本文關鍵詞： 車前草多糖 新城疫 雞 T淋巴細胞 提取工藝 免疫增強劑　出處：《西南大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：近年來畜禽傳染病嚴重危害畜牧產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展,尤其是病毒性傳染病,迄今,疫苗預防是對其控制最重要的措施。許多疫苗依賴佐劑來增強抗原的免疫抗原性或改變宿主的保護性應答類型。佐劑是先于抗原或與抗原同時應用時能增強抗原物質免疫原性,增強機體免疫應答,或改變機體免疫應答類型的物質,單獨使用時一般無免疫原性。佐劑在免疫中的作用主要是提升機體免疫系統(tǒng)對抗原的免疫應答反應,包括增強免疫反應強度和反應的持久性。近年來,研究發(fā)現(xiàn)植物多糖具有免疫佐劑的作用,能夠增強疫苗的免疫效果,促進機體特異性免疫與非特異性免疫、細胞免疫與體液免疫。植物多糖類佐劑具有天然、低毒、無藥物殘留等優(yōu)點,在使用安全性方面具有優(yōu)勢。但目前能夠應用于生產(chǎn)實踐中的植物多糖類佐劑不多,尋找一種資源豐富的植物多糖類佐劑以滿足生產(chǎn)實踐需要迫在眉睫。車前草是車前草科植物,廣布全世界,有三屬約270種,在我國僅有車前屬,共18種。車前草在我國分布極廣,是一味傳統(tǒng)中藥,具有清熱、涼血、解毒、利尿等功效。現(xiàn)代藥理學的研究表明,車前草含有豐富的生物活性成分,如多糖類、黃酮類、熊果酸及苷類等。多糖是車前草發(fā)揮生物活性的主要物質。Berit等(1995)對車前草中具有生物活性的多糖進行分離,并探明其部分結構特征發(fā)現(xiàn),有L-阿拉伯糖(20%),D-半乳糖(28%),D-葡萄糖(6%),D-甘露糖(2%),L-鼠李糖(4%),D-葡萄糖酸(31%)及少量D-木糖和炭藻糖,主要以B-1,4連接為主鏈,2和3位含側鏈。目前關于車前草多糖作為免疫增強劑的研究顯有報道。本課題采用車前草多糖作為新城疫疫苗佐劑,研究車前草多糖的免疫增強作用。1.車前草多糖提取純化工藝及生物學活性的研究采用超聲輔助提取法提取車前草多糖,根據(jù)單因素試驗,篩選出影響多糖提取的因素及水平,通過均勻設計方法進行因素及水平的優(yōu)化,確定最佳提取工藝為：超聲時間60min、溫度60攝氏度、料液比1：30,提取率為75.88mg/g。對提取的車前草粗制多糖進行純化,采用三氯乙酸法脫蛋白,脫蛋白率為52.1%,采用活性炭脫色,脫色率為82.3%。對車前草理化性質的分析：車前草多糖為黃褐色粉末狀物質；可溶于水、稀酸、稀堿；不溶于乙醇、石油醚、丙酮、正丁醇等有機溶劑；含有還原糖：不含淀粉、單糖和二糖;車前草多糖溶液PH為7.8。車前草多糖具有體外清除自由基的作用,車前草多糖濃度70μg/ml時對·OH~的清除率為41.1%：濃度為125μg/ml時對O2~·清除率為37.2%;濃度為160μg/mll時對NO2’·清除率為72.5%。2.車前草多糖對雛雞生長增重、生理生化指標及免疫器官指數(shù)的影響用車前草多糖溶液連續(xù)6天飼喂雛雞,對照組飼喂等量生理鹽水,并于給藥后第5(D5)、10 (D10)、15 (D15)、20 (D20)、28 (D28)天,采樣進行生長增重、血常規(guī)、生理生化指標、免疫器官臟器指數(shù)測定及免疫器官組織學觀察。結果顯示：隨著日齡增加,在D10、D15、D20、D28天,車前草多糖組雛雞體重分別為214.35g、359.71g、633.44g、826.52g極顯著的高于空白對照組；在給藥后第D 5-D15天車前草多糖組RBC(1.84～2.45×1012/L)顯著高于空白組RBC(1.40-2.14x1012/L),(P0.05)；在給藥后第D28天車前草多糖組WBC(258.8×109/L)顯著高于空白組BC (128.1×109/L), (P0.05);在給藥后第D10～D28天,車前草多糖組GOT(131.9～27.57IU/L) 和 GPT (8.53～16.99IU/L)顯著或極顯著地高于空白對照組GOT(27.2-19.67IU/L)和GPT (2.58～5.87IU/L), (P0.05, P＜0.01);在D5-D28天車前草多糖組AKP(10.47～10.15IU/L)和PCa (1.59～1.01 mmol/ml)與空白對照組AKP (7.54～3.4IU /L)和PCa(1.31～1.07 mmol/ml)差異不顯著：在D5-D28天車前草多糖組胸腺指數(shù)(2.04：-0.28-2.93-0.23)、脾臟指數(shù)(1.2±0.14～1.90±0.12)與法氏囊指數(shù)(4.11±0.46～5.98±0.25)顯著或極顯著地高于空白對照組胸腺指數(shù)(1.38±0.24-2.40±0.31)、脾臟指數(shù)(1.06+0.32～1.52±0.28)與法氏囊指數(shù)(2.54±0.77～4.47±0.29),(P0.05,P0.01)；觀察脾臟組織切片時發(fā)現(xiàn),給藥后D5-D20天,車前草多糖組的雛雞脾臟紅髓淋巴細胞、漿細胞和巨噬細胞均較對照組多;觀察胸腺組織切片時發(fā)現(xiàn),給藥后D10～D20天,車前草多糖組的胸腺小葉面積均大于對照組；觀察法氏囊組織切片時發(fā)現(xiàn),給藥后D10-D28天時車前草多糖組的腔上囊小節(jié)顯著大于對照組。以上結果證明車前草多糖能夠促進雛雞生長增重,促進器官發(fā)育及提高免疫水平。3.車前草多糖對新城疫疫苗免疫效果的影響將320羽1日齡雛雞隨機分為7組,即：雞新城疫(ND)疫苗免疫組、ND疫苗+車前草多糖(5Cmg/ml)組、ND疫苗+車前草多糖(25mg/ml)組、ND疫苗+車前草多糖(12.5mg/ml)組,同時設立ND疫苗+黃芪多糖(1.5g/m1)組、ND疫苗+地塞米松(2.5mg/ml)組和健康組為對照,于首次注射后第7(D7)、14 (D14)、21(D21)、35 (D35)天,每組隨機抽取雛雞采樣,測定臟器指數(shù)、血凝抑制抗體效價、外周血T淋巴細胞增殖率及外周血T淋巴細胞CD4+/CD8+的比值。臟器指數(shù)的結果顯示：車前草多糖50m-ml劑量組胸腺指數(shù)(6.45±0.24～3.07±0.17)、脾臟指數(shù)(3.12±0.11～2.05±0.11)與法氏囊指數(shù)(7.66±0.093～3.31±0.13)及黃芪多糖組胸腺指數(shù)(6.07±0.56～3.24±0.22)、脾臟指數(shù)(3.31±0.42～2.11±0.16)與法氏囊指數(shù)(8.06±0.09～3.45±0.16)顯著或極顯著的高于ND免疫組胸腺指數(shù)(4.23±0.13～2.77±0.12)、脾臟指數(shù)(2.28±0.11～1.83±0.12)與法氏囊指數(shù)(5.86±0.45～2.97±0.12),(P0.05,P0.01)�？贵w效價的結果顯示：車前草多糖50mg/ml (11.25～9.50)、25mg/ml(10.25～8.75)、12.5mg/ml(10.00～8.50)劑量組及黃芪多糖組(11.25～9.50)在D14～D28極顯著的高于ND免疫組(8.75～6.75),(P0.01)；地塞米松組(5.33～5.00)在D14～D35極顯著的低于ND免疫組(8.75～6.75),(P0.01)。淋巴細胞轉化率的結果顯示：車前草50mg/ml劑量組(2.1733±0.042～2.0623±0.061)及黃芪多糖組(2.0678±0.059～2.0267±0.099)在D7～D28天,T淋巴細胞轉化率均極顯著的高于ND疫苗組(1.8967±0.031-1.7213±0.084),(P0.01)；地塞米松組(1.5633±0.045-1.5723±0.045)在D7～D21極顯著的低于ND免疫組(1.8967±0.031-1.7213±0.084),(P0.01)。CD4+/CD8+比值的結果顯示：車前草多糖50mg/ml劑量組(1.9186±0.035-1.8013±0.028)在D7-D35天CD4+/CD8+的比值極顯著或顯著的高于ND疫苗組(1.6417±0.02～1.3507±0026),(P0.01,P0.05)；車前草多糖25mg/ml(2.0347±0.035-1.7573±0.028)、12.5mg/ml劑量組(2.070±0.061～1.7487±0.02)和黃芪多糖組(2.0263±0.043-1.7620±0.03)在D14～D35天CD4+/CD8+的比值極顯著高或顯著高于ND疫苗組(1.5867±0.04-1.3507±0026),(P0.01,P0.05)；：車前草多糖50mg/n-劑量組(1.9186±0.035～2.0697±0.036)在D7～D21天CD4+/CD8+的比值顯著的高于黃芪多糖組(1.7710±0.006～1.7593±0.05),(P0.05)；地塞米松組在D7～D35天顯著的低于ND疫苗組(1.6417±0.02～1.3507±0026),(P0.01)。以上結果證明車前草多糖能夠提高ND疫苗的免疫效果。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S853.7

