質(zhì)粒并進(jìn)行免疫活性分析,獲得具有生物學(xué)活性重組IFN-γ蛋白。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)從恒河猴外周血單個核細(xì)胞(PBM C)擴增干擾素-γ基因,然后將其克隆至表達(dá)載體p ET32a(+)中,轉(zhuǎn)化BL21(D E3)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。SDS-PAG E電泳分析其可溶性,W estern-blot檢測純化后的重組蛋白,采用淋巴細(xì)胞增殖試驗檢測重組IFN-γ的活性。結(jié)果顯示,成功構(gòu)建恒河猴干擾素-γ原核表達(dá)重組菌,重組蛋白分子質(zhì)量約為35.4 ku,主要以包涵體形式存在。重組IFN-γ具有促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化增殖的生物學(xué)活性。結(jié)果表明,本試驗成功獲得了重組IFN-γ蛋白,表達(dá)量高且具有生物學(xué)活性,為重組IFN-γ治療恒河猴疾病奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to construct the prokaryotic expression plasmid of rhesus monkey interferon-緯 gene and analyze its immunological activity, The recombinant IFN- 緯 protein with biological activity was obtained. The IFN- 緯 gene was amplified from the peripheral blood mononuclear cells of rhesus monkey by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and cloned into the expression vector pET32a (). The recombinant protein was detected by soluble W estern-blot and the activity of recombinant IFN- 緯 was detected by lymphocyte proliferation test. The results showed that rhesus monkey IFN- 緯 prokaryotic expression strain was successfully constructed. The molecular weight of recombinant IFN- 緯 protein is about 35.4 ku.Recombinant IFN- 緯 has the biological activity of promoting lymphocyte transformation and proliferation. The results show that the recombinant IFN- 緯 protein has high expression and biological activity. It lays a foundation for the treatment of rhesus monkey disease by recombinant IFN- 緯.
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院;成都軍區(qū)疾病預(yù)防控制中心;
【基金】：公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(201303042) 國家自然科學(xué)基金項目(31272620) 國家重點研究發(fā)展計劃項目(2016YFD0501009)
【分類號】：S858.9

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本文編號：1553566