本文關(guān)鍵詞： 豬EP基因 非酶連接 丙酸誘導(dǎo) 原核表達(dá)　出處：《中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年05期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為進(jìn)一步體外研究EP1基因的生物學(xué)功能,本試驗(yàn)對(duì)EP1基因進(jìn)行了組織分布分析。以豬骨髓cDNA為模板克隆了豬EP1基因的開(kāi)放閱讀框,對(duì)克隆的基因序列進(jìn)行了序列分析,用非酶連接技術(shù)將此基因克隆至丙酸誘導(dǎo)型原核表達(dá)載體pBbB3a-His6-MBP-LIC中。用菌液PCR進(jìn)行陽(yáng)性克隆鑒定并測(cè)序,將測(cè)序鑒定正確的克隆菌液提取質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化至E.coli BL21(DE3)中。丙酸鈉誘導(dǎo)表達(dá)His6-MBP-EP1融合蛋白,并用Western blot進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示:本試驗(yàn)成功克隆了豬EP1基因,長(zhǎng)度為651bp,豬EP1基因在骨髓中的表達(dá)量很高;構(gòu)建了EP1丙酸誘導(dǎo)型原核表達(dá)載體pBbB3a-His6-MBP-EP1;His6-MBP-EP1融合蛋白在裂解菌液的上清中表達(dá),相對(duì)分子質(zhì)量為65560。結(jié)果表明,運(yùn)用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)EP1基因融合蛋白,為進(jìn)一步在體外開(kāi)展豬EP1基因生物學(xué)功能的研究提供基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to further study the biological function of EP1 gene in vitro , an open reading frame of EP1 gene was cloned from pig bone marrow cDNA . The cloned gene was cloned into E . coli BL21 ( DE3 ) . The expression of His6 - MBP - EP1 fusion protein was cloned into E . coli BL21 ( DE3 ) . The results showed that the EP1 gene was successfully cloned into E . coli BL21 ( DE3 ) .

【作者單位】： 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部動(dòng)物生化與營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：農(nóng)業(yè)部“948”重點(diǎn)計(jì)劃資助項(xiàng)目(2011-G35) 河南省重點(diǎn)科技攻關(guān)資助項(xiàng)目(112102310705)
【分類號(hào)】：Q78

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1538926