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 王守現(xiàn);劉宇;趙爽;許峰;耿小麗;劉華;秦俊哲;孟莉莉;;平菇多糖提取工藝中脫脂方法研究[J];北方園藝;2010年17期

2 魏炳棟;于維;陶浩;陳群;;黃芪多糖對1～14日齡肉仔雞生長性能、臟器指數(shù)及抗氧化能力的影響[J];動物營養(yǎng)學報;2011年03期

3 李知敏,王伯初,周菁,彭亮;植物多糖提取液的幾種脫蛋白方法的比較分析[J];重慶大學學報(自然科學版);2004年08期

4 蘇玉順;李艷君;趙方振;周婷婷;范國榮;;紫外-可見分光光度法在植物多糖含量測定中的應用[J];光譜實驗室;2011年03期

5 夏道宗;劉杰爾;陳佩佩;;車前草總黃酮清除自由基及對小鼠氧化損傷的保護作用[J];科技通報;2009年06期

6 陰月,高明哲,袁昌魯,張振秋;車前子鎮(zhèn)咳祛痰有效成分的實驗研究[J];遼寧中醫(yī)雜志;2001年07期

7 董而博;三種車前緩瀉作用的研究[J];遼寧中醫(yī)雜志;1995年03期

8 田龍;;米糠多糖的超聲強化提取研究[J];糧食與飼料工業(yè);2008年06期

9 董杰明,袁昌魯;車前草及芒苞車前草化學成分及其形態(tài)學研究[J];遼寧中醫(yī)學院學報;2002年03期

10 肖懷秋;李玉珍;;車前草粗多糖提取及生物學活性研究[J];食品與發(fā)酵科技;2009年03期

，

本文編號：1529064