發(fā)布時間：2018-02-26 14:08

  本文關鍵詞： 豬鏈球菌2型 豬MoDC CD4+T細胞 炎癥風暴 Th亞型分化　出處：《華中農(nóng)業(yè)大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：豬鏈球菌病是由豬鏈球菌(Streptocuccus suis,SS)引起的對世界許多國家養(yǎng)豬業(yè)造成極大危害的人畜共患病。在已知的35種豬鏈球菌血清型中,毒性最強,研究最多的為豬鏈球菌2型(Streptocuccus suis serotype 2,SS2)。我國有兩次較大規(guī)模的2型豬鏈球菌病的爆發(fā),分別發(fā)生在江蘇省部分地區(qū)(1998)和四川省資陽地區(qū)(2005),不僅對養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失,還導致了數(shù)百人感染、數(shù)十人死亡。豬感染豬鏈球菌2型后在短時間內迅速出現(xiàn)腦膜炎、關節(jié)炎、肺炎等,嚴重的甚至死亡,表現(xiàn)出明顯的炎癥風暴癥狀。但目前對豬鏈球菌致病機理的研究多集中在腦膜腦炎的發(fā)生機制上,對豬鏈球菌侵入機體后如何導致炎癥風暴,從而致死動物或人還不是十分清楚。樹突狀細胞(Dendritic cells,DCs)是呈遞抗原能力最強的抗原提呈細胞(Antigen-presenting cells,APCs)。DC受不同類型抗原刺激后分泌不同類型的細胞因子,調節(jié)機體的炎癥反應、誘導CD4+T細胞向不同的方向定向分化,在非特異性免疫應答和特異性免疫應答中發(fā)揮重要作用。然而,豬的DC在豬鏈球菌感染后產(chǎn)生的炎癥風暴中是否發(fā)揮重要作用、以及發(fā)揮何種作用還少見報道。為了研究DC在豬鏈球菌感染導致炎癥風暴中的作用,本研究首先建立體外培養(yǎng)豬外周血單核細胞來源的樹突狀細胞(Monocyte-derived DCs,Mo DCs)的方法,依據(jù)樹突狀細胞共同特點,對目標細胞的形態(tài)、細胞膜表面標志、吞噬能力、刺激T淋巴細胞增殖能力進行檢測,結果得到高質量的Mo DC,為后續(xù)研究奠定了基礎。接下來用豬鏈球菌2型野生菌株SC19刺激Mo DC,檢測Mo DC分泌的細胞因子種類,重點考察促炎因子、抑炎因子、IL-12等的水平,為評價Mo DC在炎癥反應中的貢獻及定向誘導何種Th亞型細胞分化提供依據(jù)。最后,將Mo DC和CD4+T細胞混合在一起,用SC19刺激細胞混合物,獲得CD4+T細胞定向分化的結果,為闡明Mo DC在引發(fā)炎癥風暴中的作用提供進一步的依據(jù),主要研究內容及結果如下:(1)成功建立了體外培養(yǎng)豬外周血Mo DC的方法。采集豬前腔靜脈的外周血,通過Ficoll-Hypaque密度梯度離心法,先分離到豬的外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),再通過免疫磁珠分選法分離到高純度的CD14+的單核細胞,將CD14+的單核細胞用含有豬GM-CSF和豬IL-4的RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng),并進行細胞形態(tài)顯微鏡觀察、細胞膜表面標志流式檢測、吞噬中性紅能力檢測、刺激T淋巴細胞增殖能力的檢測,結果表明通過3~5d后得到大量高純度半懸浮的豬Mo DC。(2)用SC19刺激培養(yǎng)至5d的Mo DC,細胞流式表型分析顯示Mo DC的CD1和CD172a表達下降,吞噬中性紅的能力降低,刺激T淋巴細胞增殖能力增強,表明SC19可以刺激Mo DC的成熟,且Mo DC存在自發(fā)成熟的現(xiàn)象。受SC19刺激后,Mo DC分泌高水平IL-1β、IL-8、TNF-α、IFN-γ等促炎性細胞因子,分泌低水平IL-10、TGF-β抑炎性細胞因子,分泌很高水平的IL-12,其中IL-8和IL-12的分泌水平呈現(xiàn)明顯的SC19劑量依賴性。Mo DC分泌高水平IL-12的結果提示SC19刺激Mo DC后會誘導CD4+T向Th1亞型分化。(3)為進一步驗證SC19刺激Mo DC確實會誘導CD4+T向Th1亞型分化,將培養(yǎng)5d的Mo DC與新分離的CD4+T細胞混合,加入SC19刺激,17h后流式檢測Th亞型,結果顯示Th1亞型細胞數(shù)量上升比Th2亞型明顯;蛋白質芯片檢測混合細胞培養(yǎng)上清細胞因子,Th1效應性細胞因子IFN-γ明顯增加;表明SC19刺激的Mo DC誘導CD4+T向Th1亞型分化。以上研究結果提示:Mo DC在豬鏈球菌感染引發(fā)炎癥風暴中發(fā)揮重要作用,主要通過分泌高水平的促炎因子及IL-12、IL-12誘導分化出的Th1細胞及其分泌的細胞因子發(fā)揮作用。
[Abstract]:Streptocuccus cellulosum ( SS ) is the most poisonous animal in the world , which is caused by Streptocuccus cellulosum ( SS ) . Among the 35 kinds of swine streptococci which are known , the toxicity is the strongest , most of which is Streptocuccus cellulolytic 2 , 2 2 . In China , there are two large - scale outbreaks of type 2 swine streptococci , which occur in some parts of Jiangsu province ( 1998 ) and Ziyang area of Sichuan province ( 2005 ) . In order to study the role of DCs in the inflammatory response induced by S . S . infection , the results were as follows : ( 1 ) The peripheral blood mononuclear cells ( PBMCs ) were isolated from peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) of porcine peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) . The results suggested that the expression of IL - 1尾 , IL - 8 , TNF - 偽 , IFN - 緯 could stimulate the differentiation of CD4 + T to Th1 subtype after stimulated by SC19 . The results suggested that the expression of IL - 8 and IL - 12 induced CD4 + T to differentiate into Th1 subtype .

【學位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S858.28

【參考文獻】

相關期刊論文 前3條

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2 姚火春,陳國強,陸承平;豬鏈球菌1998分離株病原特性鑒定[J];南京農(nóng)業(yè)大學學報;1999年02期

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相關碩士學位論文 前1條

1 康超;感染豬鏈球菌2型后細胞因子的變化以及分泌核酸酶A的生物學研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2008年

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本文編號：1538334