發(fā)布時(shí)間：2018-02-26 14:08

  本文關(guān)鍵詞： 豬鏈球菌2型 豬MoDC CD4+T細(xì)胞 炎癥風(fēng)暴 Th亞型分化　出處：《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：豬鏈球菌病是由豬鏈球菌(Streptocuccus suis,SS)引起的對(duì)世界許多國(guó)家養(yǎng)豬業(yè)造成極大危害的人畜共患病。在已知的35種豬鏈球菌血清型中,毒性最強(qiáng),研究最多的為豬鏈球菌2型(Streptocuccus suis serotype 2,SS2)。我國(guó)有兩次較大規(guī)模的2型豬鏈球菌病的爆發(fā),分別發(fā)生在江蘇省部分地區(qū)(1998)和四川省資陽(yáng)地區(qū)(2005),不僅對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失,還導(dǎo)致了數(shù)百人感染、數(shù)十人死亡。豬感染豬鏈球菌2型后在短時(shí)間內(nèi)迅速出現(xiàn)腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、肺炎等,嚴(yán)重的甚至死亡,表現(xiàn)出明顯的炎癥風(fēng)暴癥狀。但目前對(duì)豬鏈球菌致病機(jī)理的研究多集中在腦膜腦炎的發(fā)生機(jī)制上,對(duì)豬鏈球菌侵入機(jī)體后如何導(dǎo)致炎癥風(fēng)暴,從而致死動(dòng)物或人還不是十分清楚。樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DCs)是呈遞抗原能力最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞(Antigen-presenting cells,APCs)。DC受不同類型抗原刺激后分泌不同類型的細(xì)胞因子,調(diào)節(jié)機(jī)體的炎癥反應(yīng)、誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞向不同的方向定向分化,在非特異性免疫應(yīng)答和特異性免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用。然而,豬的DC在豬鏈球菌感染后產(chǎn)生的炎癥風(fēng)暴中是否發(fā)揮重要作用、以及發(fā)揮何種作用還少見報(bào)道。為了研究DC在豬鏈球菌感染導(dǎo)致炎癥風(fēng)暴中的作用,本研究首先建立體外培養(yǎng)豬外周血單核細(xì)胞來(lái)源的樹突狀細(xì)胞(Monocyte-derived DCs,Mo DCs)的方法,依據(jù)樹突狀細(xì)胞共同特點(diǎn),對(duì)目標(biāo)細(xì)胞的形態(tài)、細(xì)胞膜表面標(biāo)志、吞噬能力、刺激T淋巴細(xì)胞增殖能力進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果得到高質(zhì)量的Mo DC,為后續(xù)研究奠定了基礎(chǔ)。接下來(lái)用豬鏈球菌2型野生菌株SC19刺激Mo DC,檢測(cè)Mo DC分泌的細(xì)胞因子種類,重點(diǎn)考察促炎因子、抑炎因子、IL-12等的水平,為評(píng)價(jià)Mo DC在炎癥反應(yīng)中的貢獻(xiàn)及定向誘導(dǎo)何種Th亞型細(xì)胞分化提供依據(jù)。最后,將Mo DC和CD4+T細(xì)胞混合在一起,用SC19刺激細(xì)胞混合物,獲得CD4+T細(xì)胞定向分化的結(jié)果,為闡明Mo DC在引發(fā)炎癥風(fēng)暴中的作用提供進(jìn)一步的依據(jù),主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:(1)成功建立了體外培養(yǎng)豬外周血Mo DC的方法。采集豬前腔靜脈的外周血,通過Ficoll-Hypaque密度梯度離心法,先分離到豬的外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),再通過免疫磁珠分選法分離到高純度的CD14+的單核細(xì)胞,將CD14+的單核細(xì)胞用含有豬GM-CSF和豬IL-4的RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng),并進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)顯微鏡觀察、細(xì)胞膜表面標(biāo)志流式檢測(cè)、吞噬中性紅能力檢測(cè)、刺激T淋巴細(xì)胞增殖能力的檢測(cè),結(jié)果表明通過3~5d后得到大量高純度半懸浮的豬Mo DC。(2)用SC19刺激培養(yǎng)至5d的Mo DC,細(xì)胞流式表型分析顯示Mo DC的CD1和CD172a表達(dá)下降,吞噬中性紅的能力降低,刺激T淋巴細(xì)胞增殖能力增強(qiáng),表明SC19可以刺激Mo DC的成熟,且Mo DC存在自發(fā)成熟的現(xiàn)象。受SC19刺激后,Mo DC分泌高水平IL-1β、IL-8、TNF-α、IFN-γ等促炎性細(xì)胞因子,分泌低水平IL-10、TGF-β抑炎性細(xì)胞因子,分泌很高水平的IL-12,其中IL-8和IL-12的分泌水平呈現(xiàn)明顯的SC19劑量依賴性。Mo DC分泌高水平IL-12的結(jié)果提示SC19刺激Mo DC后會(huì)誘導(dǎo)CD4+T向Th1亞型分化。(3)為進(jìn)一步驗(yàn)證SC19刺激Mo DC確實(shí)會(huì)誘導(dǎo)CD4+T向Th1亞型分化,將培養(yǎng)5d的Mo DC與新分離的CD4+T細(xì)胞混合,加入SC19刺激,17h后流式檢測(cè)Th亞型,結(jié)果顯示Th1亞型細(xì)胞數(shù)量上升比Th2亞型明顯;蛋白質(zhì)芯片檢測(cè)混合細(xì)胞培養(yǎng)上清細(xì)胞因子,Th1效應(yīng)性細(xì)胞因子IFN-γ明顯增加;表明SC19刺激的Mo DC誘導(dǎo)CD4+T向Th1亞型分化。以上研究結(jié)果提示:Mo DC在豬鏈球菌感染引發(fā)炎癥風(fēng)暴中發(fā)揮重要作用,主要通過分泌高水平的促炎因子及IL-12、IL-12誘導(dǎo)分化出的Th1細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子發(fā)揮作用。
[Abstract]:Streptocuccus cellulosum ( SS ) is the most poisonous animal in the world , which is caused by Streptocuccus cellulosum ( SS ) . Among the 35 kinds of swine streptococci which are known , the toxicity is the strongest , most of which is Streptocuccus cellulolytic 2 , 2 2 . In China , there are two large - scale outbreaks of type 2 swine streptococci , which occur in some parts of Jiangsu province ( 1998 ) and Ziyang area of Sichuan province ( 2005 ) . In order to study the role of DCs in the inflammatory response induced by S . S . infection , the results were as follows : ( 1 ) The peripheral blood mononuclear cells ( PBMCs ) were isolated from peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) of porcine peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) . The results suggested that the expression of IL - 1尾 , IL - 8 , TNF - 偽 , IFN - 緯 could stimulate the differentiation of CD4 + T to Th1 subtype after stimulated by SC19 . The results suggested that the expression of IL - 8 and IL - 12 induced CD4 + T to differentiate into Th1 subtype .

【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S858.28

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 汪道鑫;虞春華;葉穎俊;汪煒;;T淋巴細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年24期

2 姚火春,陳國(guó)強(qiáng),陸承平;豬鏈球菌1998分離株病原特性鑒定[J];南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);1999年02期

3 孫君重;肖文華;于力;;CD4~+ T淋巴細(xì)胞功能研究新進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2010年02期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 康超;感染豬鏈球菌2型后細(xì)胞因子的變化以及分泌核酸酶A的生物學(xué)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

，

本文編號(hào)：1538334