本文關(guān)鍵詞： 豬鏈球菌 PCR 血清型 毒力因子　出處：《南京農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：豬鏈球菌(Streptococcus suis,SS)是一種重要的人畜共患病病原,不僅能導(dǎo)致豬的腦膜炎和敗血癥等,還能引起人的腦膜炎和中毒性休克綜合癥等。豬鏈球菌常依其形態(tài)、生化特性、血清學(xué)特征來鑒定和分類,根據(jù)莢膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)抗原特性將豬鏈球菌分為33個血清型(1～31型,以及1/2和33型),另有部分未定型菌株存在。在世界不同地區(qū),由豬鏈球菌引起的臨床疾病的血清型也不同,主要為1、2、3、4、7、9型,其中,以2型為主。豬鏈球菌可寄生在健康豬群的扁桃體和上呼吸道,和發(fā)病豬成為該病主要的傳染源。根據(jù)其致病性的差異,豬鏈球菌可分為強(qiáng)毒株、弱毒株和無毒株,現(xiàn)一般根據(jù)毒力因子的分布來判斷菌株毒力,但目前還沒有明確的鑒別方法,動物實驗仍是檢驗菌株毒力強(qiáng)弱的現(xiàn)行方法。因此,本研究對廣東地區(qū)的豬鏈球菌進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查,為研究豬鏈球菌致病機(jī)理提供一定依據(jù)。1.豬鏈球菌33個血清型單重PCR鑒定方法的確定及其主要致病血清型2、7、9型多重PCR檢測方法的建立根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)合成豬鏈球菌33個血清型的鑒定引物,用31個血清型標(biāo)準(zhǔn)菌株的基因組分別對33對引物進(jìn)行特異性試驗,通過對退火溫度的摸索,成功確定無交叉反應(yīng)的33個血清型單重PCR分型的方法程序(2型和1/2型,1型和14型暫不能通過PCR方法鑒別)。并構(gòu)建19個血清型陽性對照質(zhì)粒。根據(jù)廣東地區(qū)豬鏈球菌的流行情況,成功建立了豬鏈球菌主要致病血清型2、7、9型多重PCR的檢測方法。特異性、敏感性試驗結(jié)果表明本研究建立的多重PCR檢測方法特異性好、敏感性高(最低可達(dá)到104CFU/ml);準(zhǔn)確性試驗和重復(fù)性試驗符合率均達(dá)100%。該方法成本低、效率高,適用于豬場鏈球菌病監(jiān)控和流行病學(xué)快速診斷。2.廣東地區(qū)豬鏈球菌的流行病學(xué)調(diào)查本研究采集了 488份健康豬鼻拭子和扁桃體樣品,對其中360份健康豬樣品進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)帶菌率為39.72%,未斷奶仔豬鼻拭子樣品中陽性率最高(68.00%);從488份健康豬樣品中共分離到68株SS,鑒定得到50株SS分布于16個血清型,包括16型(11.76%)、2型(8.82%)、29型(7.35%)等。另對實驗室保存的58株來自發(fā)病豬分離的SS,經(jīng)鑒定分離的40株SS共分布于10個血清型中,主要分布的血清型有3型(13.79%),7型和9型均占12.72%。結(jié)果表明,廣州及周邊地區(qū)SS廣泛存在于豬群中,其血清型分布也較廣(18個血清型);除2、7、9型外,3、16、19和29型在廣東也比較流行。健康豬和發(fā)病豬流行的主要血清型不盡相同,證實了廣州及周邊地區(qū)SS流行的復(fù)雜性。3.豬鏈球菌分離株主要毒力因子的分布及2型分離株的特性分析PCR檢測126株SS菌株中毒力相關(guān)基因mrp,epf,sly的分布。分離自健康豬的68株SS中,1株為mrp-/ef+/sly-/,6株mrp-/ef-/sly+/;病豬來源的58株SS中,mrp+/sly+/ef+和mrp-/sly+/ef+菌株各 2 株,16 株為mrp-/sly+/ef-,1株為mrp-sly-ef+。分離自病豬的2型菌株YN28和SS22,其PCR結(jié)果分別為mrp+/sly+/ef+、mrp-/sly+/ef+。以2型強(qiáng)毒株ZY05719和弱毒株T15分別為參考菌株(內(nèi)標(biāo)),通過斑馬魚模型評估YN28和SS22毒力水平,發(fā)現(xiàn)菌株按毒力強(qiáng)弱依次為ZY05719(1)YN28(0.13)T15(0)SS22(-0.16)。生長特性分析結(jié)果顯示,YN28 和 SS22分離株均在6 h進(jìn)入穩(wěn)定期,其對數(shù)生長期明顯優(yōu)先于參考菌株T15和ZY05719;穩(wěn)定期后的最高OD600的值也低于參考菌株。
[Abstract]:In order to study the pathogenic mechanism of swine streptococci , the author has established the methods for detecting the virulence of S.S . S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S . S.S .

【學(xué)位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S858.28

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